透射电镜负染色技术常见影响因素与对策

负染色技术又称阴性反差染色，简称负染。它是由HaLL和Huxley首先采用的一种应用于生物大分子研究的染色技术。与传统染色不同的是，样品进行负染色时，由于其与染液之间不发生反应，故样品本身并不着色。

采用免疫胶体金标记结合负染色电镜技术对体外组装的中间纤维定性

将免疫胶体金标记与电镜负染色技术相结合，清晰显示体外组装的波形纤维具有１０ｎｍ中间纤维结构特征，抗波形纤维蛋白－金颗粒特异地标记在波形纤维上。用抗波形纤维蛋白－金颗粒对体外组装的微管进行标记则呈阴性反应。实验结果表明将免疫胶体金标记与电镜负染色技术相结合可以同时显示体外组装的细胞骨架纤维的精细结构和蛋白属性。

应用电镜负染色技术检测嗜水气单胞菌

[目的]为鱼类疾病的诊断提供依据。[方法]从患病或濒死鲤鱼中分离培养优势菌株,制成病原菌悬浮液。应用负染悬滴法,负染漂浮法负染色技术检测鲤鱼嗜水气单胞菌,根据细菌的形态特征及鞭毛形状数量等指标判断菌体。[结果]2种负染色技术制备的嗜水气单胞菌样品在透射电子显微镜下视野清晰、分布均匀,无杂质和聚集现象。鲤鱼嗜水气单胞菌呈杆形,稍弯曲,两端钝圆,菌体一侧有极生单长鞭毛,呈管型,具运动力,与菌毛明显不同。电镜下菌体形态假象呈球样结构。[结论]采用电镜负染色技术检测鲤鱼嗜水气单胞菌可达到满意的效果。

应用单宁酸的负染色效果显示大鼠生殖器官微血管

近百年来,许多学者为研究器官内血管立体构筑倾注了大量心血,创造了多种显示微血管构筑的方法,诸如墨汁灌注法[1],橡胶[2]、维尼龙[3]血管、淋巴管立体铸型法,微血管铸型扫描电镜法[4],碱性磷酸酶法(钙铅法)[5]以及单宁酸-氯化铁媒染法(TA-Fe法)[6,7],为科学研究及临床应用做出了贡献.继TA-Fe法媒染微血管后,我们又发现单宁酸过度媒染某些组织结构,有类似电镜标本负染色技术效果,清晰地显示了大鼠子宫、卵巢、输卵管等器官的血管构筑特点.

应用电子显微镜的负染色技术快速检测樱桃树叶病毒

目的 :讨论应用电子显微镜负染色技术进行樱桃树叶病毒粒子的快速检测。方法 :对病株的典型叶片进行搅碎、离心制成悬液 ,用磷钨酸进行染色 ,在载网上干燥后 ,透射电镜下观察。结果 :在电镜下能清楚显示样品表面的微细结构。结论 :这种技术具有分辨率高、简单易行、快速等优点 。

同时观察立体病毒结构及核酸的负染色投影法

同时观察立体病毒结构及核酸的负染色投影法张珈敏，胡远杨，祖明生，朱丽华（武汉大学病毒研究所，武汉４３００７２）金属投影技术目前仍然是核酸分子观察中最主要的制样方法之一。负染色技术对于颗粒状的生物材料具有分辨率高（可达２ｎｍ），简单快速等优点，但在核酸...

原位负染色法鉴定过氧化氢酶

原位负染色法鉴定过氧化氢酶曾庆平，郭勇（华南理工大学生物工程系，广州５１０６４１）关键词过氧化氢酶，色谱过氧化氢可使橙黄色的高铁还原为普蓝色的亚铁，而过氧化氢在过氧化氢酶作用下分解成水和氧后，便失去还原能力。因此，将过氧化氢酶原位固定于滤纸等支持介质...

用负染色免疫电镜技术检测孕妇子宫内HBsAg的初步报告

我们选用HBsAg阳性的母血,胎心血,胎肝组织应用IEM技术对HBsAg进行了检测,现将结果报告如下。 1 材料和方法 1.1 标本来源选HBsAg阳性(P/N≥2.1或1:16++以上)血清标本及其引产的胎肝组织,胎心血,其中胎肝组织标本11份。

负染色技术的应用

负染色技术是透射电子显微镜的特殊应用技术。 该技术广泛应用于细菌、病毒、大分子结构、亚细胞碎片及分离的细胞器等研究工作中,特别是在病毒学领域,负染色发挥着独特的作用,是一项不可缺少的实验技术。

介绍一种外泌体负染色的改良方法

目的为在透射电镜下观察研究外泌体结构形态提供负染色方法.透射电镜是观察鉴定外泌体结构形态的重要研究手段.因常用负染色方法有很多种,包括醋酸双氧铀、磷钨酸、钼酸铵等染色对其外泌体负染色,且技术步骤也均有不同.方法本文介绍的方法是以传统醋酸双氧铀染色方法作为对比,介绍一种针对外泌体改良后的负染色方法并与之进行比较.结果与结论改良后的负染色方法外泌体的双层膜结构清晰,其杯托状结构清晰可见,且背景干净,反查效果佳.

脂蛋白电子显微结构研究的优化负染方法

人类心血管等疾病与胆固醇含量的高低有着十分密切的关系.人体内胆固醇主要通过血液中的脂蛋白来调节和运载.因此,新一代调节胆固醇的药物设计迫切地需要揭示脂蛋白分子结构与功能之间的关系.由于脂蛋白分子的成分高度复杂、结构特征灵活、尺寸微小,传统的蛋白质结构标定技术,如X射线衍射、核磁共振谱、质谱和冷冻电子显微镜等手段都面临着巨大的困难.针对这一问题,任罡小组最近提出一种优化的电镜负染制备方法,可以观测到单个脂蛋白分子的空间结构.此方法应用的成功,使得对单个脂蛋白分子的结构研究成为可能.同时也证明该负染色技术作为一种普遍的实验手段,可以用于对蛋白质小分子的结构研究,从而将促进新一代蛋白质分子药物的研发.

基于负染-电镜的Aβ体外聚集表征测试要点分析

本文应用电镜负染色技术,对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)中所涉及的β淀粉样肽(β-amyloid peptide,Aβ)的聚集规律进行了分析。通过对样品的浓度、p H值、温度和时间等设置系列梯度,以及调整负染试剂的种类、浓度和染色时间,优化了Aβ寡聚体样品制备以及电镜观察的最佳条件,获得了清晰的Aβ纤维图像并用以估算纤维长度。实验结果表明:经过六氟异丙醇给予单体化处理,并溶于无水二甲基亚砜(DMSO)的Aβ(100μmol·L^(-1)),在p H7.2的PBS中4℃孵育24 h,Aβ寡聚体形态清晰,且Aβ42寡聚体比Aβ40寡聚体聚集趋势更明显。在p H 8.0的硼酸缓冲液中,Aβ42(40μmol·L^(-1))在37℃孵育72 h后,纤维形成明显;而Aβ纤维样品经过煮沸后再制备负染样品,所得电镜图像更为清晰,便于对纤维长度和结构进一步分析。因此电镜负染色技术,可作为一种快捷,直观的Aβ体外聚集形貌表征的质控方法。

外泌体的不同染色方法效果比较

目的通过用四氧化锇、磷钨酸、钼酸铵和醋酸双氧铀4种染液分别对外泌体负染色,并对染色效果进行观察和对比分析,以期选出对外泌体染色效果最好的负染液。方法用差速离心法提取外泌体后,采用漂浮法分别用四氧化锇、磷钨酸、钼酸铵、醋酸双氧铀4种不同染液对外泌体进行负染色,透射电镜观察,从外泌体的杯托状或圆盘状结构清晰度、膜边缘锐利与否、染色背景干净程度、反差效果等方面对比4种染液的效果。结果四氧化锇的染色背景出现大量泡状结构,外泌体结构不明显。磷钨酸对外泌体的染色效果不如醋酸双氧铀和钼酸铵,外泌体的胞膜边缘不清晰,染色背景有杂质。钼酸铵对外泌体的染色效果也较好,其囊泡的膜结构较清楚,外泌体的杯托状结构可较清楚见到,但是反差较弱。醋酸双氧铀染色下,外泌体典型的杯托状或圆盘状结构清晰可见,膜边缘锐利,染色背景干净,反差效果佳。结论醋酸双氧铀对外泌体的染色效果最好,是最合适的负染染液。

双链羧酸和TTAOH复配体系的相行为研究

双链阴离子表面活性剂和单链阳离子表面活性剂复配体系的研究,为进一步完善表面活性剂聚集体形成的理论提供了实验基础,持续、深入地进行表面活性剂聚集体理论的研究,并用来指导实践生产,必将对胶体与界面科学、材料科学、生命科学的发展产生积极的推动作用。

盐引发阴离子/非离子表面活性剂复配体系中囊泡自发形成

在无盐时,阴离子表面活性剂十二烷基苯磺酸钠(SDBS)与非离子表面活性剂壬基酚聚氧乙烯(10)醚(TX-100)的复配体系中只有混合胶束存在,而盐的加入即可以引发体系中囊泡的自发形成,这使得囊泡的形成变得更加简单.引发机理可以归因于盐对离子表面活性剂的极性头双电层的压缩作用,减少了极性头的面积,加上非离子表面活性剂的参与使得堆积参数P增加,导致了半径更大的聚集体的形成.制作了SDBS/TX-100/盐水拟三元相图,通过目测和表面张力的变化确定了囊泡形成的带状区域,并用负染色电镜(TEM)对囊泡进行了表征,同时测定了盐度以及相同盐度下表面活性剂浓度对囊泡粒径的影响,发现囊泡的粒径随着盐度的增加而增加,而在同一盐度下,囊泡的粒径基本不受表面活性剂浓度的影响.

植物病毒电镜样品制备方法的研究

利用负染色法（包括直接负染色及免疫负染色法）和超薄切片法两种电镜制样技术，观察了烟草花叶病毒（ＴＭＶ）、黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）、小麦丛矮病毒（ＮＣＭＶ）等三种植物病毒．对植物病毒电镜样品制备方法进行了研究及讨论。

盐或尿素引发阴离子/阳离子表面活性剂复配体系中囊泡自发形成(英文)

在无盐时,阳离子表面活性剂磷酸酯(PTA)和阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)复配体系在某些比例得到自发形成的囊泡,而盐或尿素的加入可以扩大自发形成囊泡的比例范围,首次用尿素诱导了囊泡的自发形成,采用负染色透射电镜和动态光散射方法对囊泡进行了表征.并通过分子几何堆积因子f对盐和尿素诱导囊泡自发形成机理进行了理论上的探讨.

一种简便检测新型隐球菌感染的方法分析

目的分析脑脊液常规检查对新型隐球菌检测的临床意义。方法采用细胞计数板直接观察和墨汁负染色法确诊。结果45例隐脑患者脑脊液中,采用细胞计数板直接观察到隐球菌的43例,占95.6%,与墨汁负染色法比较无统计学意义(P>0.05)。结论在脑脊液常规检查增加隐球菌检测,能防止隐脑的漏诊和误诊及提高隐脑的治愈率。

侵染西瓜的黄瓜绿斑驳花叶病毒快速检测

黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV)是危害西瓜生产的重要病害,造成西瓜果实腐烂,失去商业价值。应用透射电子显微镜和单抗dot-ELISA技术对采自浙江温岭的西瓜病叶进行快速病原检测,电镜负染色观察到病株汁液中存在大量刚直杆状的病毒粒子,超薄切片观察到细胞质内存在整齐排列的杆状病毒聚集体,与烟草花叶病毒属(Tobamovirus)的形态特征相符;进一步采用dot-ELISA技术进行血清学检测,显示西瓜病叶与CGMMV特异性抗体呈阳性反应,检测结果表明感染西瓜的杆状病毒为CGMMV。从而为侵染西瓜的CGMMV提供快速检测途径。

黍子叶绿体中存在质粒状DNA

笔者以一种C4植物——黍子为材料,用无水法从黍子幼苗的叶片中分离出叶绿体,裂解后用常规的饱和酚抽提法制备叶绿体DNA(cpDNA)。经醋酸双氧铀负染色和铂钯合金旋转投影后,置透射电子显微镜下进行观察。结果表明。