不同产地不同物候期平贝母的贝母乙素含量研究

目的:探讨平贝母中贝母乙素含量随产地和物候期变化的规律。方法:用高效液相色谱法产测定贝母乙素含量。结果:贝母乙素含量随产地和物候期的变化有差异。结论:贝母乙素的含量随物候期的变化呈现一定的规律性。

贝乐欣胶囊中贝母甲素和贝母乙素的含量测定

采用薄层扫描法测定贝乐欣胶囊中贝母甲素和贝母乙素的含量。结果表明贝母甲素和贝母乙素的线性范围分别为1 99～ 9 95 μg和 2 0 0～ 10 0 0 μg ,贝乐欣胶囊中贝母甲素和贝母乙素的回收率分别为 10 1 5 %和 98 5 %。用此方法测定了 3批样品中贝母甲素和贝母乙素的含量。

高效液相色谱法分析小鼠血浆中贝母乙素及其药代动力学研究

目的 研究小鼠腹腔注射贝母乙素的药代动力学。方法 反相液相色谱法定量分析。血浆样品经乙醚提取后 ,柱前用2 ,4 二硝基苯肼衍生 ,分析色谱柱 :HypersilC18,流动相 :乙腈 乙酸铵 (0 .1mol·L-1,pH =5 ) (39∶6 1) ,UV375nm检测。结果 在0 .114～ 1.2 6 μg·ml-1区间 ,标准曲线线性方程为Y =0 .12 6X - 0 .0 0 13,相关系数r=0 .992 3,平均日间、日内精密度RSD分别为5 .85 %和 5 .30 %。平均相对回收率为 96 .5 %。结论 小鼠注射贝母乙素 (1.5mg·kg-1)的血药浓度 时间曲线符合一室开放模型 ,t1/ 2 为 0 .84h ,cmax为 0 .87μg·ml-1,tmax为 0 .15h。

薄层扫描法测定蛇胆川贝液中贝母甲素、贝母乙素含量

应用薄层扫描法测定了蛇胆川贝液中贝母甲素、贝母乙素的含量，平均回收率分别为９７．４８％，９９．２５％。并对其它一些贝母制剂的贝母甲素，贝母乙素进行了薄层检识。

HPLC法测定市售贝母中贝母乙素含量

目的 为了选择贝母乙素含量较高的贝母原材料。方法 建立了 HPL C法分析贝母原材料中贝母乙素含量。贝母生药粉用氨水 - 95 %乙醇 (1∶ 5 )混合液提取 ,柱前用 2 ,4-二硝基苯肼 (DNPH)衍生 ,衍生化条件 5 0℃下反应 30 min。分析色谱柱 :Hypersil C1 8ODS2 ,流动相 :CH3CN- 10 0 mmol/ L CH3COONH4(4 1∶ 5 9,p H=5 .0 ) ,流速为1.2 m L/ min。U V375 nm检测。结果 4种市售贝母中东贝母的贝母乙素含量最高。结论 方法灵敏 ,重现性好 ,样品用量少 。

贝母素乙通过诱导G0/G1期阻滞抑制结肠癌细胞的增殖

目的:探讨贝母素乙对结肠癌HCT116细胞增殖的抑制作用及其分子机制。方法:利用不同浓度的贝母素乙处理人结肠癌细胞HCT116和正常结肠上皮细胞CCD841 CON,通过CCK-8法和结晶紫染色法检测贝母素乙对HCT116和CCD841 CON细胞增殖活力的影响,流式细胞术和WB法检测贝母素乙对HCT116细胞周期及其细胞周期相关蛋白表达的影响。构建HCT116移植瘤裸鼠模型和AOM/DSS结肠癌小鼠模型,观察贝母素乙对小鼠模型肿瘤生长和OS的影响,免疫组化法和WB法检测对移植瘤或肿瘤组织中细胞周期相关蛋白CDK4、CDK6和cyclin D1表达的影响。结果:贝母素乙可显著抑制结肠癌HCT116细胞的增殖能力(P<0.01),诱导HCT116细胞周期G0/G1期阻滞(P<0.01),降低CDK4、CDK6和cyclin D1的蛋白表达水平(均P<0.01)。荷瘤小鼠实验结果显示,贝母素乙(0.75 mg/kg)显著抑制HCT116细胞移植瘤的生长并延长荷瘤裸鼠的OS(P<0.05或P<0.01),降低AOM/DSS模型小鼠的体质量、延长OS、减少癌变肠组织的肿瘤个数和肿瘤体积,下调肿瘤组织中CDK4、CDK6和cyclin D1的蛋白表达(P<0.01或P<0.05)。结论:贝母素乙通过下调CDK4、CDK6和cyclin D1的表达水平,引起细胞周期G0/G1期阻滞,从而抑制结肠癌HCT116细胞的增殖。

贝母素乙通过调控PI3K/Akt信号通路诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡

目的:探究贝母素乙(Peiminine)对乳腺癌细胞MCF-7细胞凋亡的影响及其可能作用机制。方法:采用不同浓度贝母素乙或联合PI3K抑制剂LY294002干预MCF-7细胞,MTT法检测细胞增殖能力;Hoechst 33258染色和Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡情况;JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位变化;Western blotting检测细胞中PI3K(p110α)、Akt、p-Akt(ser473)、Bad、Bax、Bcl-2、cleaved-Caspase-3以及线粒体和胞浆中细胞色素C(Cyt C)等蛋白表达水平。结果:贝母素乙可呈时间-浓度依赖性抑制MCF-7细胞增殖,诱导细胞出现凋亡形态改变,促进细胞凋亡,并降低线粒体膜电位,上调细胞中Bad、Bax、cleaved-Caspase-3及胞浆中Cyt C蛋白表达水平,下调PI3K(p110α)、p-Akt、Bcl-2和线粒体中Cyt C蛋白表达水平,而Akt蛋白表达水平无显著变化。然而,联合LY294002干预可增强贝母素乙对MCF-7细胞凋亡的促进作用。结论:贝母素乙可诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡,可能是通过阻断PI3K/Akt信号通路介导的线粒体凋亡途径实现的。

贝母提取物中贝母甲素和贝母乙素的大鼠肠吸收特性

本文考察了浙贝母醇提浸膏中贝母甲素和贝母乙素的肠吸收特征以及配伍影响。建立了HPLC-ELSD测定肠灌流液中贝母甲素和贝母乙素含量测定的方法,并进行了方法学研究。采用大鼠在体单向灌流法,重量法校正实验结果,分别考察灌流速度、灌流液pH、性别差异、胆总管结扎、药物浓度、不同肠段、维拉帕米和配伍苦杏仁、甘草对贝母甲素、乙素肠吸收的影响。结果表明:灌流速度、灌流液pH和浓度可影响贝母甲素和贝母乙素吸收,pH 6.8和pH 7.4时吸收有显著差异(P<0.01);灌流液中药物浓度升高,贝母甲素和贝母乙素的肠吸收参数呈下降趋势,低浓度和中、高浓度间吸收速度常数(Ka)和表观渗透系数(Papp)有显著性差异(P<0.01);贝母甲素和贝母乙素在雌鼠肠道中的吸收显著低于雄鼠(P<0.01);胆管结扎可显著影响贝母甲素和贝母乙素的吸收(P<0.05),贝母甲素和贝母乙素在各个肠段均有一定吸收,且无显著性差异(P>0.05);加入维拉帕米对浸膏中贝母甲素和贝母乙素的吸收无显著性影响(P>0.05);苦杏仁和甘草与贝母在常用配伍剂量下皆能显著降低贝母甲素和贝母乙素的肠吸收(P<0.01),药材单煎后组合与合煎两组间二者吸收无显著性差异(P>0.05)。实验结果说明,贝母甲素和贝母乙素的体内吸收特征基本一致,二者在整个肠道均有一定吸收,并具有显著的性别差异,吸收机制可能有主动吸收或易化扩散参与;配伍苦杏仁、甘草可降低其肠吸收速度。

贝母素乙对肺纤维化大鼠肺组织MEK1/2、ERK1/2及其磷酸化的影响

目的探讨贝母素乙对博莱霉素致肺纤维化大鼠肺组织MEK1/2、ERK1/2及其磷酸化的影响。方法大鼠麻醉后,经气管软骨环间隙向心端穿刺,注入博莱霉素5mg/kg建立大鼠肺纤维化模型,假手术组大鼠在同样麻醉条件下气管内注入等容积生理盐水。术后第2天开始每天灌胃给药,假手术组和模型组给予蒸馏水,地塞米松组给予等容积地塞米松蒸馏水溶液,贝母素乙A组、B组分别给予等容积贝母素乙5、2.5mg/kg蒸馏水溶液。灌胃28d后,麻醉并颈动脉取血后处死大鼠,肺组织固定,包埋切片,常规脱蜡,行免疫组化SABC法检测肺组织MEK1/2、ERK1/2水平,Western blot法检测p-MEK1/2、pERK1/2水平。结果贝母素乙可显著降低肺纤维化大鼠的肺组织ERK1/2、MEK1/2水平(P<0.01),与地塞米松作用相似(P>0.05),贝母素乙A组、B组之间比较未见明显差异(P>0.05)。贝母素乙可以显著降肺纤维化大鼠的肺组织p-MEK1/2、p-ERK1/2水平(P<0.01),较地塞米松更为显著(P<0.01),贝母素乙B组较贝母素乙A组更为显著(P<0.01)。结论贝母素乙减轻博莱霉素致肺纤维化大鼠的MEK1/2、ERK1/2及其磷酸化水平可能是其抗纤维化的作用机理之一。

基于近红外光谱的浙贝母中贝母素甲和贝母素乙含量快速检测方法的建立

目的:应用近红外光谱分析技术,建立快速检测浙贝母中贝母素甲和贝母素乙含量的新方法。方法:用HPLC-ELSD法测定贝母素甲和贝母素乙含量,采用偏最小二乘法(PLS),建立NIR光谱与HPLC-ELSD法测定值之间的多元校正模型,并预测浙贝母样品中贝母素甲和贝母素乙的总量。结果:所建立校正模型内部交叉验证的相关系数(R)为0.97870,校正均方差(RMSECV)为0.00876,内部验证均方差为0.00967;经外部验证,预测值与真实值的相关系数为0.9702。结论:说明模型对预测集样品具有一定的预测能力,基于近红外光谱技术快速检测浙贝母中贝母甲素和贝母乙素是可行的。

HPLC-MS法测定中药材浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的含量

目的:建立高效液相色谱-质谱法定量测定中药材浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的含量方法。方法:采用ZORBAX Eclipse XDB-C_(18)(150 mm×2.1 mm,5μm),以甲醇-10 mmol·L^(-1)醋酸铵溶液(40:60)为流动相,流速为0.2 ml·min^(-1),用质谱检测器检测。结果:贝母素甲乙的线性范围分别为0.94～28.13 mg·L^(-1)(r=0.997)和0.95～28.37 mg·L^(-1)(r=0.998 0),平均回收率分别为105.3%(RSD4.6%),106.4%(RSD4.8%)(n=6)。结论:方法灵敏、准确,非常适用于检测含量低,无紫外吸收的化学成分。

贝母素甲、贝母素乙对4T1乳腺癌细胞炎性微环境的干预调节作用

目的:研究贝母素甲、乙对4T1乳腺癌细胞的干预抑制及对其肿瘤炎性微环境的调节作用。方法:CCK-8检测贝母素甲、乙对4T1细胞抑制率;ELISA法检测炎性相关因子TGF-β、VEGF、MMP-9、MCP-1的分泌量;RT-PCR检测TGF-β、VEGF、MMP-9mRNA表达情况。结果:贝母素甲、乙对4T1乳腺癌细胞具有抑制作用;贝母素甲、乙可分别下调4T1细胞TGF-β,VEGF、MCP-1及MMP-9分泌量(P<0.05,P<0.01);贝母素甲、乙可降低4T1细胞TGF-β、VEGF等mRNA表达(P<0.05,P<0.01)。结论:贝母素甲、乙对4T1乳腺癌细胞具有显著抑制作用,可通过抑制炎性相关因子的释放调节微环境。

贝母素乙增加胃癌细胞对阿霉素化疗敏感性的研究

目的探讨贝母素乙对人胃癌BGC823细胞的化疗增敏作用及其相关机制。方法采用MTT、结晶紫染色法观察贝母素乙与阿霉素联用对BGC823细胞的生长抑制作用。Western blotting法检测贝母素乙与阿霉素联用作用于BGC823细胞后增殖相关蛋白的表达。结果贝母素乙与阿霉素联合应用可使BGC823细胞的抑制率增加(P<0.05),阿霉素的细胞毒性增加,化疗药物的IC50值降低(P<0.01),明显影响BGC823细胞的增殖。Western blotting结果显示,CyclinD1、P-AKT的表达均下调。结论贝母素乙可增加BGC823细胞对阿霉素的敏感性,降低P-AKT、CyclinD1的表达。

HPLC-ELSD测定浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的含量

目的建立HPLC-ELSD测定浙贝母中贝母素甲、贝母素乙含量的方法,并对市售17批样品进行考察,制定含量限度。方法色谱柱:Agilent Hypersil BDS-C18(4.0 mm×250 mm,5 μm);流动相:乙腈-水-二乙胺(70:30:0.03),流速:0.8 mL·min-1; ELSD参数:漂移管温度为85℃,载气流速为2.2 L·min-1。结果贝母素甲、贝母素乙线性范围分别为47.02-1 003.46.92- 1 001 mg·L-1,平均回收率分别为102.7%,98.7%,RSD分别为2.1%,2.5%(n=6)。通过市售17批样品中贝母素甲、贝母素乙含量的测定,制定了不同规格浙贝母的含量限度。结论此法简便,快捷,结果可靠,可用于浙贝母的质量评价,为2005年版药典中浙贝母质量标准的修订提供了依据。

分子印迹-化学发光传感器测定贝母属类样品中的贝母素乙

以贝母素乙为模板分子,环氧树脂为功能单体、聚乙二醇1000为致孔剂、二乙烯三胺为交联剂,通过逐步聚合法合成了贝母素乙的分子印迹聚合物。在流动注射化学发光仪的通路中,放置贝母素乙MIP,创建新型的流通式贝母素乙的分子印迹化学传感器,用于检测贝母属类样品中的贝母素乙。对贝母素乙的吸附量和结合位点用Scatchard方法进行了详细分析。方法的线性范围为4.0×10^（-5）～2.0×10^（-3）mol/L,检出限为3.0×10^（-6）mol/L。对3.0×10^（-4）mol/L贝母素乙溶液的浓度平行测定了11次,RSD为2.3%。此方法可成功应用于川贝母、浙贝母和暗紫贝母中贝母素乙含量的测定,加标回收率为96.5%～103.6%,分析结果令人满意。

不同生长年限平贝母中贝母素甲和贝母素乙的含量测定

目的:比较一、二、三年生平贝母鳞茎中贝母素甲、贝母素乙的含量。方法:采用Agilent TC-C18(4.6×250mm,5μm)色谱柱,以甲醇-乙腈-0.5%醋酸溶液(8∶19∶73)为流动相,流速为0.6mL·min-1,蒸发光散射检测器检测。结果:三年生以内平贝母鳞茎中贝母素甲、贝母素乙含量随生长年限的增加而增加。结论:从贝母素甲、贝母素乙含量来看,三年生平贝母药材质量优于一、二年生平贝母药材。

HPLC-ELSD同时测定新疆贝母中贝母辛和贝母素乙的含量

目的：建立同时测定新疆贝母中贝母辛和贝母素乙含量的方法。方法：采用HPLC-ELSD法,色谱柱为Comatex C18（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相为乙腈-0.02%三乙胺水溶液,梯度洗脱,流速为1.0 mL/min;ELSD参数：漂移管温度90℃,雾化室温度35℃,载气压力46.2 psi。结果：贝母辛和贝母素乙线性范围分别为2.380~23.800μg（r1=0.9996）和1.440~14.400μg（r2=0.9997）,平均回收率分别为99.91%和100.15%。结论：该方法稳定、可靠、简便,适用于新疆贝母的质量控制。

十几种贝母及其制剂中贝母素甲、乙及西贝碱的检验方法和品质的研究与进展

目的对十几种贝母及其制剂中有效成分贝母素甲、贝母素乙及西贝碱等的含量测定方法进行了归纳总结。方法主要包括高效液相色谱法、气相色谱法、质谱联用法、薄层扫描法、差热分析法、总生物碱测定法。结果与结论为贝母类药材品质评价,含贝母药材制剂的质量控制研究,及《中国药典》的质量标准制订提供参考依据。

高效液相色谱法测定浙贝母配方颗粒中贝母素甲和贝母素乙的含量

目的建立测定浙贝母配方颗粒中贝母素甲、贝母素乙含量的高效液相色谱法方法。方法采用DIKMA,Diamand-C_(18)(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水-二乙胺(70∶30∶0.03)为流动相;以蒸发光散射检测器为检测器。理论板数按贝母素甲峰计算应不低于2 000。流动相流速为1 m L·min^(-1),柱温为30℃。结果贝母素甲进样量在1.141 7~6.850 2μg范围内呈良好的线性关系(r=0.999 9),贝母素乙进样量在0.856 3~3.681 8μg范围内呈良好的线性关系(r=0.999 8)。平均回收率分别为贝母素甲103.7%、贝母素乙100.0%,RSD分别为1.8%,2.4%。结论该方法准确度、重复性好,能较准确地评价浙贝母配方颗粒的质量。

贝母素乙诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的分子机制研究

目的:探讨贝母素乙对人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的影响及其分子机制。方法:采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazdium,MTT)法检测贝母素乙对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制率;采用荧光染色和流式细胞术研究贝母素乙对细胞凋亡的影响;通过电子显微镜观察贝母素乙处理的人肝癌SMMC-7721细胞超微结构变化情况;Western blot方法检测贝母素乙处理后细胞凋亡相关蛋白的表达。结果:贝母素乙对肝癌SMMC-7721细胞的生长有显著抑制作用,24 h半数致死剂量(IC50)为0.625μg/mL。SMMC-7721细胞经不同浓度贝母素乙处理后早期凋亡和晚期凋亡细胞数量均升高。随着药物浓度的增加,细胞线粒体膜电位依次增大,SMMC-7721细胞的Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的活性依次升高;经贝母素乙作用后Bcl-2的蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高;procapas-3和procapas-8的蛋白表达降低,Caspas-3和Caspas-9的表达升高。结论:贝母素乙可通过线粒体途径诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡。