负性筛选策略与食管鳞癌循环肿瘤细胞检测

目的建立基于细胞学水平的循环肿瘤细胞负性筛选方法,检测食管鳞癌患者外周血循环肿瘤细胞。方法选用负性筛选策略,分步去除7.5ml食管鳞癌外周血样本中的红、白细胞,富集上皮来源的稀有细胞。比较3种免疫磁珠(Miltenyi、AVIVA和Xinzhi磁珠)去除白细胞、富集外周血循环肿瘤细胞的特点和效率。用经典的细胞化学染色鉴定循环肿瘤细胞。结果Miltenyi和AVIVA磁珠去除白细胞、富集肿瘤细胞效果较好。从富集后的食管鳞癌患者外周血稀有细胞中鉴定到形态各异的循环肿瘤细胞。结论负性筛选策略可以有效分离鉴定食管鳞癌患者外周血形态各异的循环肿瘤细胞。

负性富集食管鳞癌患者外周血中循环肿瘤细胞的检测及其意义

目的:负性富集并鉴定食管鳞癌患者外周血循环肿瘤细胞(CTCs)的数量及表型特征,探讨CTCs在食管鳞癌临床疗效评价和预后判断等方面的应用价值。方法:通过免疫磁珠偶联CD45抗体除去外周血白细胞,富集外周血CTCs的"负性策略",用荧光鉴定CTCs上皮标志及细胞核特征,用统计学方法分析CTCs数量改变与患者临床参数与治疗效果、预后的相关性。结果:59例食管鳞癌患者术前外周血CTCs的阳性率为79.7%(47/59),7.5ml外周血CTCs平均检出数目为7.83(0~72)个。其中淋巴结是否转移、肿瘤TNM分期、肿瘤浸润程度和分化程度、不同各组CTCs检出的差异,具有统计学意义(P<0.05)。采用多因素Cox回归分析,术前CTCs≥5及淋巴结转移是影响预后的显著因素。结论:免疫磁珠负性富集结合免疫荧光鉴定的方法可以有效地分离和鉴定食管癌外周血CTCs。初步研究提示,外周血中CTCs与食管鳞癌分期、进展及其预后相关。

食管鳞癌外周血循环肿瘤细胞检测及其临床意义

目的探讨食管鳞癌患者外周血循环肿瘤细胞数量与食管癌病理生理特征之间的相关性。方法采用负性筛选策略,用红细胞裂解液和Mitenyi免疫磁珠分步分别去除食管鳞癌患者外周血样本中红细胞和白细胞,富集上皮来源的稀有细胞,免疫荧光染色法鉴定循环肿瘤细胞。分析术前循环肿瘤细胞检出阳性水平与临床各病理生理参数的相关性。结果食管鳞癌患者外周血循环肿瘤细胞的检出阳性水平与患者肿瘤细胞分化程度、淋巴结转移状态(N分期)、p-TNM分期、原发性肿瘤侵犯程度(T分期)显著相关(P<0.05);与患者的年龄、肿瘤位置无密切相关(P>0.05)。结论食管鳞癌患者外周血循环肿瘤细胞的检出数量可以反映肿瘤的生物学恶化程度,可作为临床治疗及预后判断的重要参考指标。

外周血嗜碱粒细胞磁珠分选法分选及意义

目的探讨磁珠分选法(MACS)负性筛选方法获得高纯度嗜碱粒细胞用于速发型过敏反应的研究。方法以Ficoll密度梯度离心分离细胞。用活性抗体标记的免疫磁珠进行MACS分选,用激光共聚焦方法鉴定嗜碱粒细胞活性。结果 Ficoll密度离心后,获得嗜碱粒细胞的纯度为(12.6±3.87)%,MACS纯化后,其纯度可提高到(95.6±3.96)%,细胞活性为(98.6%±0.83)%。激光共聚焦证实,纯化后的嗜碱粒细胞活化后CD63表达增强,细胞功能完整。结论用MACS负性筛选方法可获得高纯度的嗜碱粒细胞,细胞功能完整,可用于速发型过敏反应的研究。

食管鳞癌外周血循环肿瘤细胞检测及临床意义

目的探讨食管鳞癌患者外周血循环肿瘤细胞数量与食管癌病理生理特征之间的关系。方法采取负性筛选策略，红细胞裂解液去除食管鳞癌外周血样本中的红细胞，Miltenyi免疫磁珠去除白细胞，富集上皮来源的稀有细胞，免疫荧光染色技术鉴定循环肿瘤细胞。结果食管鳞癌患者外周血循环肿瘤细胞的数量与患者性别、年龄、肿瘤位置均无显著相关性，与细胞分化程度、原发肿瘤侵犯程度、淋巴结转移状态、P—TNM分期有显著相关，相关系数分别为0．504、0．507、0．412、0．374。结论食管鳞癌患者外周血循环肿瘤细胞的数量可以反映肿瘤的进展程度，可作为判断食管鳞癌生物学行为恶化的指标。