企鹅珍珠贝非致死性DNA提取方法的研究

在企鹅珍珠贝遗传育种研究中,为保证在贝类存活的条件下获得其DNA信息,采用企鹅珍珠贝(Pteria penguin)贝壳边缘和足丝研究非致死性DNA提取方法。不同于贝壳获取过程中会对实验贝体产生一定损伤,足丝是无生命的细胞外纤维束,其获取方法简单且属于非损伤性取样,对实验贝几乎无伤害,是潜在的获取具足丝贝类基因组DNA的优良材料。本研究采用脱钙与未脱钙两种处理方式,并结合海洋动物组织基因组DNA提取试剂盒法及有机溶剂萃取法(OSE)提取贝壳及足丝DNA,对获得的贝壳DNA及足丝DNA进行PCR扩增。结果显示,足丝有机溶剂法(OSE法)提取效率显著高于贝壳DNA提取方法,脱钙足丝与未脱钙足丝的DNA提取效率无显著差异,分别为(0.0167±0.0029)μg/mg和(0.0161±0.0031)μg/mg。未脱钙足丝的OSE法获得的DNA产物纯度最优,A260/280值为1.4000±0.0400,A260/230值显著高于贝壳DNA及足丝DNA的其他提取方法,为0.9100±0.0800。除脱钙贝壳OSE法外,其他所有DNA提取方法均可用于后续PCR扩增,测序结果表明产物DNA来源于企鹅珍珠贝,且贝壳及足丝取样方式均未导致企鹅珍珠贝死亡。综上,未脱钙足丝的OSE法优于其他方法,研究结果可为非致死性DNA提取提供参考,也为企鹅珍珠贝的选择育种研究及珍稀贝类保护奠定前期基础。