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利用酵母功能检测技术筛选肝癌组织p53基因显性负抑制效应突变体
1
作者
傅景庚
王佳琦
+2 位作者
曾敏
施慧莉
霍克克
《复旦学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第1期36-42,F0003,共8页
p5 3突变体的显性负抑制效应(dominant negative effect)是指突变型p5 3蛋白抑制细胞内野生型p5 3蛋白发挥正常功能的一种特性,是肿瘤发生的重要原因之一.利用酵母中分离的等位基因功能分析技术(functional analysis of separated allel...
p5 3突变体的显性负抑制效应(dominant negative effect)是指突变型p5 3蛋白抑制细胞内野生型p5 3蛋白发挥正常功能的一种特性,是肿瘤发生的重要原因之一.利用酵母中分离的等位基因功能分析技术(functional analysis of separated alleles in yeast,FASAY)建立了一种简便稳定的p5 3突变体显性负抑制效应检测和筛选方法,并应用于检测2 8例原发性肝癌组织(HCC)样本的p5 3单点突变体,发现了1 2例为显性负抑制效应突变体,其中突变位点Met2 4 6Val为首次报道具有显性负抑制效应.进一步分析这些突变p5 3蛋白的结构,发现这些具有显性负抑制效应的突变位点大多位于p5 3蛋白表面与DNA特异性序列相互作用的区域.
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关键词
P53基因
显性
负
抑制
效应
FASAY
原文传递
HERG基因Y475C突变致2型长QT综合征的机制探讨
被引量:
2
2
作者
王洪涛
李翠兰
+3 位作者
胡大一
刘文玲
李宁
浦介麟
《中国心脏起搏与心电生理杂志》
2007年第4期300-303,共4页
目的研究HERG基因Y475C突变的致病机制。方法利用DNA定点突变技术构建Y475C表达载体,脂质体介导法转染人胚胎肾细胞进行表达。转染后48h用膜片钳技术记录KCNH2(亦称HERG)通道电流变化情况,明确Y475C突变导致2型长QT综合征的机制。结果...
目的研究HERG基因Y475C突变的致病机制。方法利用DNA定点突变技术构建Y475C表达载体,脂质体介导法转染人胚胎肾细胞进行表达。转染后48h用膜片钳技术记录KCNH2(亦称HERG)通道电流变化情况,明确Y475C突变导致2型长QT综合征的机制。结果电生理学研究显示与野生型通道电流相比,Y475C突变单独或与等量野生型质粒共转染时电流密度均显著降低,并且通道激活特征,包括V1/2(半激活电压)和K斜率因子也有显著改变。Y475C对通道失活特征无显著影响。结论Y475C突变通过负显性抑制效应以及通道门控特性的改变导致该基因编码的快速激活延迟整流钾电流显著降低是引起患者QT间期延长的机制。
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关键词
分子生物学
长QT综合征
HERG基因
Y475C突变
负显性抑制
下载PDF
职称材料
HEK293细胞中杂合状态下无义突变体L539fs/47对野生型HERG电流的作用
3
作者
吕颖
张军波
+6 位作者
张爱峰
刘仲伟
王军奎
韩稳琦
潘军强
李国良
孙超峰
《西安交通大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第3期353-357,371,共6页
目的研究单独表达无功能的无义突变体L539fs/47在HEK293细胞中杂合状态下对野生型HERG电流的作用。方法用脂质体转染法将野生型HERG及突变体HERG-L539fs/47分别转染HEK293细胞36h后,RT-PCR检测HERG mRNA表达,免疫荧光及免疫印迹检测HER...
目的研究单独表达无功能的无义突变体L539fs/47在HEK293细胞中杂合状态下对野生型HERG电流的作用。方法用脂质体转染法将野生型HERG及突变体HERG-L539fs/47分别转染HEK293细胞36h后,RT-PCR检测HERG mRNA表达,免疫荧光及免疫印迹检测HERG蛋白定位及表达量,全细胞膜片钳检测IHERG电流密度。结果野生组HERG的mRNA表达量高于L539fs/47突变组(1.066±0.612 vs.0.254±0.397,P<0.01)。免疫荧光检测发现野生型HERG蛋白多于突变体,野生型HERG蛋白主要分布在细胞膜上;而HERG突变体蛋白大部分滞留胞质。免疫印迹显示:不同于野生型HERG135ku及155ku 2个条带,突变体仅60ku 1个条带。全细胞膜片钳检测WT+MT组IHERG较WT组下降55.23%(22.03±2.62 vs.49.20±2.31pApF,P<0.01)。结论 HEK293细胞中杂合状态下截断突变体L539fs/47对野生型HERG电流的不完全负显性抑制作用。
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关键词
HERG
无义突变
不完全
负显性抑制
作用
HEK293细胞
下载PDF
职称材料
题名
利用酵母功能检测技术筛选肝癌组织p53基因显性负抑制效应突变体
1
作者
傅景庚
王佳琦
曾敏
施慧莉
霍克克
机构
复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室
出处
《复旦学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第1期36-42,F0003,共8页
基金
国家高技术发展计划(863计划)资助项目(2006AA02A310)
国家自然科学基金资助项目(39980020)
文摘
p5 3突变体的显性负抑制效应(dominant negative effect)是指突变型p5 3蛋白抑制细胞内野生型p5 3蛋白发挥正常功能的一种特性,是肿瘤发生的重要原因之一.利用酵母中分离的等位基因功能分析技术(functional analysis of separated alleles in yeast,FASAY)建立了一种简便稳定的p5 3突变体显性负抑制效应检测和筛选方法,并应用于检测2 8例原发性肝癌组织(HCC)样本的p5 3单点突变体,发现了1 2例为显性负抑制效应突变体,其中突变位点Met2 4 6Val为首次报道具有显性负抑制效应.进一步分析这些突变p5 3蛋白的结构,发现这些具有显性负抑制效应的突变位点大多位于p5 3蛋白表面与DNA特异性序列相互作用的区域.
关键词
P53基因
显性
负
抑制
效应
FASAY
Keywords
p53
dominant negative effect
FASAY
分类号
Q71 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
HERG基因Y475C突变致2型长QT综合征的机制探讨
被引量:
2
2
作者
王洪涛
李翠兰
胡大一
刘文玲
李宁
浦介麟
机构
首都医科大学附属北京同仁医院心脏中心
北京大学人民医院心内科
中国医学科学院阜外心血管病医院心内科
出处
《中国心脏起搏与心电生理杂志》
2007年第4期300-303,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(项目编号:30170381)
北京市科技新星计划资助项目(项目编号:2004-BG-01)
国家985工程资助项目(项目编号:985-2-034-24)
文摘
目的研究HERG基因Y475C突变的致病机制。方法利用DNA定点突变技术构建Y475C表达载体,脂质体介导法转染人胚胎肾细胞进行表达。转染后48h用膜片钳技术记录KCNH2(亦称HERG)通道电流变化情况,明确Y475C突变导致2型长QT综合征的机制。结果电生理学研究显示与野生型通道电流相比,Y475C突变单独或与等量野生型质粒共转染时电流密度均显著降低,并且通道激活特征,包括V1/2(半激活电压)和K斜率因子也有显著改变。Y475C对通道失活特征无显著影响。结论Y475C突变通过负显性抑制效应以及通道门控特性的改变导致该基因编码的快速激活延迟整流钾电流显著降低是引起患者QT间期延长的机制。
关键词
分子生物学
长QT综合征
HERG基因
Y475C突变
负显性抑制
Keywords
Molecular biology
Long QT syndrome
HERG gene
Y475 C mutation
Dominant negative suppression
分类号
R341 [医药卫生—基础医学]
下载PDF
职称材料
题名
HEK293细胞中杂合状态下无义突变体L539fs/47对野生型HERG电流的作用
3
作者
吕颖
张军波
张爱峰
刘仲伟
王军奎
韩稳琦
潘军强
李国良
孙超峰
机构
陕西省人民医院心内一科
西安交通大学第一附属医院心内科
西安交通大学第二附属医院心内科
出处
《西安交通大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第3期353-357,371,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.30800473)~~
文摘
目的研究单独表达无功能的无义突变体L539fs/47在HEK293细胞中杂合状态下对野生型HERG电流的作用。方法用脂质体转染法将野生型HERG及突变体HERG-L539fs/47分别转染HEK293细胞36h后,RT-PCR检测HERG mRNA表达,免疫荧光及免疫印迹检测HERG蛋白定位及表达量,全细胞膜片钳检测IHERG电流密度。结果野生组HERG的mRNA表达量高于L539fs/47突变组(1.066±0.612 vs.0.254±0.397,P<0.01)。免疫荧光检测发现野生型HERG蛋白多于突变体,野生型HERG蛋白主要分布在细胞膜上;而HERG突变体蛋白大部分滞留胞质。免疫印迹显示:不同于野生型HERG135ku及155ku 2个条带,突变体仅60ku 1个条带。全细胞膜片钳检测WT+MT组IHERG较WT组下降55.23%(22.03±2.62 vs.49.20±2.31pApF,P<0.01)。结论 HEK293细胞中杂合状态下截断突变体L539fs/47对野生型HERG电流的不完全负显性抑制作用。
关键词
HERG
无义突变
不完全
负显性抑制
作用
HEK293细胞
Keywords
human ether-a-go-go-related gene (HERG)
nonsense mutation
incomplete dominant negativeinhibition
/-IEK293 cell
分类号
R541.7 [医药卫生—心血管疾病]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
利用酵母功能检测技术筛选肝癌组织p53基因显性负抑制效应突变体
傅景庚
王佳琦
曾敏
施慧莉
霍克克
《复旦学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2010
0
原文传递
2
HERG基因Y475C突变致2型长QT综合征的机制探讨
王洪涛
李翠兰
胡大一
刘文玲
李宁
浦介麟
《中国心脏起搏与心电生理杂志》
2007
2
下载PDF
职称材料
3
HEK293细胞中杂合状态下无义突变体L539fs/47对野生型HERG电流的作用
吕颖
张军波
张爱峰
刘仲伟
王军奎
韩稳琦
潘军强
李国良
孙超峰
《西安交通大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2016
0
下载PDF
职称材料
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