负压培养对大鼠骨髓基质干细胞增殖及分化的影响

目的探讨负压状态培养对大鼠骨髓基质干细胞(bone marrow stem cells,BMSCs)增殖及分化的影响。方法分离SD大鼠股骨骨髓中的单核细胞,常规培养,建立负压培养模型。设对照组(压力为0),低负压组(压力为-300mmHg)和高负压组(压力为-600mmHg)。观察细胞生长状况,绘制细胞生长曲线,通过倒置显微镜和透射电镜观察细胞形态结构的变化,细胞免疫化学方法检测CD31受体的表达。结果低负压组细胞生长不受影响(>0.05),倒置显微镜下发现低负压组细胞形态与对照组类似,透射电镜下发现细胞内有大量线粒体和纤维束,CD31表达增加(<0.05);高负压组细胞增殖受抑制(<0.05),倒置显微镜下细胞稀少,透射电镜发现细胞内有纤维束,并且大量线粒体肿胀,呈空泡化,CD31表达明显增加(<0.05)。结论负压培养可诱导BMSCs向内皮细胞和成纤维细胞分化,但当负压增大为-600mmHg时,细胞增殖受到抑制。

负压培养法影响山羊体外受精效果的研究

初步研究了负压低氧环境对山羊卵母细胞体外成熟、体外受精和体外培养的影响。结果表明,与常规培养相比,负压培养对卵母细胞体外成熟无显著影响(P>0.05);但负压培养极显著降低了受精卵的卵裂率(P<0.01);负压培养对体外受精胚胎的发育培养效果无显著提高,由于本试验所用材料数量较少,因此其结果还需作进一步研究。

体外负压培养对小鼠骨髓间充质干细胞增殖能力和血管内皮生长因子分泌水平的影响

背景:如何增强骨髓间充质干细胞增殖活性使其移植后发挥应有的疗效是目前急需解决的问题。目的:探讨体外负压培养技术对小鼠骨髓间充质干细胞增殖活性及血管内皮生长因子分泌水平的影响。方法:取第3代骨髓间充质干细胞,给予间歇性负压培养(-6.65,-13.3,-26.6kPa),2h/次,1次/12h,对照组在正常条件下培养。培养12,24,36,48,60h,采用CCK-8法检测细胞增殖情况,ELISA检测细胞分泌血管内皮生长因子水平,RT-PCR检测血管内皮生长因子受体mRNA表达。根据上述结果,选择一个最佳负压条件和时间(-26.6kPa,24h),将骨髓间充质干细胞分为正常对照组、负压组、负压+血管内皮生长因子受体抑制剂Axitinib组,CCK-8法检测细胞增殖情况,EDU试剂盒检测EDU细胞阳性率,结晶紫染色观察细胞集落形成单位。结果与结论:①与对照组比较,3个负压干预组骨髓间充质干细胞显著增殖(P<0.05);②与对照组比较,3个负压干预组细胞分泌血管内皮生长因子水平显著增高(P<0.05),血管内皮生长因子受体mRNA表达显著增高(P<0.05);③经血管内皮生长因子受体抑制剂处理后,细胞增殖吸光度值、克隆形成单位数量及EDU阳性细胞率较负压干预组明显降低;④结果表明,体外负压培养可能通过上调血管内皮生长因子分泌水平促进骨髓间充质干细胞增殖。

应用负压气相培养系统生产体细胞克隆牛的研究

以 - 35℃低温冷冻保存 3个月的Vari Fe 8mos和Fahru Fe 9mos死亡牛胎儿皮肤上皮细胞 ,为核供体细胞 ,应用点击去核方法 ,和 - 30 0mmHg、2 %CO2 、8%～ 10 %O2 、38.5℃和 10 0 %湿度负压气相培养系统 (负压组 ) ,进行了克隆牛试验研究 ,并与吸引和挤压及常压培养法进行了比较。结果表明 ,采用点击去核法对体外成熟培养18h、2 2h、2 4h的卵母细胞进行去核 ,去核成功率分别为 90 .0 %、75 .8%和 5 5 .6 %,18h组显著高于 2 2h组 (P <0 .0 5 ) ,极显著高于 2 4h组 (P <0 .0 1) ;而且 ,点击去核法去核率为 90 .0 %,极显著地高于吸引法的 6 8.3%(P <0 .0 1) ,与挤压法去核率 88.3%差异不显著 ;采用点击去核法囊胚发育率达 34 .1%,显著高于吸引法的 18.0 %(P <0 .0 5 ) ,与挤压法的 2 0 .9%差异不显著。负压组重构胚的卵裂率达 70 .0 %,显著高于常压组的 6 3.8%(P <0 .0 5 ) ,负压组囊胚发育率达 35 .8%,极显著高于常压组的 2 3.2 %(P <0 .0 1) ,负压组克隆囊胚细胞数为 10 8± 3.3个 ,极显著多于常压组的 98± 3.3(P <0 .0 1)。将第 6天的克隆桑椹胚和囊胚每 2～ 3枚装入 1支 0 .2 5ml塑料细管中 ,移植给同期发情处理的 5头受体奶牛的黄体侧子宫角中 ,最终获得 2头牛妊娠 ,并于 2 0 0 1年 11月 3日和 11月

影响山羊体外胚胎生产的主要因素

研究了不同成熟培养时间(21、242、7 h)、FSH剂量(0、0.02、0.04、0.06 AU/mL)和激素组合(FSH+LH+E2、FSH+LH、LH+E2、FSH+E2)、氨基酸以及负压低氧条件(-300 mmHg2、%CO28、%～10%O2)对山羊卵母细胞体外成熟/体外受精(IVM/IVF)的影响。结果表明:山羊卵母细胞成熟培养以24～27 h较为适宜;添加FSH组的受精卵裂率显著高于未添加组(P<0.01),添加剂量以0.02～0.04 AU/mL效果为最佳;LH对山羊的IVM/IVF无显著影响;E2添加对山羊IVM/IVF有负面影响,使囊胚发育率显著降低(P<0.05)。在成熟液中添加必需氨基酸(EAA)和非必需氨基酸(NEAA)均能显著提高受精卵裂率(P<0.05)。负压低氧环境对山羊卵母细胞的体外成熟无显著影响,但是不利于山羊的体外受精,使受精卵裂率极显著降低(P<0.01);负压低氧环境对提高胚胎发育率的作用不明显。