BRE-AS启动子负调控区变异与启动子活性、母猪繁殖力的关系

[目的]本试验旨在研究BRE反义lncRNA(BRE antisense lncRNA,BRE-AS)基因启动子负调控区(PNRR)序列特征,以及变异位点多态性与母猪繁殖性状、启动子活性的关系。[方法]采用DNA测序法获得大白猪BRE-AS基因PNRR序列;利用池DNA测序筛选大白猪BRE-AS基因PNRR上的变异位点,DNA测序法进行基因分型;利用GLM模型进行变异位点多态性、单倍型与母猪繁殖性状的关联分析;利用荧光素酶报告系统分析变异对BRE-AS基因启动子活性的影响。[结果]大白猪BRE-AS基因的PNRR位于-952~-161 nt,长度792 bp。在大白猪BRE-AS基因PNRR的-794和-756 nt处发现了2个变异位点,分别将其命名为g.-794T>G和g.-756A>C。在大白猪群体中BRE-AS基因g.-794T>G位点有3种基因型,其中TT型为优势基因型(0.752),T为优势等位基因(0.863);在g.-756A>C位点有3种基因型,其中AA型为优势基因型(0.759),A为优势等位基因(0.868);2个变异位点形成3种合并基因型,其中TT/AA型为优势基因型(0.760),T-A为优势单倍型(0.869)。关联分析发现2个位点及其合并基因型均与母猪总产仔数(TNB)、产活仔数(NBA)和健仔数(NSP)等3个繁殖性状间显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)关联。荧光素酶活性分析发现G-C单倍型启动子活性极显著高于T-A单倍型(P<0.01)。[结论]BRE-AS是大白猪繁殖性状的候选基因,其PNRR上2个变异位点(g.-794T>G和g.-756A>C)通过影响启动子活性影响其母猪繁殖力。

PI3KγmRNA 3′非翻译区可能存在基因表达负调控区

为探索人磷脂酰肌醇 3 激酶γ(phosphoinositide 3 kinasePI3Kγ)基因 3′端非翻译区内AU富含区是否在基因表达调控中起作用 ,首先通过生物信息学分析发现在其 3′端非翻译区 (UTR)内存在0 9kb的AU富含区 ,其中包括 4个AU富含元件 ,以及 1个与众多基因非翻译区高度同源的长 130个碱基的区域 .将AU富含区插入报告基因egfp的下游构建pcDNA3 egfp AUR表达载体 .将表达载体转导NIH 3T3,74 0 2及K5 6 2细胞 ,流式细胞检测egfp的表达情况 .PI3Kγ基因 3′非翻译区AU富含区可显著降低egfp的表达 2～ 3倍 (P <0 0 1) .利用放线菌素D阻断RNA转录后 ,Northern印迹分析结果显示egfp AURmRNA较egfpmRNA不稳定 .实验结果提示 ,PI3Kγ基因 3′非翻译区AU富含区内可能存在转录后水平的基因表达负调控区 。

BIV－LTR中存在负调控区

为研究ＢＩＶ－ＬＴＲ调控序列的功能，将ＬＴＲ部分ＤＮＡ序列缺失，与荧光素酶基因相连构建质粒ｐＤ－３１９－Ｌｕｃ，ｐＤ－２６１－Ｌｕｃ，ｐＤ－１８１－Ｌｕｃ，ｐＤ－２－Ｌｕｃ，ｐＤ＋３２－Ｌｕｃ，ｐＤ－３１９－２６１－Ｌｕｃ，ｐＤ－１８１＋３２－Ｌｕｃ．通过磷酸钙共沉淀法将上述质粒及ｐＢＬＴＲ－Ｌｕｃ分别转染小牛肺细胞（ＦＢＬ），检测转染细胞裂解物荧光素酶活性，比较各质粒所克隆的ＢＩＶ－ＬＴＲ表达水平，发现－２６１位上游区存在负调控区，Ｒ区存在抑制ＬＴＲ表达的序列．