烟草泛素化相关基因NbRGLG2和NbUBXN6负调控SRC7而影响植物抗性

泛素化修饰是一种蛋白质降解调控的重要途径,而E3泛素连接酶是泛素化系统的关键组分,结合并决定靶标蛋白。前期研究中从大豆中克隆了一个广谱抗病基因SRC7(SMV resistance cluster 7),其主要功能结构域是TN(TIR-NBS)结构域。本氏烟草(Nicotiana benthamiana)中两个编码泛素相关的蛋白NbRGLG2和NbUBXN6均与SRC7^(TN)具有互作。瞬时表达实验中NbRGLG2与NbUBXN6对SMV和TMV无抗性。然而,NbRGLG2与NbUBXN6与SRC7^(TN)共表达时,都会抑制SRC7^(TN)的抗病毒活性。过表达SRC7(Ox-SRC7)本氏烟草中沉默NbRGLG2基因和NbUBXN6基因时,它们可以增强SRC7^(TN)对SMV和TMV的抗性。这些结果显示,NbRGLG2与NbUBXN6负调控SRC7的抗病毒活性。

BRE-AS启动子负调控区变异与启动子活性、母猪繁殖力的关系

[目的]本试验旨在研究BRE反义lncRNA(BRE antisense lncRNA,BRE-AS)基因启动子负调控区(PNRR)序列特征,以及变异位点多态性与母猪繁殖性状、启动子活性的关系。[方法]采用DNA测序法获得大白猪BRE-AS基因PNRR序列;利用池DNA测序筛选大白猪BRE-AS基因PNRR上的变异位点,DNA测序法进行基因分型;利用GLM模型进行变异位点多态性、单倍型与母猪繁殖性状的关联分析;利用荧光素酶报告系统分析变异对BRE-AS基因启动子活性的影响。[结果]大白猪BRE-AS基因的PNRR位于-952~-161 nt,长度792 bp。在大白猪BRE-AS基因PNRR的-794和-756 nt处发现了2个变异位点,分别将其命名为g.-794T>G和g.-756A>C。在大白猪群体中BRE-AS基因g.-794T>G位点有3种基因型,其中TT型为优势基因型(0.752),T为优势等位基因(0.863);在g.-756A>C位点有3种基因型,其中AA型为优势基因型(0.759),A为优势等位基因(0.868);2个变异位点形成3种合并基因型,其中TT/AA型为优势基因型(0.760),T-A为优势单倍型(0.869)。关联分析发现2个位点及其合并基因型均与母猪总产仔数(TNB)、产活仔数(NBA)和健仔数(NSP)等3个繁殖性状间显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)关联。荧光素酶活性分析发现G-C单倍型启动子活性极显著高于T-A单倍型(P<0.01)。[结论]BRE-AS是大白猪繁殖性状的候选基因,其PNRR上2个变异位点(g.-794T>G和g.-756A>C)通过影响启动子活性影响其母猪繁殖力。

小麦TaMYB1A负调控苯丙烷代谢途径及植株的株高

苯丙烷途径是植物次生代谢产物合成的重要途径之一,可合成木质素、类黄酮和芥子酰基苹果酸类等化合物。该途径所产生的化合物不仅影响植物的生长发育及胁迫反应,还能用于生产香料、农药、染料、医药、饲料和生物质能源等。植物中的R2R3-MYB蛋白在植物次生代谢调节、器官发育和应对环境胁迫反应等方面均发挥重要的生物学功能。小麦(Triticum aestivum L.)是重要的粮食作物,在生产粮食的同时会产生大量秸秆等生物质;因此,研究小麦R2R3-MYB类转录因子在植物苯丙烷途径中的功能及调控机制对有效利用小麦秸秆具有重要意义。RT-PCR分析表明,TaMYB1A在小麦孕穗期的茎中表达水平较高;GFP-TaMYB1A融合蛋白在烟草表皮细胞中主要定位于细胞核;TaMYB1A在酵母系统中具有转录抑制活性。本研究以过表达TaMYB1A的转基因拟南芥株系为材料,分析了TaMYB1A对木质素积累/合成以及类黄酮化合物合成的影响。结果表明,过表达TaMYB1A抑制转基因拟南芥株系的株高(P<0.05),并显著降低了转基因拟南芥株系中木质素(P<0.05)和类黄酮(P<0.05)的合成。酵母单杂交结果显示,TaMYB1A能结合于拟南芥At4CL1、AtC4H、AtC3H和AtCHS以及小麦Ta4CL1和TaC4H1的启动子区;双荧光素酶报告系统显示,TaMYB1A抑制拟南芥中上述4个基因的表达;遗传学分析表明,TaMYB1A抑制小麦Ta4CL1和TaC4H1的表达;基因芯片和qRT-PCR结果表明,过量表达TaMYB1A抑制了转基因拟南芥苯丙烷途径中多数基因的表达;且转基因株系中4CL酶活性显著下降(P<0.05)。综上所述,小麦TaMYB1A属于R2R3型第四亚组MYB转录因子,通过与拟南芥和小麦苯丙烷途径关键基因的启动子结合并抑制相关基因的表达,从而负调控苯丙烷代谢途径及转基因株系的株高。

葡萄辅助因子VvVQ10负调控白藜芦醇生物合成分子机理研究

为探究葡萄辅助因子VvVQ10在调控白藜芦醇生物合成中的作用机制,通过分析已发表转录组数据、叶片瞬时遗传转化及酵母双杂交等方法进行作用机制解析。结果表明,葡萄VQ家族成员中VvVQ10在正常生长状况下呈高表达,紫外光处理呈上调表达,而伤害与霜霉菌侵染处理则显著下调;在山葡萄叶片中瞬时沉默VvVQ10,白藜芦醇及其糖苷(虎杖苷)含量显著升高;酵母双杂交分析表明,VvVQ10蛋白可与VvWRKY8蛋白互作,且结合位点在VvWRKY8的N段或包含DNA结合区的C段。以上结果表明,VvVQ10可通过与VvWRKY8蛋白互作的方式负调控葡萄白藜芦醇的生物合成。

重庆大学发现VAHOX1负调控番茄果实成熟

番茄是研究肉质果实发育和成熟的最佳模式植物,其果实成熟过程受乙烯信号及相关发育因子共同调控。鉴定果实成熟相关的关键调控因子对于进一步明晰果实成熟调控网络机制以及通过生物学手段提升果实品质和延长货架期均具有重要的意义。

Toll样受体信号通路的负调控

综述了Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)介导炎症反应信号通路的负调控机理.TLRs可以被病原体激活并迅速启动炎症反应,对先天性和获得性免疫反应起着重要调节作用.TLRs介导的免疫反应必须受到严格的调控,持续激活状态可长时间高表达炎症因子,导致机体产生慢性炎症、自身免疫紊乱和其他TLRs相关疾病.正常生理状态下,机体存在着多种TLRs的负调控机制,以维持免疫反应的平衡.该领域的研究近年来取得了重要进展,为许多免疫相关疾病的治疗提供了线索.

脓毒症中免疫负调控途径的研究进展

传统观念认为脓毒症（sepsis）是一种失控的、持久性全身炎症反应。目前,人们渐渐认识到,在脓毒症的发病过程中机体并非处于一成不变的免疫激活状态,负向调控机制在脓毒症的发生与发展中也发挥着重要作用。在脓毒症的初始阶段,以大量的促炎介质释放为主要特征,但随着病程的进展,机体可能经历了一个免疫负调控阶段,

细胞因子信号转导负调控因子家族

JAK/STAT是细胞因子发挥生物学功能的重要信号转导途径。作为抑制JAK/STAT途径的蛋白质—细胞因子信号转导负调控因子SOCS家族,目前已知有8个成员,细胞因子通过JAK/STAT通路调节该家族蛋白表达。近年来基因敲除在SOCS研究领域的广泛应用初步阐明了SOCS在体内的生物学功能。

PI3KγmRNA 3′非翻译区可能存在基因表达负调控区

为探索人磷脂酰肌醇 3 激酶γ(phosphoinositide 3 kinasePI3Kγ)基因 3′端非翻译区内AU富含区是否在基因表达调控中起作用 ,首先通过生物信息学分析发现在其 3′端非翻译区 (UTR)内存在0 9kb的AU富含区 ,其中包括 4个AU富含元件 ,以及 1个与众多基因非翻译区高度同源的长 130个碱基的区域 .将AU富含区插入报告基因egfp的下游构建pcDNA3 egfp AUR表达载体 .将表达载体转导NIH 3T3,74 0 2及K5 6 2细胞 ,流式细胞检测egfp的表达情况 .PI3Kγ基因 3′非翻译区AU富含区可显著降低egfp的表达 2～ 3倍 (P <0 0 1) .利用放线菌素D阻断RNA转录后 ,Northern印迹分析结果显示egfp AURmRNA较egfpmRNA不稳定 .实验结果提示 ,PI3Kγ基因 3′非翻译区AU富含区内可能存在转录后水平的基因表达负调控区 。

炎症小体信号通路的负调控

炎症小体(inflammasomes)活化后产生的IL-1β和IL-18等促炎因子对天然免疫和适应性免疫具有重要作用.炎症小体持续活化可引起促炎因子过度表达,导致慢性炎症和自身免疫疾病的发生.正常生理状态下,机体存在多种炎症小体负调机制,以维持免疫反应平衡.病理状态下,感染机体的病原微生物通过多种途径抑制炎症小体信号通路的活化及促炎因子的产生,以利于免疫逃逸.本文综述了机体和病原微生物对炎症小体信号通路的负调控机理.阐明炎症小体信号通路负调控机制将为感染性疾病及其他炎症小体相关炎症性疾病的治疗提供策略.

p53负调控前列腺癌细胞中PC-1基因的表达

在前列腺癌进展中发生的PC-1基因表达失调和p53基因突变,提示这两个事件之间可能存在的联系.用依托泊苷处理前列腺癌LNCaP细胞后,PC1蛋白的表达受抑制;瞬时转染分析表明野生型p53负调控PC1启动子的转录活性;缺失突变分析将PC1基因启动子上受p53负调控的区域定位在翻译起始位点上游757bp～323bp之间.缺失PC1启动子上的雄激素受体反应元件并没有消除p53对其转录活性的抑制作用;无论p53是否存在,组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA处理LNCaP细胞后可以导致PC1启动子转录活性升高.因此,p53和去乙酰化酶可以独立抑制PC1启动子活性.这些研究结果表明,野生型p53负调控PC1基因启动子的转录活性,而前列腺癌进展过程中p53突变可能和PC-1基因的表达失调有关.

人类免疫缺陷病毒1型病毒复制负调控因子编码基因的克隆及在BCBL-1细胞和NIH/3T3细胞中的表达

目的:分离克隆人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)编码的病毒复制负调控因子(Negative factor,Nef)基因,并将其导入BCBL-1细胞和NIH/3T3细胞中进行表达。方法:根据GenBank登记的Nef基因核苷酸序列设计PCR引物,在其5′端分别引入EcoRⅠ和SalⅠ酶切位点;以含有Nef基因的pCINL质粒为模板,扩增Nef基因,经双酶切后克隆进真核表达载体pCI-neo中。为了便于蛋白检测,在下游引物5′端引入Flag序列,构建重组真核表达质粒。重组质粒经酶切鉴定、核酸序列测定和分析后分别瞬时转染BCBL-1细胞和NIH/3T3细胞,用RT-PCR、Western blot分别从核酸和蛋白水平检测Nef基因的表达情况。结果:成功构建了含Nef基因的重组真核表达质粒,核酸序列分析显示,克隆的Nef基因序列全长651bp,与GenBank中登记的Nef基因序列100%同源,引入的Flag序列完全正确;RT-PCR和Western blot都在Nef预期位置检测到特异性条带。结论:HIV-1Nef基因在BCBL-1细胞和NIH/3T3细胞中获得了正确表达。

补髓生血颗粒对造血负调控因子IL-6和TGF-β_1的影响

目的 :探讨补髓生血颗粒剂对慢性再生障碍性贫血 (CAA)患者血清造血负调控因子IL - 6和TGF - β1表达水平的影响。方法 :采用免疫荧光法及流式细胞技术分别测定使用该颗粒剂治疗前后的CAA患者血清IL - 6和TGF - β1表达水平的影响 ,并与再障生血片对照组与正常组作比较研究。结果 :补髓生血颗粒剂与再障生血片临床疗效存在显著差异 (P <0 .0 5 ) ,两组疗前血清IL - 6和TGF - β1表达水平均明显高于正常组 ,疗后表达水平均下调。结论 :CAA患者血清中IL - 6和TGF - β1为造血负调控因子 ,参与了负向调控造血 ;补髓生血颗粒在下调造血负调控因子上优于再障生血片 ,提示补髓生血颗粒在调节CAA患者细胞免疫及下调造血负调控因子上发挥作用 ,从而改善了CAA的造血功能。

免疫性血小板减少症相关免疫负调控因子研究进展

ITP患者血小板减少的机制包括血小板消耗过多及产生不足,两者皆主由IgG抗血小板抗体介导[1],自身免疫的主靶点是血小板糖蛋白,如GPⅡb/Ⅲa和GPⅠb/Ⅸ。已经证实,ITP与血小板自身抗原的失耐受有关,而失耐受的原因仍不清楚。

NKX3.1基因上游一个30bp负调控区结合蛋白的初步鉴定

目的:鉴定NKX3.1基因上游30bp负调控区的结合蛋白。方法:人工合成30bp负调控序列,用末端转移酶对其进行地高辛标记;提取细胞核蛋白,采用电泳迁移率变动分析(EMSA)方法,检测细胞核提取液中与30bp负调控序列特异结合的核蛋白。结果:在LNCaP细胞及其他不同肿瘤细胞系核提取液中,检测到与30bp负调控序列特异结合的核蛋白,但在不同的细胞系中有不同种类的结合蛋白。结论:NKX3.1基因上游的30bp负调控机制在不同的细胞中普遍存在,不同的细胞核中有不同的结合蛋白,可能涉及不同的调控机理。

蛋白激酶D3对前列腺癌细胞中基质金属蛋白酶7的负调控作用

目的探讨蛋白激酶D3(PKD3)对前列腺癌细胞中基质金属蛋白酶7(MMP-7)的调控作用。方法应用佛波脂(PMA,100nmol/L)处理前列腺癌PC3细胞,Westernblotting和实时RT-PCR分别检测PKD3的激酶活性和MMP-7mRNA表达;将siRNA-PKD3瞬时转染PC3细胞以敲低PKD3的表达,同样用实时RT-PCR检测MMP-7mRNA的表达状况;在HEK293细胞中,分别过表达GFP-PKD3、siRNA-PKD3敲低PKD3的表达或先过表达GFP-PKD3再siRNA-PKD3敲低PKD3的表达,以上述同样的方法比较MMP-7mRNA相对表达量的变化。结果在PC-3细胞中,PMA诱导的PKD3的激活可明显降低MMP-7mRNA表达,反之,应用siRNA敲低PKD3的表达则明显提高MMP-7mRNA表达水平(P<0.01);同样,在HEK293细胞中,过表达PKD3可明显降低MMP-7的表达水平,而敲低PKD3可明显提高MMP-7的表达,且敲低PKD3可逆转PKD3过表达诱导的MMP-7下调。结论 PKD3可能通过负调控MMP-7的表达而介导前列腺癌的恶性进程。

血管平滑肌细胞生长的负调控

血管平滑肌细胞生长的负调控戴生明，单综述缪朝玉，苏定冯审校（第二军医大学药理学教研室，上海２００４３３）中国图书分类号Ｒ３９２．２；Ｒ９７２血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）生长包括增殖（细胞数量的增加）和肥大（细胞体积的增加）。ＶＳＭＣ异常生长是高血压、动...

干扰素信号通路及其负调控因素的研究进展

干扰素通过与细胞膜上的特异性受体结合,引发级联信号放大过程,将信号传递到胞核内,调控一系列基因表达相应抗病毒蛋白,进而发挥抗病毒作用。干扰素信号通路包括多条途径,其中贾纳斯激酶-信号转导和转录活化因子(JAK-STAT)通路是经典途径。目前证实有信号转导抑制因子(SOCS)、蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)、PIAS 3个负调控因子家族。SOCS同PTP家族中的SHP-1均是JAK-STAT信号转导负反馈圈的重要组成部分;PIAS是一个双向调节系统,在特定细胞因子刺激下,能增减STATs活化的数量。