HPLC测定不同产地平贝母中贝母甲素的含量

目的建立平贝母中贝母甲素含量的反相离子对HPLC测定方法。方法采用Kromasil ODS C18（4．6mm×250mm，5μm）色谱柱，流动相为甲醇-水（69：31），内含7．5mmol·L—SDS，pH=4．5±0．1；体积流量：0．5mL·mi^-1；柱温：27℃：检测波长为208nm，并与TIE对照测定了10种不同产地平IA母中贝母甲素的含量。结果贝母甲素在0．515，3．09μg与峰面积线性关系良好（r=0．9997），平均加样回收率为98．54％，ILSD为2．12％（n=5）。不同产地平贝母中贝母甲素含量有一定的差异，其中黑龙江省的铁力和辽宁省的新宾平贝母中贝母甲素含量较高。而其他吉林省的8个产地贝母甲素含量均较低。结论本方法灵敏度高，而且简便、准确、重现性好，可用于平贝母的内在质量控制。

贝乐欣胶囊中贝母甲素和贝母乙素的含量测定

采用薄层扫描法测定贝乐欣胶囊中贝母甲素和贝母乙素的含量。结果表明贝母甲素和贝母乙素的线性范围分别为1 99～ 9 95 μg和 2 0 0～ 10 0 0 μg ,贝乐欣胶囊中贝母甲素和贝母乙素的回收率分别为 10 1 5 %和 98 5 %。用此方法测定了 3批样品中贝母甲素和贝母乙素的含量。

薄层扫描法测定 参贝北瓜口服液中贝母甲素的含量

为建立参贝北瓜口服液中贝母甲素的薄层扫描测定法。采用MERCK硅胶G板 (HPTLC板 ) ,以苯 乙醚 乙酸乙酯 甲醇 二乙胺 (3∶3∶4∶0 .5∶1)为展开剂 ,稀碘化铋钾、亚硝酸钠溶液显色 ,在 5 0 0nm处 ,以 65 0nm为参比波长对贝母甲素进行线性扫描 ,外标两点法定量。结果 :贝母甲素在 0 .62 1μg～ 2 .691μg范围内面积积分值与点样量间线性关系良好 ,r =0 .9962。回收率为 10 2 .1% ,RSD =3 .5 5 % ,(n=6)。

暗紫贝母在不同组培时期贝母甲素动态积累研究

目的:通过HPLC法定量测定中药材暗紫贝母在不同组培时期的贝母甲素含量。方法:采用CosmosilODS2C18(5μm,250mm×4.6mm),以水—乙腈—二乙胺(体积比:70:30:0.03)为流动相,流速为1.0ml·min-1。结果:贝母甲素在1～10μg与峰面积的对数值呈线性关系,各批次回收率较好,且其各RSD值稳定。结论:本实验能够较好测定暗紫贝母在不同组培时期贝母甲素的动态积累量,并能确定其最佳积累时期。

贝母甲素联合抗生素抑制多重抗生素耐药菌的实验研究

目的:了解贝母甲素联合抗生素抑制多重抗生素耐药菌的作用并探讨其机制。方法:(1)用试管法测定贝母甲素与抗生素联合抑菌作用;(2)采用流式细胞仪分析贝母甲素对受试菌株内柔红霉素浓度的影响。结果:(1)贝母甲素联合抗生素,对铜绿假单胞菌普遍具有抑制作用;(2)贝母甲素联合优立新、青霉素对受试菌株抑菌效果明显优于与其他类抗生素联合;(3)经贝母甲素处理的耐药菌,菌体内荧光强度高于未经贝母甲素处理株。结论:贝母甲素与抗生素合用具有协同增效作用,量效关系尚待进一步研究。

贝母素甲改善脂多糖联合烟雾诱导小鼠慢性阻塞性肺疾病的机制

目的探讨贝母素甲(PME)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)小鼠的作用和相关机制。方法将80只小鼠随机分为4组(每组20只):对照组、PME组、COPD组和治疗组。使用脂多糖联合烟雾诱导小鼠COPD动物模型。通过组织病理学、超微结构、小鼠肺组织湿/干重比值分析PME对COPD模型鼠结构的影响;ELISA和Western blotting分析PME对肺组织中炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6和IL-1β表达的影响;二氢乙锭(DHE)染色和Western blotting分析PME对肺组织中氧化应激反应的影响;Western blotting分析PME对核因子κB(NF-κB)通路以及核因子2相关因子2(Nrf2)通路相关蛋白表达的影响。结果与COPD组相比,PME治疗可明显减轻小鼠肺组织的损伤和减少炎症细胞数量,降低肺组织湿/干重比。与对照组相比,COPD组小鼠的肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6及IL-1β水平明显增加,经PME治疗后小鼠肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6及IL-1β水平明显降低。另外,与对照组相比,COPD组小鼠肺组织中TNF-α和IL-1β水平显著升高,经PME治疗后小鼠肺组织中TNF-α和IL-1β蛋白水平明显下降。免疫组织化学和Western blotting实验显示,与对照组相比,COPD组SOD2水平明显降低,而PME治疗后能够提高超氧化物歧化酶(SOD)蛋白水平。对肺组织丙二醛(MDA)含量分析发现,与COPD组比较,PME治疗后明显抑制COPD小鼠肺组织中MDA的产生。Western blotting结果显示,PME治疗后能够阻止肺组织中的NF-κB抑制蛋白(IκBα)磷酸化以及NF-κB p65向细胞核转移,PME处理后的小鼠肺组织中Nrf2及其主要下游靶点血红素加氧酶1(HO-1)的表达明显升高。结论PME能够抑制COPD小鼠体内的炎症和氧化应激反应,改善脂多糖联合烟雾诱导肺组织损伤,其机制可能与激活Nrf2通路和抑制NF-κB通路相关。

贝母素甲对SKOV3细胞氟尿嘧啶敏感性的影响

目的探讨贝母素甲对人卵巢癌SKOV3细胞氟尿嘧啶敏感性的影响。方法细胞随机分为空白对照组,贝母素甲低、中、高剂量组,氟尿嘧啶组,联合用药组,MTT法检测贝母素甲、氟尿嘧啶单用及两者联用后细胞活性,细胞划痕实验检测贝母素甲各剂量组细胞迁移和增殖能力,流式细胞术检测贝母素甲各剂量组细胞周期变化,Western blot法检测贝母素甲各剂量组PCNA、Bax、Bcl-2表达及联合用药组cleaved-caspase-3表达。结果随着贝母素甲、氟尿嘧啶浓度升高,细胞活性下降,两者联用后抑制效果较单用更显著(P<0.05);随着贝母素甲浓度升高,它对细胞迁移和增殖的抑制效果也增加,细胞被阻滞于S/G_(2)期,PCNA表达降低(P<0.05),Bax/Bcl-2比值有所升高,但无显著差异(P>0.05)。与单用比较,贝母素甲、氟尿嘧啶联用后cleaved-caspase-3表达升高(P<0.05)。结论贝母素甲能通过阻滞SKOV3细胞周期进展来有效提高它对氟尿嘧啶的敏感性。

贝母提取物中贝母甲素和贝母乙素的大鼠肠吸收特性

本文考察了浙贝母醇提浸膏中贝母甲素和贝母乙素的肠吸收特征以及配伍影响。建立了HPLC-ELSD测定肠灌流液中贝母甲素和贝母乙素含量测定的方法,并进行了方法学研究。采用大鼠在体单向灌流法,重量法校正实验结果,分别考察灌流速度、灌流液pH、性别差异、胆总管结扎、药物浓度、不同肠段、维拉帕米和配伍苦杏仁、甘草对贝母甲素、乙素肠吸收的影响。结果表明:灌流速度、灌流液pH和浓度可影响贝母甲素和贝母乙素吸收,pH 6.8和pH 7.4时吸收有显著差异(P<0.01);灌流液中药物浓度升高,贝母甲素和贝母乙素的肠吸收参数呈下降趋势,低浓度和中、高浓度间吸收速度常数(Ka)和表观渗透系数(Papp)有显著性差异(P<0.01);贝母甲素和贝母乙素在雌鼠肠道中的吸收显著低于雄鼠(P<0.01);胆管结扎可显著影响贝母甲素和贝母乙素的吸收(P<0.05),贝母甲素和贝母乙素在各个肠段均有一定吸收,且无显著性差异(P>0.05);加入维拉帕米对浸膏中贝母甲素和贝母乙素的吸收无显著性影响(P>0.05);苦杏仁和甘草与贝母在常用配伍剂量下皆能显著降低贝母甲素和贝母乙素的肠吸收(P<0.01),药材单煎后组合与合煎两组间二者吸收无显著性差异(P>0.05)。实验结果说明,贝母甲素和贝母乙素的体内吸收特征基本一致,二者在整个肠道均有一定吸收,并具有显著的性别差异,吸收机制可能有主动吸收或易化扩散参与;配伍苦杏仁、甘草可降低其肠吸收速度。

贝母甲素抑制AML-KG-1a细胞增殖与诱导细胞凋亡研究

[目的]通过体外培养和流式细胞术,检测贝母甲素对人急性髓系白血病细胞KG-1a增殖抑制、诱导凋亡和细胞周期分布的影响。[方法]利用MTT法检测贝母甲素对KG-1a的增殖抑制作用,计算抑制率;以流式细胞术检测贝母甲素对细胞凋亡及周期分布的影响。[结果]1与对照组比较,贝母甲素作用于KG-1a细胞24h、48h、72h的吸光度(OD)值均明显降低(P<0.05),且细胞生长抑制率与药物浓度呈正相关。2与对照组比较,贝母甲素能够提高KG-1a细胞晚期凋亡及总凋亡率,差异均有统计学意义(P=0.003,P=0.001)。3贝母甲素干预KG-1a后,细胞周期发生明显变化,G0/G1期细胞比例降低、G2/M期细胞比例升高、凋亡率升高(P=0.001,P=0.002,P=0.046)。[结论 ]贝母甲素具有抑制具有LSC特性的KG-1a细胞增殖、降低G0/G1期细胞比例、升高G2/M期细胞比例、诱导细胞凋亡效应。

基于近红外光谱的浙贝母中贝母素甲和贝母素乙含量快速检测方法的建立

目的:应用近红外光谱分析技术,建立快速检测浙贝母中贝母素甲和贝母素乙含量的新方法。方法:用HPLC-ELSD法测定贝母素甲和贝母素乙含量,采用偏最小二乘法(PLS),建立NIR光谱与HPLC-ELSD法测定值之间的多元校正模型,并预测浙贝母样品中贝母素甲和贝母素乙的总量。结果:所建立校正模型内部交叉验证的相关系数(R)为0.97870,校正均方差(RMSECV)为0.00876,内部验证均方差为0.00967;经外部验证,预测值与真实值的相关系数为0.9702。结论:说明模型对预测集样品具有一定的预测能力,基于近红外光谱技术快速检测浙贝母中贝母甲素和贝母乙素是可行的。

HPLC-MS法测定中药材浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的含量

目的:建立高效液相色谱-质谱法定量测定中药材浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的含量方法。方法:采用ZORBAX Eclipse XDB-C_(18)(150 mm×2.1 mm,5μm),以甲醇-10 mmol·L^(-1)醋酸铵溶液(40:60)为流动相,流速为0.2 ml·min^(-1),用质谱检测器检测。结果:贝母素甲乙的线性范围分别为0.94～28.13 mg·L^(-1)(r=0.997)和0.95～28.37 mg·L^(-1)(r=0.998 0),平均回收率分别为105.3%(RSD4.6%),106.4%(RSD4.8%)(n=6)。结论:方法灵敏、准确,非常适用于检测含量低,无紫外吸收的化学成分。

贝母素甲、贝母素乙对4T1乳腺癌细胞炎性微环境的干预调节作用

目的:研究贝母素甲、乙对4T1乳腺癌细胞的干预抑制及对其肿瘤炎性微环境的调节作用。方法:CCK-8检测贝母素甲、乙对4T1细胞抑制率;ELISA法检测炎性相关因子TGF-β、VEGF、MMP-9、MCP-1的分泌量;RT-PCR检测TGF-β、VEGF、MMP-9mRNA表达情况。结果:贝母素甲、乙对4T1乳腺癌细胞具有抑制作用;贝母素甲、乙可分别下调4T1细胞TGF-β,VEGF、MCP-1及MMP-9分泌量(P<0.05,P<0.01);贝母素甲、乙可降低4T1细胞TGF-β、VEGF等mRNA表达(P<0.05,P<0.01)。结论:贝母素甲、乙对4T1乳腺癌细胞具有显著抑制作用,可通过抑制炎性相关因子的释放调节微环境。

贝母素甲对多药耐药人白血病细胞活力和凋亡的影响及机制

目的观察贝母素甲对多药耐药白血病人细胞K562/A02活力与细胞凋亡的影响,探讨活性氧(ROS)在此过程中的作用。方法将K562/A02细胞成3组,药物组分别加入终浓度为100、200、400μmol/L的贝母素甲;NAC预处理组采用5 mmlo/L ROS清除剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)预处理后,再加入终浓度为400μmol/L的贝母素甲;对照组加等体积的药物溶解介质RPMI1640培养基。采用MTT法检测各组细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,紫外分光光度法检测细胞内ROS、GSH水平。结果与对照组比较,药物组细胞活力均降低(P<0.05或<0.01)、细胞内ROS水平增高(P均<0.01)、GSH水平下降(P均<0.01)、细胞凋亡率上升(P均<0.05),NAC预处理组的细胞活力、细胞凋亡率和ROS水平无明显变化(P均>0.05)。结论贝母素甲可抑制多药耐药人白血病细胞K562/A02的细胞活力、诱导其凋亡;其机制是通过诱导细胞ROS爆发,引起GSH水平下降,从而逆转多药耐药的发生。

细胞氧化-还原状态影响贝母素甲对人白血病细胞K562细胞增殖的抑制

目的探讨贝母素甲对人白血病细胞K562细胞增殖的抑制效应,以及细胞氧化-还原状态失衡对此作用的影响。方法在体外培养K562细胞。运用四唑盐(MTT)比色法分析不同浓度贝母素甲(50、100、200、400、800μmol/L)处理24 h对K562细胞增殖的影响,并用Bliss法计算药物对细胞的半数抑制浓度(IC_(50))。采用分光光度法分别分析药物处理对K562细胞内活性氧(ROS)与谷胱甘肽(GSH)含量的影响。结果贝母素甲能剂量依赖性的抑制K562细胞的增殖,IC_(50)为238μmol/L。贝母素甲能诱导K562细胞产生ROS,下调其细胞内GSH含量,破坏细胞的氧化-还原平衡状态。活性氧清除剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)与GSH的预处理可以抑制贝母素甲的上述效应。结论贝母素甲可抑制K562细胞增殖,细胞氧化-还原失衡可能在这一过程中起重要作用。

HPLC-ELSD测定浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的含量

目的建立HPLC-ELSD测定浙贝母中贝母素甲、贝母素乙含量的方法,并对市售17批样品进行考察,制定含量限度。方法色谱柱:Agilent Hypersil BDS-C18(4.0 mm×250 mm,5 μm);流动相:乙腈-水-二乙胺(70:30:0.03),流速:0.8 mL·min-1; ELSD参数:漂移管温度为85℃,载气流速为2.2 L·min-1。结果贝母素甲、贝母素乙线性范围分别为47.02-1 003.46.92- 1 001 mg·L-1,平均回收率分别为102.7%,98.7%,RSD分别为2.1%,2.5%(n=6)。通过市售17批样品中贝母素甲、贝母素乙含量的测定,制定了不同规格浙贝母的含量限度。结论此法简便,快捷,结果可靠,可用于浙贝母的质量评价,为2005年版药典中浙贝母质量标准的修订提供了依据。

贝母素甲抑制人乳腺癌细胞MCF-7/TAM增殖及其对细胞凋亡的影响

目的:探讨贝母素甲抑制耐三苯氧胺人乳腺癌细胞MCF-7/TAM的增殖及其机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色分析法检测贝母素甲作用于MCF-7/TAM细胞后的抑制率;用流式细胞术检测细胞周期和凋亡率;用免疫细胞化学法检测Bcl-2表达变化。结果:贝母素甲对MCF-7/TAM细胞有明显的抑制作用,呈浓度和时间依赖性。作用48h后能诱导细胞凋亡,细胞周期被阻滞于G1期(P<0.05)。免疫细胞化学法检测Bcl-2表达减弱(P<0.01)。结论:贝母素甲可抑制MCF-7/TAM细胞的增殖,并诱导其凋亡。

贝母素甲对内毒素性急性肺损伤小鼠炎症因子表达的影响

目的探讨贝母素甲(PM)对脂多糖(LPS)诱导小鼠急性肺损伤过程中炎症因子表达的影响。方法 80只昆明种小鼠体重(20±5)g随机分成正常组、模型组、地塞米松(Dex)组、PM组,腹腔注射戊巴比妥(40 mg/kg)麻醉小鼠,模型组、Dex组及PM组小鼠给予气管内注射4 mg/kg LPS诱导建立急性肺损伤模型。注入LPS前1、12、24 h和36 h和注入后12 h,24 h和36 h,模型组、Dex组、PM组动物分别给予生理盐水、10 mg/kg盐酸地塞米松、1 mg/kg PM溶液,正常组给予同等体积生理盐水。实验结束后解剖肺脏,观察肺脏形态学改变,分别用Real-Time PCR和酶联免疫吸附试验(ELISA)测定肿瘤细胞坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-2、IL-6和IL-8。结果 LPS能明显引起小鼠肺部的炎症反应,PM处理后拮抗了LPS对小鼠肺组织的破坏作用,抑制促炎因子TNF-α、IL-2、IL-6、IL-8的表达。结论 PM对急性肺损伤小鼠肺组织保具有保护作用,其机制可能与下调炎症因子的表达有关。

不同生长年限平贝母中贝母素甲和贝母素乙的含量测定

目的:比较一、二、三年生平贝母鳞茎中贝母素甲、贝母素乙的含量。方法:采用Agilent TC-C18(4.6×250mm,5μm)色谱柱,以甲醇-乙腈-0.5%醋酸溶液(8∶19∶73)为流动相,流速为0.6mL·min-1,蒸发光散射检测器检测。结果:三年生以内平贝母鳞茎中贝母素甲、贝母素乙含量随生长年限的增加而增加。结论:从贝母素甲、贝母素乙含量来看,三年生平贝母药材质量优于一、二年生平贝母药材。

十几种贝母及其制剂中贝母素甲、乙及西贝碱的检验方法和品质的研究与进展

目的对十几种贝母及其制剂中有效成分贝母素甲、贝母素乙及西贝碱等的含量测定方法进行了归纳总结。方法主要包括高效液相色谱法、气相色谱法、质谱联用法、薄层扫描法、差热分析法、总生物碱测定法。结果与结论为贝母类药材品质评价,含贝母药材制剂的质量控制研究,及《中国药典》的质量标准制订提供参考依据。