不同咀嚼负荷对幼兔髁突软骨内印度豪猪蛋白-人甲状旁腺激素相关蛋白通路表达的影响

目的分析不同咀嚼负荷作用下,幼兔髁突软骨内印度豪猪蛋白(Ihh)-人甲状旁腺激素相关蛋白(PThrP)通路表达的差异性,探讨咀嚼应力负荷对髁突软骨Ihh-PThrP信号通路的影响。方法选取10d龄幼兔48只,随机分为硬食组和软食组,分别喂以同种颗粒状(硬食)和粉状(软食),于饲养的第2、4、6、8周处死。采用苏木精-伊红(HE)染色、免疫组织化学、免疫印迹、实时定量荧光聚合酶链反应检测Ihh和PThrPmRNA和蛋白的动态变化。结果HE染色显示硬食组髁突软骨厚度高于软食组的厚度;第2、4、6、8周,Ihh蛋白、PThrP蛋白和mRNA表达量在两组中呈递减趋势;软食组中Ihh和PThrP蛋白以及mRNA表达量显著低于硬食组。结论较低的咀嚼负荷会造成髁突软骨生长因子Ihh和PThrP分泌减少,Ihh-PThrP通路表达迟缓,软骨发育受阻碍;适当的咀嚼负荷对髁突的正常发育有至关重要的作用。

机械应力改变致印度豪猪蛋白在早期骨关节炎软骨下骨的表达

目的研究关节不稳导致的机械应力改变引起的早期骨关节炎软骨下骨的印度豪猪蛋白（Ihh）表达情况，为阐述其在骨关节炎致病中的重要作用提供依据。方法大鼠分为实验组和对照组各15只。实验组切除右膝内侧半月板及内侧副韧带，对照组仅切开关节囊。于术后1、2、4周取右膝关节标本，采用免疫组化及免疫荧光技术分析关节软骨下骨破骨细胞Ihh的表达情况。结果术后1、2周，与对照组比较，实验组软骨下骨区检测到大量的Ihh强阳性多核巨细胞；术后4周实验组、对照组均未检测到Ihh阳性细胞。术后1、2、4周，实验组阳性区域平均光密度（A）分别为（0．351±0．086）、（0．303±0．026）、（0．092±0．033）；对照组平均A分别为（0．153±0．017）、（0．176±0．013）、（0．136±0．014）；术后1、2周两组比较差异有统计学意义（P〈0．5）；术后4周两组比较差异无统计学意义（P〉0．5）。以破骨细胞的标志蛋白Trap与Ihh进行免疫荧光双重染色实验表职Ihh强阳性多核巨细胞为破骨细胞。结论软骨下骨破骨细胞Ihh的表达可能在早期创伤性骨关节炎致病机制中起了重要作用。

Smo蛋白在人结肠癌中的表达及其与新生血管的关系

目的研究豪猪蛋白(Hedgehog)信号途径中Smo蛋白在人结肠癌组织中的表达,初步探讨Smo与结肠癌血管生成的关系。方法用免疫组化方法研究人结肠癌组织中Smo蛋白的表达;同时用CD34单克隆抗体标记结肠癌组织切片中新生血管,计算微血管密度(micro-vascular density,MVD),并统计Smo蛋白的表达与MVD的关系。结果在总共39例结肠癌标本中,Smo阳性24例,阴性15例,阳性率61.54%;MVD平均值68.70±11.65,Smo阳性组MVD均值71.25±12.56,Smo阴性组MVD均值64.05±8.88,两组统计分析差别有统计学意义(t检验,P<0.05)。结论Smo蛋白在人结肠癌中活化,并参与了结肠癌的发生发展。促进新生血管的生成是其可能的机制之一。

生长期兔颞下颌关节盘前移位对髁突软骨内Ihh和PTHrP表达的影响

目的:研究颞下颌关节盘前移位对生长期兔髁突软骨印度豪猪蛋白(Ihh)和甲状旁腺相关蛋白(PTHrP)表达的影响,探讨关节盘前移位与下颌骨髁突生长发育之间的关系。方法:取3个月龄日本大耳白兔21只,建立颞下颌关节盘前移位动物模型,分别于建模后4、8、12周处死取材,观察髁突软骨组织学变化,并通过免疫组织化学方法检测Ihh、PTHrP在髁突软骨中的表达与定位。结果:关节盘移位后4周,髁突软骨结构轻度紊乱;8周时,髁突前部软骨形态结构发生显著改变;12周时,软骨正常结构丧失进一步加剧。关节盘移位后4周,可见Ihh、PTHrP在增殖带深层细胞内明显表达,8周、12周时在髁突深层软骨细胞内表达。结论:颞下颌关节盘前移位导致髁突软骨结构进行性病理性损害,Ihh和PTHrP在盘移位后髁突软骨病理性改变的过程中发挥重要作用,提示关节盘前移位可能通过Ihh-PTHrP负反馈信号通路对生长期髁突软骨内成骨过程产生影响。

Ihh-PTHrP负反馈信号通路对髁突软骨内成骨作用的研究现状

临床研究发现,颌面部发育畸形的患者,尤其是Ⅱ类错患者,常同时伴有颞下颌关节盘前移位,而青少年期颞下颌关节盘前移位与颌面部发育畸形存在密切关系。其原因可能与关节盘移位导致髁突表面的应力分布发生改变有关,但具体机制尚不明确。印度豪猪蛋白(Ihh)-甲状旁腺相关蛋白(PTHrP)信号通路是调节骨骺生长板软骨细胞增殖、分化、肥大和矿化的重要负反馈轴,在软骨内成骨中发挥着关键的作用。同时,Ihh是机械应力信号向生物信号转导的重要媒介,介导机械应力信号向刺激软骨生长的生物信号转化。本文对Ihh-PTHrP负反馈信号通路对下颌骨髁突软骨内成骨作用的研究现状作一综述。

免疫组织化学技术检测新生乳鼠颞下颌关节软骨基质与Ihh表达的实验研究

目的:探讨颞下颌关节发育的分子生物学机制。方法:选取5只BAL B/C新生乳鼠,取头,常规固定、脱钙、脱水、包埋,采用免疫组织化学技术检测颞下颌关节CollagenⅡ(ColⅡ)、CollagenⅠ(ColⅠ)、Aggrecan和印度豪猪蛋白(Ihh)的表达。结果:颞下颌关节盘中,ColⅠ和ColⅡ表达阳性,Ihh表达强阳性,Aggrecan未见明显表达;髁状突软骨中,ColⅡ表达阳性,Aggrecan表达强阳性,Ihh和ColⅠ少量表达。结论:ColⅡ、ColⅠ、Aggrecan和Ihh正常表达,在颞下颌关节形成与发育过程中发挥重要的作用。

Indian hedgehog在软骨内成骨和骨关节炎中作用的研究进展

Hedgehog基因,最初是在研究果蝇的基因突变时发现的,该基因突变的果蝇胚胎酷似受惊刺猬,因此而得名。目前研究表明：在脊椎动物中存在音速豪猪蛋白（sonic hedgehog,Shh）,沙漠豪猪蛋白（deserthedgehog,Dhh）和印度豪猪蛋白（Indian hedgehog,Ihh）三种Hedgehog蛋白亚型。其中Shh参与胚胎肢芽不对称性发育和中枢神经系统的发育过程;Dhh是生殖系统和外周神经系统发育过程中重要的调控因子;Ihh则在软骨内成骨和骨关节炎（OA）的发生发展中发挥着重要的作用。本文主要关注其在软骨内成骨和OA中对软骨细胞的作用。

Indian hedgehog在软骨细胞力学信号转导作用的研究进展

软骨细胞力学是近几年生物力学发展的新领域,是细胞工程和组织工程学的基础,细胞的形态、结构、功能及其新陈代谢、分化都与力学有着密切的关系。力学对维持软骨细胞生物学功能必不可少,机械应力联合其他化学分子共同调节关节软骨的生理和病理变化[1]。软骨细胞通过细胞骨架、细胞外基质、离子通道、细胞膜受体等来感受力学信号,并且结合基因表达来调控自身的代谢活动[2]。近年来研究发现Indian hedgehog为力学敏感性的基因[3]。本文主要对软骨细胞力学生物学转导机制以及与Indian hedgehog信号通路进行综述。

Indian Hedgehog表达量在大鼠骨关节炎早期变化的研究

目的 (1)探究大鼠创伤后骨关节炎(osteoarthritis,OA)早期进展中印度豪猪(Indian hedgehog,Ihh)基因表达量的变化;(2)探讨可否通过检测Ihh基因的表达量早期预测OA。方法 SD大鼠80只分8组:1个伪手术组(Sham)和7个实验组(ACLT),依次为1天组、3天组、7天组、2周组、4周组、2个月组、3个月组。RT-PCR检测关节软骨细胞Hh信号通路基因及基质金属蛋白酶13、十型胶原的m RNA表达水平;免疫组化检测关节软骨内Ihh蛋白的表达;ESLIA检测血清中Ihh蛋白浓度;印度墨水染色、番红O染色观察关节软骨退变情况和糖胺多糖含量。结果 Ihh的m RNA相对表达量先升后降,7天组(6.58±2.94)比Sham组(1.03±0.27)、1天组(1.71±1.01)、3个月组(2.40±1.81),明显升高(P<0.05);免疫组化示Ihh蛋白在3天组、7天组呈褐黄色颗粒,且数目超过细胞总数的50%。血清中Ihh浓度同样先升后降,3天组(0.53±0.24)ng/ml比3个月组(0.17±0.06)ng/ml明显升高(P<0.05),7天组(0.57±0.32)ng/ml比Sham组(0.21±0.08)ng/ml、3个月组(0.17±0.06)ng/ml明显升高(P<0.05);3个月组基质金属蛋白酶13和十型胶原的m RNA相对表达量[(19.1±9.52)、(8.13±5.12)]较其它组明显升高(P<0.05);印度墨水、番红O染色和X线可见1个月内关节完整光滑,3个月组关节严重破损,纤维增生。结论 (1)大鼠OA进展过程中Ihh基因的表达量在早期有明显的升高阶段;(2)血清中Ihh蛋白含量有望成为早期发现OA的便利手段。

基于Hedgehog信号通路探讨血清NGF、BGLAP及PGS在颅脑损伤后加速骨折愈合的作用机制

目的探讨Hedgehog信号通路、血清神经生长因子(NGF)、前列腺素(PGS)、骨钙素(BGLAP)在颅脑损伤后加速骨折愈合中的作用和相互关系。方法选取2017年1月至2020年1月在河北省邢台市第三医院就诊的138例因车祸导致的新鲜闭合性股骨干骨折患者,根据是否伴有颅脑损伤分为研究组(n=60)和对照组(n=78)。比较两组术后4、8、12周的骨痂面积和骨折愈合时间,采用ELISA检测术后1 d、术后1、4、8、12周血清NGF、BGALP、PGS、印度豪猪蛋白(Ihh)和锌指转录因子1(Gli1)水平。采用Pearson相关性分析探究上述各因素之间的相关性。结果研究组愈合时间明显短于对照组[(11.69±1.47)周vs.(14.02±1.83)周,P<0.05]。两组术后4、8、12周骨痂面积比较,研究组明显大于对照组(P<0.05)。术后1 d至术后12周,研究组血清Ihh、Gli1表达水平均明显高于对照组(P<0.05),血清NGF、PGS、BGLAP表达水平亦明显高于对照组(P<0.05)。Pearson相关性分析表明,血清NGF、BGLAP、PGS水平与骨痂面积呈正相关(P<0.05),血清Ihh、Gli1水平与血清NGF、BGLAP、PGS水平及骨痂面积也呈正相关(P<0.05)。结论颅脑损伤后Hedgehog信号通路相关蛋白上调,可能与NGF、PGS、BGLAP表达升高存在密切联系,该通路可能参与颅脑损伤后骨折加速愈合。

Ihh和PTHrP信号分子在猪跟腱止点的表达及意义

目的观察猪跟腱止点各层组织结构特点及Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅱ型胶原(ColⅡ)、Ⅹ型胶原(ColⅩ)、纤维软骨层细胞外基质以及印度豪猪蛋白(Ihh)和甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)在跟腱止点中的表达分布和定位情况。方法根据跟腱止点的组织结构层次的不同,利用HE染色、番红O/固绿染色、天狼猩红染色以及免疫组织化学技术,分别观察跟腱止点各层组织结构特点,通过免疫组织化学染色观察ColⅠ、ColⅡ、ColⅩ、纤维软骨层细胞外基质以及Ihh和PTHr P在跟腱止点中的表达分布和定位情况。结果显微镜下可清晰观察到猪跟腱止点解剖层次,主要分为4个层次,波浪状的腱纤维、纤维软骨层(也称非钙化软骨层)、钙化软骨层和骨。跟腱止点组织Ⅰ、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色证实纤维软骨层细胞外基质主要由ColⅠ、ColⅡ构成。跟腱止点组织中Ihh和PTHrP免疫组织化学染色呈阳性表现,Ihh和PTHrP阳性区域主要集中在跟腱止点的纤维软骨层和钙化层。同时可以观察到在肥大软骨细胞细胞浆中出现浓聚现象。结论跟腱止点纤维软骨层由纤维软骨细胞构成,是跟腱止点的重要结构,Ihh和PTHrP在跟腱止点纤维软骨层和钙化层的定位表达,提示两者在跟腱止点的形成过程发挥重要的调节作用。