贝莱斯芽胞杆菌S297对生菜菌核病的防治效果

生菜菌核病是由核盘菌Sclerotinia sclerotiorum引起的一种植物病害,主要危害生菜的茎基部。本研究以前期分离获得的贝莱斯芽胞杆菌Bacillus velezensis S297为研究对象,研究其对生菜菌核病的生防作用。结果显示,贝莱斯芽胞杆菌S297能抑制核盘菌菌丝的生长、菌核的生成和萌发。以5×10^(7)cfu/mL浓度S297发酵液处理核盘菌侵染离体生菜叶片36h后的防效达84.65%;贝莱斯芽胞杆菌S297与木霉菌协同使用,防效提高至97.52%,与50%啶酰菌胺1mg/mL处理的防效无显著差异。田间试验中,贝莱斯芽胞杆菌S297发酵液(5×10^(7)cfu/mL)防效为81.08%,与木霉菌协同使用防效为85.14%,与50%啶酰菌胺1 mg/mL处理无显著差异。贝莱斯芽胞杆菌S297对核盘菌的作用结果表明,菌株S297可使核盘菌菌丝变形,抑制核盘菌果胶甲基半乳糖醛酸酶(PMG)、多聚半乳糖醛酸酶(PG)和纤维素酶(CL)的酶活性,亦抑制核盘菌在侵染生菜过程中草酸的产生。

贝莱斯芽胞杆菌GZ8-6对马铃薯根际土壤酶活性的影响及促生作用

为探究生防菌对马铃薯根系土壤酶活性及马铃薯生长的影响。分别以马铃薯疮痂病Streptomyces scabies X-1菌液、LB液体培养基以及生防菌贝莱斯芽胞杆菌Bacillus velezensis GZ8-6发酵液对马铃薯苗进行灌根处理,测定和比较不同时间段的土壤酶活性和马铃薯生长相关指标。结果表明:X-1和贝莱斯芽胞杆菌GZ8-6处理后,马铃薯根际土壤中脲酶、蔗糖酶、过氧化氢酶和纤维素酶的活性明显高于病原菌处理和LB液体培养基处理。X-1和GZ8-6处理后第30、60天,土壤蔗糖酶活性达到高峰,分别比病原菌处理高1.70倍和2.71倍,土壤脲酶活性在施用后第10、20天较病原菌处理分别提升了52.53%和59.48%;土壤纤维素酶和土壤过氧化氢酶活性在马铃薯生育期内呈上升-下降-上升-下降的趋势。经X-1和GZ8-6处理后马铃薯的侧根数、茎粗、地下部鲜重等各项生长指标都优于病原菌处理和培养基处理,处理后60 d株高和地下部鲜重分别较病原菌处理提高了34.65%和124.79%,茎粗较LB液体培养基处理平均增加0.53 cm。因此,生防菌处理不仅对马铃薯有促生作用,同时还能提高土壤关键酶活性。

贝莱斯芽胞杆菌LQ-3防治小麦纹枯病的效果及根际定殖能力

小麦纹枯病(wheat sharp eyespot)主要是由禾谷丝核菌(Rhizoctonia cerealis)侵染引起的一种土传真菌病害,严重威胁小麦生产安全。目前,利用生防细菌防治小麦纹枯病已成为研究热点,其中,研究最多的一类生防细菌为芽胞杆菌。为明确贝莱斯芽胞杆菌(Bacillus velezensis)LQ-3防治小麦纹枯病的效果及其在小麦根部定殖能力,本研究利用LQ-3发酵液灌根处理小麦苗,调查统计LQ-3对小麦纹枯病的防效。同时利用绿色荧光蛋白标记菌株LQ-3(pGFP78)灌根处理小麦根部,并结合抗生素平板回收检测、激光共聚焦显微镜观察方法,探明LQ-3在小麦根部的定殖动态。结果表明,LQ-3防治小麦纹枯病的效果为57.49%,与化学药剂27%苯醚·咯·噻虫悬浮种衣剂(酷拉斯)的防效(59.95%)相当。LQ-3(pGFP78)的生长趋势与野生型LQ-3相比并没有显著性差异,且仍具有游动性和生物膜形成能力。LQ-3(pGFP78)发酵液初始浓度为2.3×10^(8) cfu·mL^(-1),灌根处理5 d后,其在小麦根部的定殖量已达到9.63×10^(6)cfu·g^(-1),25 d后,定殖量仍有1.33×10^(6)cfu·g^(-1),表明LQ-3在小麦根部具有较好的定殖能力。

丹参根腐病菌拮抗菌株贝莱斯芽胞杆菌Bv1-4的筛选及盆栽防效

为筛选防治丹参根腐病的高效生防菌,本研究通过平板对峙法,从健康丹参根际土壤中分离获得一株对丹参根腐病菌具有显著拮抗作用的生防细菌Bv1-4。结合细菌形态学、生理生化特征及序列分析,将菌株Bv1-4鉴定为贝莱斯芽胞杆菌Bacillus velezensis。该菌株对丹参根腐病菌层出、腐皮和尖孢镰刀菌的抑菌率分别为65.54%、68.28%和66.87%;进一步的抑菌谱测试表明Bv1-4对菜豆壳球孢、齐整小核菌、细极链格孢等多种植物病原菌均具有较好抑制作用。盆栽试验结果表明,接种Bv1-4后,丹参茎叶和根系鲜重较无菌水对照组均有显著提升,提升率分别为70.97%和70.37%;Bv1-4分别与丹参根腐病三种病原菌先后混合接种后,调查发病等级计算防效均可达80.00%以上。综上,Bv1-4生防性状优良,在植物病害生物防治中有较好应用潜力。

海洋贝莱斯芽胞杆菌Bam-6全基因组测序及生物信息分析

贝莱斯芽胞杆菌Bam-6对柑橘溃疡病等植物病原菌具有较强抗菌活性,同时具有杀灭桃蚜的作用,为挖掘Bam-6特殊功能基因及基因簇,深入研究其抑菌杀虫机制,采用第二代BGISEQ与第三代Pac Bio平台相结合的测序技术对Bam-6进行全基因组测序,并对测序数据进行基因组组装、基因预测与功能注释、共线性分析、次级代谢产物合成基因簇预测和比较基因组分析等。Bam-6全基因组全长为3928774 bp,GC含量为46.53%,共编码3861个ORF,含有86个t RNA基因、27个r RNA、0个s RNA、122个串联重复序列和2个卫星RNA。在NR、Swiss-Prot、eggNOG、GO和KEGG数据库分别注释到基因3840、2156、3485、3319和2721个。同时,生物信息学分析表明此菌株基因组中有12个次级代谢产物基因簇,包括3个未知功能的基因簇、8个相似度较高的抗生素合成基因簇(surfactin、macrolactin H、fengycin、bacillaene、difficidin、bacillibactin、bacilysin和mersacidin)和1个相似度仅为7%的抗生素基因簇(butirosinA/B)。与其它贝莱斯芽胞杆菌相比,Bam-6中存在许多相似度低的ORFs,有22个特异基因簇,有2个特有单拷贝基因分别编码类细菌素WGxF蛋白和乳球菌素972。本研究为解析菌株Bam-6的抑菌杀蚜机制从基因组层面上提供了基础数据,为深入了解贝莱斯芽胞杆菌次级代谢产物的合成途径提供提供参考信息,对菌株Bam-6后续相关研究具有重要意义。

基于全基因组测序的贝莱斯芽胞杆菌Ba-0321抑菌机制分析及相关功能验证

贝莱斯芽胞杆菌Bacillus velezensis Ba-0321是从健康烟株根际土壤中分离获得的一株具有较强抑菌活性的根际促生细菌,具有较好的生防潜力和应用前景。本研究采用菌丝生长速率法测定菌株Ba-0321无菌滤液对烟草尖孢镰刀菌Fusariumoxysporum和疫霉菌Phytophthoranicotianae的抑制效果,采用二代illumina与三代Nanopore相结合的测序技术,对菌株Ba-0321进行全基因组测序,并对测序数据进行基因组组装、基因功能注释及次级代谢产物合成基因簇预测等。结果表明,菌株Ba-0321无菌滤液对尖孢镰刀菌和疫霉菌均具有抑制效果,其中含有10%无菌滤液的培养基对两种病原菌菌丝生长的抑制率较高,分别达57.38%和34.30%。全基因组测序结果表明,菌株Ba-0321基因组大小为4099109 bp,共有编码基因3897个,基因组测序数据提交至NCBI获得GenBank登录号为CP101904。在GO、COG和KEGG Pathway数据库中有大量编码酶类、萜类化合物、聚酮化合物代谢途径和参与防御机制相关基因被注释。利用anti-SMASH预测到13个次级代谢产物合成基因簇,编码Surfactin、Fengycin、difficidin、Bacillaene、Bacillibactin、Macrolactin H、Bacilysin等多种抑菌活性物质。通过PCR扩增和序列测定分析,证实了Ba-0321菌株基因组中确实存在抑菌物质合成基因簇及防御机制相关基因。酶活测定结果表明,该菌株具有蛋白酶、几丁质酶和纤维素酶等抗性酶活性。本研究在基因组层面上解析了菌株Ba-0321的抑菌机制,为挖掘抑菌相关基因资源提供了分子基础,对该菌株的后续相关研究及应用具有重要意义。

贝莱斯芽胞杆菌菌株P2-1对草莓褐色叶斑病菌的抑制活性及其促生作用

【目的】探究内生菌贝莱斯芽胞杆菌菌株P2-1对草莓褐色叶斑病的防治效果,以及对草莓的促生作用,为该拮抗菌在草莓病害生物防治中的应用奠定基础。【方法】通过平板对峙实验分析菌株P2-1对草莓褐色叶斑病菌落生长以及菌丝形态的影响,并利用离体草莓叶片鉴定菌株P2-1对草莓褐色叶斑病的防治效果。同时,分析菌株P2-1对草莓植株生长的影响。【结果】菌株P2-1对草莓褐色叶斑病菌具有强烈的拮抗活性,抑制率达到66.38%,抑菌带为0.76 cm。菌株P2-1代谢产物具有蛋白酶和纤维素酶活性。菌株P2-1能在草莓叶片定殖,处理10 d后仍可维持在4.07×10^(8)CFU左右。菌株P2-1对草莓褐色叶斑病具有良好的防治效果,同时能促进草莓植株生长,使草莓株高、根长、湿质量和干质量分别提高24.83%、40.74%、28.88%和55.69%。【结论】贝莱斯芽胞杆菌菌株P2-1对草莓褐色叶斑病具有较好的防治效果,并具有草莓促生作用,表现出潜在的应用价值。

贝莱斯芽胞杆菌SH-1471可湿性粉剂研制及其对番茄枯萎病的防治效果

贝莱斯芽胞杆菌Bacillus velezensis在微生物农药开发方面具有极大的潜力,对其可湿性粉剂(Wettable powder)的研发以及生产工艺优化,是推进其产业化、商业化的措施之一,且对推进农业绿色发展、实现绿色防控具有重大意义。以贝莱斯芽胞杆菌SH-1471为研究对象,采用单因素试验法筛选出对菌株SH-1471活性影响最小的载体和助剂及其复配比例。通过室内盆栽试验测定贝莱斯芽胞杆菌SH-1471 WP对番茄枯萎病的防治效果。经筛选确定贝莱斯芽胞杆菌SH-1471 WP的配方及配比为:以高岭土为载体的母粉87%、木质素磺酸钠2%、NNO 8%、黄原胶2%、抗坏血酸(VC)1%;所得制剂活菌数为2.5×10^(10)CFU/g、细度97%、润湿时间12 s、悬浮率88.6%、干燥减量1%、p H 7.1、杂菌率为0,各项指标均符合国家标准;连续储藏试验结果表明:180 d 4℃下芽胞存活率达87.65%,25℃为82.45%;室内盆栽试验表明可显著降低番茄枯萎病的发病率,防治效果达93.7%。贝莱斯芽胞杆菌SH-1471 WP具有稳定性好、防效高等特点,在作物病害生物防治方面具有较好的应用前景。

酱醪贝莱斯芽胞杆菌四甲基吡嗪高产菌的选育及其发酵优化

为获得四甲基吡嗪(TTMP)高产发酵菌株,以酱醪中筛选的贝莱斯芽胞杆菌CS1.11为出发菌株,进行紫外诱变,以酪素平板水解圈直径及乙偶姻显色反应为指标进行初筛,以蒸煮豆粕和焙炒小麦为原料固态发酵TTMP进行复筛,得到3株突变株。蛋白酶、淀粉酶活力及乙偶姻合成能力研究表明,其中2株突变株CS1.11-32、CS1.11-33更优,其TTMP的积累量较出发菌株分别提升了47.64%,78.89%,适用于酱油发酵体系。对影响TTMP积累的炒麦添加量、加水量、接种量、发酵温度及搅拌次数进行2株菌的对比发酵研究,CS1.11-33显示出更优的TTMP积累能力。响应面试验优化得出CS1.11-33固态发酵积累TTMP的最佳发酵条件为:炒麦添加量44%,加水量29%,发酵温度37℃,接种量8%,发酵过程中不进行搅拌,在此条件下TTMP积累量最大达到1895.08 mg/kg干基,是其优化前的2.6倍。酱醪贝莱斯芽胞杆菌TTMP高产株的选育及其发酵研究将为提高酱油中TTMP浓度、快速增强酱香及促进TTMP的功能性应用奠定基础。

贝莱斯芽胞杆菌对动物的益生作用研究进展

贝莱斯芽胞杆菌可产生抗微生物脂肽和聚酮、有益酶、黏附分子等代谢产物。作为饲料添加剂,贝莱斯芽胞杆菌可通过提高小肠绒毛高度及降低隐窝深度、增强酸性磷酸酶及碱性磷酸酶活性等机制促进动物生长;通过拮抗病原、增强机体抗氧化能力和调节动物免疫改善动物健康。本文综述了贝莱斯芽孢杆菌作为饲料添加剂对动物的益生作用,为该菌的科学应用提供参考。

贝莱斯芽胞杆菌YL2021高产嗜铁素的摇瓶发酵工艺优化

贝莱斯芽胞杆菌Bacillus velezensis YL2021是一株对多种植物病原菌具有良好防治效果的生防菌,其基因组中含有完整的儿茶酚型嗜铁素合成基因簇,在缺铁条件下能产生具有抑菌作用的嗜铁素。为了提高贝莱斯芽胞杆菌YL2021嗜铁素的产量,采用摇瓶培养发酵,通过Plackett-Burman(PB)试验、中心组合试验(central composite design,CCD)和响应曲面法(response surface methodology,RSM)分析,优化菌株YL2021高产嗜铁素的发酵培养基成分和培养条件。结果表明,菌株YL2021高产嗜铁素的最优培养基配方:葡萄糖19.43 g/L、NH_(4)Cl 1.93 g/L、KH_(2)PO_(4)9.02 g/L、谷氨酸钠6.00 g/L、Mg SO_(4)1.75 g/L和Ca Cl20.08 g/L;最优培养条件为:温度30℃、初始p H值7.0、接种量5%、培养时间36.5 h、转速200 r/min和装液量75 m L(250 m L三角瓶中)。菌株YL2021在优化条件下嗜铁素产量达到734.86μmol/L,较优化前提高了10.34倍,优化效果明显。本文结果表明,已成功建立了适用于YL2021高产嗜铁素的摇瓶发酵体系,为嗜铁素的生防应用提供理论基础和技术支撑。

响应面法优化贝莱斯芽胞杆菌YC11的液体发酵培养基

为提高对烟草黑胫病具有良好防治效果的贝莱斯芽胞杆菌Bacillus velezensis YC11菌株的芽胞产生水平,通过Plackett-Burman试验筛选出影响YC11摇瓶发酵芽胞产量的3个显著因子:玉米粉、酵母粉和硫酸镁;再结合最陡爬坡试验、Box-Behnken(BB)响应面法拟合显著因子与芽胞产量的非线性方程求解,得到优化的YC11菌株发酵产胞培养基配方。结果表明,优化后的最佳配方为玉米粉13.74 g/L、鱼粉15.00 g/L、酵母粉15.73 g/L、玉米浆5.00 g/L、硫酸镁0.59 g/L和磷酸二氢钾0.30 g/L,此时模型预测发酵液芽胞最佳产量为114.4亿芽胞/m L,验证值为116.6亿芽胞/m L,预测值与验证值之间吻合较好,较优化前芽胞产量(70.8亿芽胞/m L)提高了64.7%。采用500 L发酵罐进行发酵验证,菌株YC11的芽胞产量为150亿芽胞/m L。盆栽试验结果表明,菌株YC11发酵液对烟草黑胫病的防效可达到100%。

贝莱斯芽胞杆菌ZJ1油悬剂的研制及其田间防病促生效果

采用平板对峙法筛选出1株对番茄早疫病菌Alternaria solani和番茄灰霉病菌Botrytis cinerea均具有良好抑菌活性的贝莱斯芽胞杆菌Bacillus velezensis ZJ1。采用冷冻干燥法及生物相容性试验进行助剂筛选获得菌剂配方,并进行ZJ1油悬剂的田间防病效果及促生作用研究。结果表明,菌株ZJ1油悬剂的最佳配方为10%菌粉(6.0×10^(10)cfu/g)、7%(v/v)吐温80、50μg/mL两性霉素、2%CaCl_(2)、1%SDS、1%CaCO_(3)、0.5%木质素磺酸钙、5%糊精,余量用花生油补足,芽胞含量为5.75×10^(9)cfu/mL。油悬剂各项指标均符合国家标准。贝莱斯芽胞杆菌ZJ1油悬剂200倍稀释液对A.solani引起的早疫病和B.cinerea引起的灰霉病防治效果达90%以上,具有良好的保护效果和治疗效果,有明显的促生作用,可使番茄植株茎粗显著增大。本研究制备的防病促生菌剂环保高效,效果稳定,为其生产及田间应用奠定基础。

花生果腐病拮抗菌贝莱斯芽胞杆菌Hsg1949鉴定与防效

花生果腐病是由复合病原真菌引起的病害,直接严重影响花生的产量和品质。为筛选花生果腐病的生防微生物,以花生果腐病主要病原菌镰孢菌为靶标菌,采用稀释涂布平板法和平板对峙培养法,在花生根际土壤中筛选到一株对镰孢菌具有拮抗作用的生防细菌Hsg1949。经形态学观察、Biolog微生物自动鉴定系统及16S rDNA和gyrA序列构建系统发育树等综合分析,鉴定菌株Hsg1949为贝莱斯芽胞杆菌。菌株Hsg1949对3株镰孢菌分离株具有稳定的的拮抗活性,继代培养40代时,对3株镰孢菌的抑菌率分别为77.0%、69.7%和61.9%,与初始菌株F0代的抑菌活性无显著差异。其无菌上清液活性物质耐高温,耐强酸但不耐强碱,在pH 11的环境下拮抗活性显著降低。田间试验结果表明,Hsg1949菌悬液2×10^(8)和5×10^(8) cfu/mL可显著降低花生果腐病发病率,对花生果腐病的防治效果分别为66.54%和71.27%,与化学药剂多菌灵防效(75.11%)相当。菌株Hsg1949对花生白绢病菌、棉花立枯病菌、棉花枯萎病菌和棉花黄萎病菌也具有较强的拮抗作用,在植物真菌病害的生物防治中将具有较大的应用潜力。

贝莱斯芽胞杆菌BP−1筛选、鉴定及其对花生网斑病的田间防效评价

为获得用于防治花生网斑病的有效生防资源,从阜新、沈阳、锦州等辽宁花生主产区采集到健康叶片60份,采用稀释涂布平板法分离获得微生物563株,其中细菌435株,真菌98株,放线菌30株。其中对花生网斑病菌具有良好抑制作用的菌株共34株,抑制作用最强的为菌株BP−1,其对花生网斑病菌的抑菌带宽度达27.0 mm。抑菌谱试验表明,该菌株对供试的11种植物病原真菌具有不同强度的抑制作用,抑菌带宽度为5.6~22.8 mm。经形态观察、生理生化特征和16S rDNA同源性分析,鉴定为贝莱斯芽胞杆菌Bacillus velezensis。田间防效试验结果显示,BP−1菌液对花生网斑病具有较好防治效果,其发酵原液稀释200倍后,对花生网斑病的田间防治效果达60.65%,具有较好的应用前景。

贝莱斯芽胞杆菌ZZBV-3的鉴定及其对草莓根腐病的防效

为获得草莓根腐病原菌尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum的优良拮抗菌,以草莓种植基地的土壤为拮抗菌来源,通过室内测定不同菌株的抑菌活性,筛选抑菌率最高的菌株,在此基础上对所筛菌株进行分类鉴定,并评价其抑菌谱和防效。结果表明,从土壤中分离获得39株拮抗菌,筛选出3株对尖孢镰刀菌具有明显抑制作用的菌株。其中,菌株ZZBV−3的抑菌作用最强,抑菌圈直径为16.2 mm。经形态学及多基因(包括16S rDNA和gyrB基因)比对分析,确认菌株ZZBV−3为贝莱斯芽胞杆菌Bacillus velezensis。菌株ZZBV−3抑菌谱广,对多种植物病原菌均具有良好的抑菌效果。盆栽试验结果表明,菌株ZZBV−3对草莓“红颜”和“甜查理”品种的根腐病防效分别为77.96%和81.18%,生防应用前景良好。

6株贝莱斯芽胞杆菌对土传病原菌的抑制活性及其作用机理

【目的】明确6株贝莱斯芽胞杆菌(Bacillus velezensi)对7种土传病原菌的抑制活性,探究其拮抗机理,为土传病害的生物防治提供菌种资源和理论依据。【方法】采用平板对峙法测定拮抗菌株对7种土传病原菌的抑菌活性,用显微镜观察拮抗菌对病原物菌丝形态的影响;采用叶片离体接种法测定其防治效果,鉴别性培养基测定拮抗菌株产生的胞外酶,并用PCR扩增技术检测拮抗菌携带抗生素相关基因(mycB、fenB、ituA、sfp、bamC、erisA、spaS、bacA、yndJ和qk)。【结果】所有测试菌株(NN01、NN02、NN04、NN05、NN88和NN95)对核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)、灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f.sp.cubense)、齐整小核菌(Scleritium rolfsii)和烟草疫霉(Phytophthora nicotianae)等土传病原菌的菌丝生长均具有明显的抑制作用,其中对齐整小核菌抑制作用最明显;NN01、NN02、NN04和NN88对尖孢镰刀菌菌丝有较好的抑制效果,菌丝生长抑制率为40.56%~56.30%;抑菌带边缘菌丝的形态发生明显改变,原生质浓缩或外泄、菌丝破裂和颜色加深;所有拮抗菌株均能较好抑制桑白绢病和莴苣菌核病病斑的发展,防治效果分别为53.40%~71.32%和43.57%~65.68%,高于或与枯草芽胞杆菌对照防治效果相当;所有拮抗菌都能产纤维素酶和蛋白酶,除了NN95基因组不携带fenB,其余所有菌株都携带mycB、ituA、fenB、bacA和yndJ等脂肽类抗生素相关基因。【结论】所有测定的贝莱斯芽胞杆菌对6种土传病原菌均具有抑菌活性,能产纤维素酶和蛋白酶,携带mycB、ituA、fenB、bacA和yndJ等5种抗生素相关基因,具有防治土传病害的潜力。

贝莱斯芽胞杆菌JTB8−2的筛选、鉴定及其对瓜列当拮抗作用研究

为了筛选适宜新疆本地田间土壤环境且对瓜列当具有生防潜力的微生物,本研究采集加工番茄田罹病瓜列当根际土壤,分别采用稀释涂布平板法分离和滤纸平板法筛选到一株瓜列当生防菌JTB8−2,经形态学和分子生物学鉴定为贝莱斯芽胞杆菌Bacillus velezensis。菌株JTB8−2发酵液25、50、100、250和500倍液对瓜列当种子萌发校正抑制率分别为100%、100%、93.60%、43%和32.59%,其250和500倍液对瓜列当种子萌发校正抑制率显著高于其他菌株;浓度为1和0.5μg/mL菌株发酵液粗提物对瓜列当种子萌发抑制率分别为100%和53.25%;浇灌浓度约5×105 cfu/mL菌株发酵液对瓜列当防治效果为66.51%。该菌株具有防治瓜列当的潜力,可以作为新疆本地瓜列当防治生防菌资源。

培养基配方对贝莱斯芽胞杆菌FJAT-45028脂肽产量和抑菌活性的影响

探究培养基配方对贝莱斯芽胞杆菌FJAT-45028脂肽产量和抑菌活性的影响,筛选出菌株产脂肽的最佳培养基配方。通过酸沉淀、醇溶法提取菌株FJAT-45028发酵产生的粗脂肽,利用液相色谱串联四极杆飞行时间质谱(LC-QTOF-MS)测定脂肽组成和含量,并以龙眼致腐菌小新壳梭孢菌为指示菌,评估脂肽的抑菌活性。结果表明:贝莱斯芽胞杆菌FJAT-45028在供试的12种培养基中发酵后均能产生脂肽,粗脂肽产量范围为2.28~4.86 g·L^(-1),抑菌圈直径范围为12.46~20.02 mm。LC-QTOF-MS分析结果显示,菌株FJAT-45028产生的脂肽由伊枯草菌素、丰原素和表面活性素组成,不同培养基中产生的伊枯草菌素、丰原素和表面活性素的含量范围分别是0.46~63.49 mg·L^(-1)、34.07~918.86 mg·L^(-1)和7.00~53.24 mg·L^(-1)。相关性分析表明,伊枯草菌素和丰原素含量以及脂肽总量均与抑菌活性呈显著正相关(P<0.01)。以抑菌活性和脂肽产量为指标,筛选出贝莱斯芽胞杆菌FJAT-45028产脂肽的最佳培养基配方为:蔗糖20 g·L^(-1)、酵母浸膏20 g·L^(-1)、牛肉浸膏15 g·L^(-1)、MgSO_(4)·7H_(2)O 0.6 g·L^(-1)、FeSO_(4)·7H_(2)O 9.0 mg·L^(-1)。该研究筛选到了适于产抑菌脂肽的培养基,为菌株FJAT-45028抑菌脂肽的生产奠定了基础。

拮抗犬小孢子菌芽胞杆菌的筛选和鉴定

为了寻找能够拮抗犬小孢子菌的细菌,本试验从健康犬、猫和貉粪便中筛选了抗犬小孢子菌的芽胞杆菌,经培养、染色特性和16S rDNA序列分析对其中抑菌谱最广的芽胞杆菌进行鉴定,采用平板对峙法测定所筛选芽胞杆菌对犬小孢子菌的抑制效果,用碘化丙啶对芽胞杆菌发酵上清处理的犬小孢子菌菌丝进行染色以初步分析抑菌机理。结果显示,共筛选到12株拮抗犬小孢子菌的芽胞杆菌,其中F-15株对犬小孢子菌的抑制率为64.28%,也可抑制金黄色葡萄球菌和沙门菌;F-15株的16S rDNA序列与HSB1株贝莱斯芽胞杆菌的16S rDNA序列相似度为100%;F-15株发酵上清处理的犬小孢子菌菌丝染色后,在荧光显微镜下可见红色荧光,表明其损伤了犬小孢子菌菌丝的细胞膜。本试验为贝莱斯芽胞杆菌及其代谢产物在防控犬小孢子菌等真菌危害中的应用提供了参考。