家兔支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及耐药基因检测

为深入了解兔支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb),试验将病兔体内分离得到的菌株进行菌株鉴定、生长曲线测定、致病性研究、药敏试验及耐药基因检测,期望了解该菌的生长规律,为临床用药及防控奠定基础。通过Gram染色镜检、分离培养、16S rDNA序列分析对分离菌株进行鉴定,测定了该分离株的生长曲线、半数致死量、耐药性并对分离菌株进行β-内酰胺酶耐药基因的检测。结果表明:分离得到1株革兰氏阴性杆菌,命名为P201215,该分离株的16S rDNA基因序列与GenBank中支气管败血波氏杆菌(登录号为NR113628.1)的同源性为99%。分离株的对数生长期为2~9 h,9 h后进入平台期;对KM小鼠的半数致死量为1.19×107 CFU。药敏试验结果显示,分离株对部分头孢菌素类药物耐药,对大部分β-内酰胺类、喹诺酮类、四环素类及氨基糖苷类药物敏感,PCR检测未检出超广谱β-内酰胺酶耐药基因。

兔支气管败血波氏杆菌病及其防治措施

兔支气管败血波氏杆菌病是家兔养殖业中常见的呼吸道性传染病,临床表现为严重的鼻炎、咳嗽、流涕、支气管肺炎和败血症,影响仔兔的成活率和生长速度。养殖者可通过加强日常饲养管理、降低刺激因素、强化生物安全防控、接种支气管败血波氏杆菌灭活苗或兔波氏杆菌与巴氏杆菌二联苗等进行预防。对于发病兔需隔离并进行及时治疗,以降低发病率,推动兔养殖业健康发展。

猫疱疹病毒Ⅰ型、猫杯状病毒、支气管败血波氏杆菌多重荧光定量PCR检测方法的建立与应用

旨在建立检测猫疱疹病毒Ⅰ型(Feline herpesvirus 1,FHV-1)、猫杯状病毒(Feline calicivirus, FCV)、支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)多重TaqMan荧光定量PCR方法。基于FHV-1的胸苷激酶(TK)基因、FCV的衣壳蛋白VP1基因、Bb的皮肤坏死毒素基因(DNT1)序列保守区域设计并合成TaqMan荧光定量PCR引物和探针,以FHV-1、FCV、Bb、猫细小病毒、沙门菌、金黄色葡萄球菌为模板验证引物和探针的特异性。制备重组质粒pMD18T-FHV-TK、pMD18T-FCV-VP1、pMD18T-Bb-DNT1作为标准品,经矩阵法确定最佳反应体系。以10倍梯度稀释的标准品为模板检测方法的灵敏性。应用建立的方法对32份临床具有上呼吸道感染症状的猫眼、口、鼻拭子检测,以评估该方法的可行性。结果显示:该方法可特异性检出FHV-1、FCV、Bb,且与猫细小病毒、沙门菌、金黄色葡萄球菌无交叉反应;灵敏度试验表明该方法对FHV-1、FCV、Bb的最低检出限分别为10、10和100拷贝/μL;应用该方法从32份猫临床样品中检测出FHV-1阳性11份、FCV阳性21份、Bb阳性4份,并经PCR测序验证。本研究初步建立了FHV-1、FCV、Bb多重TaqMan荧光定量PCR检测方法,具有特异性强、敏感性高的特点,为临床猫上呼吸道疾病病原的分子检测提供参考。

美洲鳗鲡“脱黏败血综合征”病原的分离鉴定及其致病性研究

为明确美洲鳗鲡“脱黏败血综合征”的病原,本研究采集福建省某养殖场的美洲鳗鲡病料组织样品制备病理切片,观察各组织病变,结果显示,病鳗的鳃、肝脏和肾脏呈现广泛性红细胞渗出和组织细胞变性、坏死。将病料样品接种鳗鲡肾脏细胞系(EK)进行病毒的分离,对分离病毒经电镜观察,结果显示,接种病料样品匀浆液的EK细胞出现合胞体病变,可见细胞核内有大量直径约120 nm的病毒。提取病毒基因后作为模板,采用PCR鉴定,结果证实其为鳗鲡疱疹病毒(AngHV),将其命名为AngHV-20713。进一步扩增分离病毒的ORF71基因并分析其同源性和遗传进化关系,结果显示,AngHV-20713与其它AngHV的同源性为93.6%~99.0%,且与分离自美洲鳗鲡的AngHV亲缘关系最近。将分离病毒以106 pfu/尾腹腔注射健康的美洲鳗鲡和欧洲鳗鲡,进行人工感染实验,结果显示,AngHV-20713对鳗鲡具有致病性,感染鳗鲡可见体表黏液脱落、胸鳍出血等“脱黏败血综合征”症状,并导致美洲鳗鲡60%的发病率和20%的死亡率,而感染的欧洲鳗鲡死亡率高达56.7%。利用qPCR从感染病毒的美洲鳗鲡各组织内均可检测到AngHV,从内脏可再次分离培养到AngHV-20713,表明AngHV是美洲鳗鲡“脱黏败血综合征”的病原。本研究为深入开展鳗鲡“脱黏败血综合征”的防控研究奠定了基础。

猫源支气管败血波氏菌的分离与鉴定

支气管败血波氏菌是引起猫呼吸道疾病的主要病原之一,而对猫源支气管败血波氏菌的分离鉴定目前国内鲜有报道。本研究对上海市1例有咳嗽症状的德文猫鼻拭子样品进行呼吸系统相关病原PCR检测,并对鼻拭子样品进行细菌分离培养,对分离菌株采用K-B纸片法进行药敏试验,同时检测分离菌株对小鼠的致病性。结果显示:猫杯状病毒、猫疱疹病毒、猫衣原体、猫支原体均为阴性,支气管败血波氏菌为阳性,并分离到1株支气管败血波氏菌;分离菌株对头孢拉定、氨苄西林、强力霉素等9种抗生素耐药,对阿莫西林、卡那霉素、氟哌酸、复方新诺明、美罗培南等15种抗生素敏感;用分离菌株接种ICR小鼠,发现小鼠出现精神沉郁症状,但未出现死亡。结果表明:上海市猫群中存在支气管败血波氏菌感染,需关注免疫力低下人群被感染的风险;分离株对小鼠致病力不强,但对首选治疗支气管败血波氏菌病的强力霉素耐药,建议选用敏感药物进行防治。本研究为猫源支气管败血波氏菌病的诊断与防治提供了参考。

鹅败血支原体和滑液囊支原体混合感染的诊断与治疗

本文通过采取发病情况调查、临床症状检查、病理剖检和ELISA抗原检测方法,对内蒙古西部地区某鹅场发病鹅进行诊断。结果显示:败血型支原体、滑液囊支原体阳性,即为混合感染。滑液囊支原体、败血型支原体用阿奇霉素、酒石酸泰乐菌素,另加氟苯尼考、替米考星治疗。健康鹅用黄芪多糖预防,2 d 1次,连用3次,效果显著。

猪源支气管败血波氏杆菌对庆大霉素异质性耐药的研究

为分析临床分离的52株猪源支气管败血波氏杆菌(Bb)在纸片扩散法(K-B)药敏试验中出现的庆大霉素(GEN)异质性耐药(HR)情况,本研究采用微量肉汤稀释法检测52株Bb分离株对GEN的最小抑菌浓度(MIC);采用K-B法检测分离株对GEN的敏感性;通过观察抑菌环内是否有菌落初步筛选疑似GEN HR菌株;采用菌落谱性分析法(PAP)测定初筛菌株的MIC与最大不抑菌浓度(MNIC)的比值,以及耐药亚群菌株的发生频率,验证初筛的HR菌株。结果显示:52株猪源Bb对GEN耐药的菌株占13.46%(7/52),多数分离株的MIC值为2μg/mL~8μg/mL,对GEN表现为敏感或中介,占全部菌株的86.54%(45/52),其中Bb48株的MIC为2μg/mL,抑菌环直径为16 mm属于GEN敏感菌株。通过观察纸片法药敏试验中的抑菌环内是否存在菌落,初步筛选对GEN HR的菌株。结果显示,有7株疑似HR菌株;PAP试验结果显示,6株疑似HR菌株的MIC/MNIC比值均小于8,为假阳性HR菌株,只有Bb48株的MIC/MNIC值为16且耐药亚群发生频率为1.3×10^(-6),按照标准判定其为GEN HR Bb菌株。从PAP试验验证的Bb48株中有菌落生长的最高浓度GEN平板上随机挑3株耐药亚群菌株,37℃培养12 h,每小时测一次菌落数,共测12 h连同Bb48株一起绘制生长曲线;将上述试验选取的3株耐药亚群菌株连续传50代,每5代测其MIC值判定耐药亚群菌株的耐药遗传稳定性。生长曲线结果显示Bb48株及其耐药亚群菌株的生长速率均无显著差异(P>0.05);耐药遗传稳定性试验结果显示,将Bb48株中的3株耐药亚群菌株传代,其中两株菌各代次的MIC均为32μg/mL,1株菌的MIC为8μg/mL~32μg/mL。表明耐药亚群菌株对GEN的耐药性能够有效遗传。上述结果表明,52株猪源Bb中的Bb48为GEN HR菌株,Bb48及其耐药亚群菌株的生长速率基本一致,且对GEN的耐药性能够稳定遗传。本研究首次得到了罕见的对GEN HR的Bb菌株,提示临床中应合理使用GEN,并监测HR菌株的出现,对临床使用GEN治疗猪源Bb感染具有重要指导意义。

四川省猪源支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及耐药基因和毒力基因检测分析

【目的】为了解四川省猪源呼吸道疾病支气管败血波氏杆菌的流行情况及菌株生物特性。【方法】采集56份病料进行支气管败血杆菌的分离纯化、药敏及相关耐药基因和毒力基因的筛选。【结果】分离到10株支气管败血波氏杆菌,分离率为17.86%。分离菌对青霉素、氨苄西林、羧苄西林、林可霉素、复方新诺明和头孢氨苄的耐药率为100%,对新霉素、氯霉素、氧氟沙星和左氧氟沙星高度敏感。共检出耐药基因9种,其中gyrA、sul1和tetC的检出率超过50%;共检出毒力基因6种,其中fla、dnt、prn和fhaB的检出率高达100%。小鼠致病试验结果显示大部分菌株具有较强的致病性。【结论】四川省主要流行的支气管败血波氏杆菌多重耐药情况严重,耐药机制复杂,耐药基因和耐药表型符合率较低,毒力基因检出率较高,且对小鼠呈现较强的致病性。研究结果可为四川省支气管败血波氏杆菌的防控和治疗提供参考。

脑膜炎败血伊丽莎白菌致老年患者医院感染的危险因素、临床特征及耐药性分析

本文探讨了老年患者脑膜炎败血伊丽莎白菌(Elizabethkingia meningoseptica,EM)感染的危险因素、临床特征及耐药情况,为临床有效的治疗提供参考。分析2018年1月—2023年1月绍兴市人民医院27株分离自60岁以上老年EM感染患者的菌株,采用VITEK-2全自动微生物鉴定药敏分析仪进行菌种鉴定和药敏实验,并统计该菌的感染临床特征和耐药性。结果表明,EM主要感染住院时间长(住院天数≥4周)的患者,占66.7%,存在严重基础疾病,其中呼吸系统疾病占44.4%,恶性肿瘤占22.2%,以及长期应用广谱抗菌药物及接受过有创操作的老年患者。标本类型以痰液标本为主(85.2%),其次为尿液(11.1%);患者主要来自重症医学科(74.1%),其次是放疗科(7.4%);EM对多种广谱抗菌药物表现为高度耐药,但对多西环素100%敏感,对头孢哌酮/他唑巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、复方新诺明、左氧氟沙星的耐药性均<30%。由此可知,存在严重基础疾病并长时间住院、联合使用广谱抗菌药物以及接受多种侵入性诊疗是老年患者感染EM的危险因素,且EM多重耐药现象严重。因此合理使用抗菌药,积极治疗原发病,尽量减少有创操作,缩短住院时间,加强医疗环境管理,有利于EM的治疗和预防。

支气管败血波氏菌共培养对马链球菌兽疫亚种致病相关特性的影响

旨在探究犬的传染性呼吸道疾病常见病原支气管败血波氏菌(Brodetella bronchiseptica,Bb)与马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi subsp.zooepidimicus,SEZ)共培养对2种细菌各自致病生物学特性的影响。将相同浓度菌体的SEZ与Bb在PBS中共培养24 h,然后采用平板划线法分离共培养后的单菌落SEZ(SEZBb)和Bb(BbSEZ),比较共培养前后菌株的生物被膜形成能力、对上皮细胞的黏附能力、抗巨噬细胞吞噬能力、胞内存活能力以及感染小鼠的存活率和组织细菌载量等方面的差异。结果显示:共培养后,BbSEZ的细菌数量和致病生物学特性均无明显改变,但SEZBb较单独培养的SEZ在细菌数量上减少约67%,在生物被膜形成能力、对上皮细胞A549的黏附能力以及在巨噬细胞内的存活能力等方面均有显著提升,对小鼠的致病性增强,且大大提高了对脑组织的侵袭能力。研究结果为揭示多病原混合感染的致病机制奠定了基础。

淡水养殖鱼类细菌出血性败血病药物防治研究

通过对防治淡水养殖鱼类细菌出血性败血病的口服药物败血宁的系列实验研究表明：败血宁主药（ＢＬ）对嗜水气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）的ＭＩＣ为４μｇ／ｍｌ，在剂量１０～３０ｍｇ／ｋｇ范围内进行鱼体内抗菌试验，对鲢、银鲫的预防和治疗性给药有效率皆在８０％以上，其ＬＤ５０为６１５．２ｍｇ／ｋｇ，属低毒，对鱼类较为安全；以３０、６０ｍｇ／ｋｇ的剂量口灌银鲫进行微核试验证实ＢＬ诱发红细胞微核率不明显，无潜在致突变作用。用ＨＰＬＣ法测定ＢＬ在鱼体内治疗浓度维持时间为８～９ｈ，消除半衰期ｔ（１／２β）为２．５ｈ，连续灌药３ｄ后停药５ｄ在银鲫血浆中未检测到ＢＬ的含量。以３０ｍｇ／ｋｇ的剂量进行了四年的池塘应用试验，统计有效率为９２．９％，疗效肯定。

同时从血液和脑脊液中分离出脑膜败血伊丽莎白菌1例

脑膜败血伊丽莎白菌（Elizabethkingia meningoseptica,EME）广泛存在于自然界中,是一种条件致病菌,可引起败血症、脑膜炎、心内膜炎、免疫低下成人肺炎等;新生儿免疫力低,血脑屏障功能不健全,EME感染导致脑膜炎、败血症,病情严重,如不及时准确地使用有效抗生素治疗,致畸率和死亡率高,笔者于2015年7月从1例新生儿血液和脑脊液中分离出脑膜败血伊丽莎白菌,现报告如下。

父母代种鸡场防治鸡败血霉形体病方法

鸡慢性呼吸道病（CRD）是由鸡败血霉形体（MG）引起的常见传染病。临床上主要表现为咳嗽、呼吸哕音、眼炎，剖检病变包括鼻窦、气管、支气管、气囊有炎症并有黄色分泌物。病鸡生长缓慢，大批死亡，并易继发或并发其他疾病，特别是大肠杆菌病，给养鸡业带来巨大的经济损失。陆享岳1994-1995年走访浙江省16个县（市）约200多个养鸡户，调查发现，仔鸡阶段发生CRD的鸡群多达88％，有的地区高达100％；2-3日龄的雏鸡也可发病，但大多发生在2周龄的雏鸡。

脑膜败血伊丽莎白菌感染致足月新生儿脑膜炎一例并文献复习

脑膜败血伊丽莎白菌(Elizabethkingia meningo-septica,E.meningoseptica)广泛存在于水、土壤及医院等各种环境中,是重要的条件致病菌,可引起心内膜炎、败血症、脑膜炎等多种疾病[1]。国内对新生儿感染脑膜败血伊丽莎白菌的病例报道极少,尤其罕见足月新生儿感染,本文就浙江省嘉兴市妇幼保健院收治的1例脑膜败血伊丽莎白菌感染致足月新生儿脑膜炎病例的诊疗过程进行分析回顾,并结合国内外文献复习,对该病的临床特点、诊治进行总结探讨,以期提高对该病的诊疗水平。

丽株呼泰对鸡败血霉形体和大肠杆菌混合感染的疗效试验

为了科学、客观地评价广东省信宜市丽株动物药业有限公司研制的中西药复方制剂-丽株呼泰散对败血霉形体和细菌引起鸡呼吸系统疾病的临床疗效,使治疗试验具有代表性和临床意义,采用人工诱发鸡败血霉形体与大肠杆菌混合感染为病理模型,进行丽株呼泰散内服给药的实验性治疗.现将试验情况介绍如下.

猪源支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

【目的】探讨2003～2006年间支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)在中国湖北等十余省市猪群中的流行病学分布和协同感染特性并对部分菌株进行生物学特性研究。【方法】采用病原菌的形态学观察、生化鉴定和PCR鉴定,从2 057份有肺炎或萎缩性鼻炎症状猪的肺脏等病料组织中分离出190株Bb和不同数量的其它共感染菌。经生化鉴定,药敏试验、血凝试验及动物试验等方法进行检测和分析。【结果】在中国湖北等十余省市的猪群中,不同省份Bb的总分离率介于7.3%～14.1%之间;不同年份Bb的总分离率介于7.3%～11.8%之间;2003～2006年间的Bb总分离率为9.2%;Bb的分离率与猪日龄有一定的关系。Bb最常见的共感染菌依次是链球菌(55.9%)、副猪嗜血杆菌(50.0%)、大肠杆菌(43.1%)、巴氏杆菌(25.5%)、绿脓杆菌(17.6%)和沙门氏菌(11.8%)。在43份有典型萎缩性鼻炎症状猪的病料中,分离出22株Bb、7株产毒素巴氏杆菌和6株绿脓杆菌;在分离出产毒素巴氏杆菌的7份病料中均同时分离出了Bb,而其中6份又同时分离出了绿脓杆菌。对2003年分离的31株Bb进行药敏试验、红细胞凝集试验和乳鼠皮肤坏死试验。结果表明:各菌株对15种药物的耐药谱不同,但对卡那霉素、庆大霉素、多粘菌素B、环丙沙星和舒普深高度敏感;各菌株均可凝集猪和羊的红细胞且能不同程度导致乳鼠皮肤坏死。【结论】在中国湖北等十余省市的猪群中,Bb与其它病原菌的共感染情况非常严重,且在萎缩性鼻炎的病猪中检出率最高。

日本鳗鲡败血腹水病病原研究

20 0 0年 3月中旬 ,自福建仙游某日本鳗鲡 (Anguillajaponica)养殖场患败血腹水症的发病日本鳗鲡的肝脏及腹水处分离到四株细菌 ,经鉴定其中一株为迟钝爱德华氏菌 (Edwardsiellatarda) ,一株温和气单胞菌(Aeromomassobria)和两株嗜水气单胞菌 (Aeromonashydrophila)溶血试验 ,小鼠攻毒试验显示 ,上述四株细菌都有较强的毒力 ,综合分析 。

牙鲆(Paralichthys olivaceus)细菌败血感染症及病原检验与分析

采用调查统计、剖检病变、病原分离鉴定与人工感染健康鱼致病作用试验的方法 ,对自然发生的养殖牙鲆细菌败血感染症病例 ,进行了发病情况、临床表现及病理变化等方面的检验 ,同时取病 (死 )牙鲆的肝、腹水、腐烂肌肉组织为材料进行细菌分离 ,对分离于 1 0尾鱼 2 0株纯培养菌的形态特征、理化特性等进行鉴定。结果表明 ,分离出来的两种细菌 ,一种是弧菌属(VibrioPacini 1 85 4 )细菌的一个新种 (sp .nov .)并定名为牙鲆弧菌 (Vibrioolivaceussp .nov .) ;另一种是气单胞菌属 (AeromonasKluyverandvanNiel 1 936)的嗜水气单胞菌 (A .hydrophila)。通过人工感染试验等表明该两种分离菌为相应感染症的致病菌。

鲟细菌性败血综合征致病菌的初步研究

从患细菌性败血综合征的杂交鲟(Huso huso♀×Acipenser ruthenus ♂)和达氏鳇(Huso dauricus)的腹水及肾脏中共分离了5株优势菌,经人工回归感染实验证实其中2株细菌XL2-T和HK3-R具有致病性。经ATB细菌鉴定仪鉴定,结果显示:XL2-T为豚鼠气单胞菌(Aeromonas punctata subsp.caviae),HK3-R为类志贺邻单胞菌(Plesiomonas shigelloides)。这2株致病菌的主要特征为:革兰氏染色阴性,杆状,氧化酶阳性,对先锋必、妥布霉素、头孢曲松、头孢噻肟、奈替米星、新霉素等6种药物均高度敏感。