败血宁Ⅰ型防治暴发性鱼病试验效果

暴发性鱼病是近年来严重危害淡水养殖鱼类的一种传染性鱼病,该病流行地区广,发病季节长,患病品种多,死亡率高。为解除该病之危害,我们利用已经分离到的病原菌,针对几十种抗菌药进行筛选试验,配伍成一种新型鱼用药物——败血宁Ⅰ型。通过两年的抑菌、鱼体防治、毒性等试验,表明该药具有抑菌效果好、安全浓度高等特点。现将败血宁Ⅰ型1992年在生产单位应用于防治暴发性鱼病的情况报告如下: 一、防治情况试验塘分布在湖北的沙市、江陵、公安、荆门、松滋、孝感、枝江等七个县市,试验用败血宁Ⅰ型共350公斤。

家兔支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及耐药基因检测

为深入了解兔支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb),试验将病兔体内分离得到的菌株进行菌株鉴定、生长曲线测定、致病性研究、药敏试验及耐药基因检测,期望了解该菌的生长规律,为临床用药及防控奠定基础。通过Gram染色镜检、分离培养、16S rDNA序列分析对分离菌株进行鉴定,测定了该分离株的生长曲线、半数致死量、耐药性并对分离菌株进行β-内酰胺酶耐药基因的检测。结果表明:分离得到1株革兰氏阴性杆菌,命名为P201215,该分离株的16S rDNA基因序列与GenBank中支气管败血波氏杆菌(登录号为NR113628.1)的同源性为99%。分离株的对数生长期为2~9 h,9 h后进入平台期;对KM小鼠的半数致死量为1.19×107 CFU。药敏试验结果显示,分离株对部分头孢菌素类药物耐药,对大部分β-内酰胺类、喹诺酮类、四环素类及氨基糖苷类药物敏感,PCR检测未检出超广谱β-内酰胺酶耐药基因。

一例鸡败血支原体病的诊治

对一例顽固性咳嗽的肉鸡进行诊治,根据发病情况、临床症状、剖检病变和实验室检查结果确诊为鸡败血支原体病,采取综合性防控措施后控制了病情。

犬源支气管败血波氏杆菌的分离鉴定和全基因组测序分析

为明确致犬严重呼吸道症状的病原菌及其病原特征,本试验采集患有严重呼吸道症状病死犬肺脏脓包样本,通过病原菌的分离纯化和形态学观察、生化试验、16S rRNA基因测序鉴定、生长曲线绘制对分离菌株进行种属鉴定;通过微量肉汤稀释法检测分离菌株的药物敏感性;通过溶血试验和小鼠感染试验检测分离菌株的致病性;通过全基因组测序分析分离菌株基因环境。结果显示,本试验分离菌株为支气管败血波氏杆菌,命名为Z2。药敏试验结果显示,分离菌株Z2对头孢曲松、头孢喹肟、链霉素和替米考星耐药,对恩诺沙星、多西环素和氟苯尼考等11种药物敏感。该分离菌株具有一定的溶血活性,对小鼠的半数致死量(LD50)为5.01×10^(5)CFU/mL。该分离菌株全基因组大小为5257583 bp,含有4887个基因;仅携带3个耐药基因,介导其对磺胺类和氨基糖苷类药物耐药,但未检测到β-内酰胺类耐药基因;共有1169个致病性相关基因,其中粘附性毒力基因最多,包括细胞间粘附蛋白、百日咳粘附素、菌毛、鞭毛和被膜等毒力基因。结果表明,分离菌株Z2具有较高的耐药性和致病性。本试验结果为支气管败血波氏杆菌的致病性研究提供了一定的参考价值。

犬支气管败血波氏杆菌的分离鉴定和灭活疫苗初步应用

某实验比格犬养殖场部分犬出现咳喘和口鼻流血等症状,严重者死亡。为了调查发病原因并采取针对性措施,本试验采集临床发病犬的鼻腔拭子、死亡犬的肺脏和气管分泌物等,进行细菌分离培养;通过形态观察、革兰染色、16S rRNA和ptxA基因测序,对分离细菌进行鉴定,并对部分菌株进行药敏试验。选取1株致病性强的分离菌株制备支气管败血波氏杆菌蜂胶佐剂灭活疫苗,进行免疫保护试验,分别采用1.0和0.5 mL剂量免疫小鼠,免疫后21 d攻毒;对养殖场临床发病犬和同群健康犬进行紧急免疫接种,剂量为4月龄以上犬每只1.0 mL、2~4月龄犬每只0.5 mL。对临床病死犬和攻毒死亡小鼠进行组织病理学观察。结果显示,从临床发病犬的鼻腔拭子、肺脏、气管和鼻腔黏液状分泌物共分离鉴定获得30株支气管败血波氏杆菌。药敏试验结果显示,临床分离菌株对环丙沙星和米诺环素高度敏感,但临床治疗效果不明显。免疫保护试验中,1.0 mL和0.5 mL蜂胶佐剂灭活疫苗对小鼠的保护率均可达100%;紧急免疫接种后,临床发病犬逐渐恢复,同群健康犬无新发病个体,疫苗免疫效果良好。组织病理学观察发现,临床病死犬和攻毒死亡小鼠均表现典型的支气管肺炎和肺气肿病变,肝细胞呈水泡样变。结果表明,支气管败血波氏杆菌是导致该场部分犬出现呼吸道疾病的病原体,蜂胶灭活疫苗可有效防控实验用比格犬支气管败血波氏杆菌感染。

淡水养殖鱼类细菌出血性败血病药物防治研究

通过对防治淡水养殖鱼类细菌出血性败血病的口服药物败血宁的系列实验研究表明：败血宁主药（ＢＬ）对嗜水气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）的ＭＩＣ为４μｇ／ｍｌ，在剂量１０～３０ｍｇ／ｋｇ范围内进行鱼体内抗菌试验，对鲢、银鲫的预防和治疗性给药有效率皆在８０％以上，其ＬＤ５０为６１５．２ｍｇ／ｋｇ，属低毒，对鱼类较为安全；以３０、６０ｍｇ／ｋｇ的剂量口灌银鲫进行微核试验证实ＢＬ诱发红细胞微核率不明显，无潜在致突变作用。用ＨＰＬＣ法测定ＢＬ在鱼体内治疗浓度维持时间为８～９ｈ，消除半衰期ｔ（１／２β）为２．５ｈ，连续灌药３ｄ后停药５ｄ在银鲫血浆中未检测到ＢＬ的含量。以３０ｍｇ／ｋｇ的剂量进行了四年的池塘应用试验，统计有效率为９２．９％，疗效肯定。

兔支气管败血波氏杆菌病及其防治措施

兔支气管败血波氏杆菌病是家兔养殖业中常见的呼吸道性传染病,临床表现为严重的鼻炎、咳嗽、流涕、支气管肺炎和败血症,影响仔兔的成活率和生长速度。养殖者可通过加强日常饲养管理、降低刺激因素、强化生物安全防控、接种支气管败血波氏杆菌灭活苗或兔波氏杆菌与巴氏杆菌二联苗等进行预防。对于发病兔需隔离并进行及时治疗,以降低发病率,推动兔养殖业健康发展。

猪源支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

【目的】探讨2003～2006年间支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)在中国湖北等十余省市猪群中的流行病学分布和协同感染特性并对部分菌株进行生物学特性研究。【方法】采用病原菌的形态学观察、生化鉴定和PCR鉴定,从2 057份有肺炎或萎缩性鼻炎症状猪的肺脏等病料组织中分离出190株Bb和不同数量的其它共感染菌。经生化鉴定,药敏试验、血凝试验及动物试验等方法进行检测和分析。【结果】在中国湖北等十余省市的猪群中,不同省份Bb的总分离率介于7.3%～14.1%之间;不同年份Bb的总分离率介于7.3%～11.8%之间;2003～2006年间的Bb总分离率为9.2%;Bb的分离率与猪日龄有一定的关系。Bb最常见的共感染菌依次是链球菌(55.9%)、副猪嗜血杆菌(50.0%)、大肠杆菌(43.1%)、巴氏杆菌(25.5%)、绿脓杆菌(17.6%)和沙门氏菌(11.8%)。在43份有典型萎缩性鼻炎症状猪的病料中,分离出22株Bb、7株产毒素巴氏杆菌和6株绿脓杆菌;在分离出产毒素巴氏杆菌的7份病料中均同时分离出了Bb,而其中6份又同时分离出了绿脓杆菌。对2003年分离的31株Bb进行药敏试验、红细胞凝集试验和乳鼠皮肤坏死试验。结果表明:各菌株对15种药物的耐药谱不同,但对卡那霉素、庆大霉素、多粘菌素B、环丙沙星和舒普深高度敏感;各菌株均可凝集猪和羊的红细胞且能不同程度导致乳鼠皮肤坏死。【结论】在中国湖北等十余省市的猪群中,Bb与其它病原菌的共感染情况非常严重,且在萎缩性鼻炎的病猪中检出率最高。

日本鳗鲡败血腹水病病原研究

20 0 0年 3月中旬 ,自福建仙游某日本鳗鲡 (Anguillajaponica)养殖场患败血腹水症的发病日本鳗鲡的肝脏及腹水处分离到四株细菌 ,经鉴定其中一株为迟钝爱德华氏菌 (Edwardsiellatarda) ,一株温和气单胞菌(Aeromomassobria)和两株嗜水气单胞菌 (Aeromonashydrophila)溶血试验 ,小鼠攻毒试验显示 ,上述四株细菌都有较强的毒力 ,综合分析 。

鲟细菌性败血综合征致病菌的初步研究

从患细菌性败血综合征的杂交鲟(Huso huso♀×Acipenser ruthenus ♂)和达氏鳇(Huso dauricus)的腹水及肾脏中共分离了5株优势菌,经人工回归感染实验证实其中2株细菌XL2-T和HK3-R具有致病性。经ATB细菌鉴定仪鉴定,结果显示:XL2-T为豚鼠气单胞菌(Aeromonas punctata subsp.caviae),HK3-R为类志贺邻单胞菌(Plesiomonas shigelloides)。这2株致病菌的主要特征为:革兰氏染色阴性,杆状,氧化酶阳性,对先锋必、妥布霉素、头孢曲松、头孢噻肟、奈替米星、新霉素等6种药物均高度敏感。

中华鲟脑膜败血伊丽莎白菌的分离鉴定及药敏特性

为了确定中华鲟养殖基地一尾死亡子二代中华鲟的病原,利用传统病原菌分离方法,从濒死的中华鲟肝脏、脾脏和腹水中均分离到一株优势菌EM,采用16S r DNA基因序列分析、构建系统发育树并结合Biolog微生物自动分析系统进行鉴定,确定菌株EM为脑膜败血伊丽莎白菌。进一步对健康子二代达氏鲟进行人工感染试验确定其致病性;同时通过观察患病子二代中华鲟组织切片分析其病理特征;并对菌株EM进行药敏特性研究以期指导临床用药。结果显示,被感染子二代中华鲟肝脏、脾脏及肾脏组织中铁血黄素沉积、实质性细胞空泡变性,溶血严重。菌株EM人工感染健康子二代达氏鲟,发现其对达氏鲟具有致病性,且从人工感染患病的达氏鲟肝脏中再次分离到相同的病原菌。药物敏感性试验表明,中华鲟脑膜败血伊丽莎白菌对米诺环素、克林霉素、克拉霉素和麦迪霉素4种药物敏感,对四环素、头孢噻肟和头孢西叮3种药物中度敏感,对其余28种药物不敏感,呈多重耐药性。本研究首次发现脑膜败血伊丽莎白菌可感染中华鲟,并对达氏鲟也具有致病性,并初步研究了病原菌的生物学特性、病理特征和药物敏感性,以期为该病的诊断和防治提供理论依据。

牙鲆(Paralichthys olivaceus)细菌败血感染症及病原检验与分析

采用调查统计、剖检病变、病原分离鉴定与人工感染健康鱼致病作用试验的方法 ,对自然发生的养殖牙鲆细菌败血感染症病例 ,进行了发病情况、临床表现及病理变化等方面的检验 ,同时取病 (死 )牙鲆的肝、腹水、腐烂肌肉组织为材料进行细菌分离 ,对分离于 1 0尾鱼 2 0株纯培养菌的形态特征、理化特性等进行鉴定。结果表明 ,分离出来的两种细菌 ,一种是弧菌属(VibrioPacini 1 85 4 )细菌的一个新种 (sp .nov .)并定名为牙鲆弧菌 (Vibrioolivaceussp .nov .) ;另一种是气单胞菌属 (AeromonasKluyverandvanNiel 1 936)的嗜水气单胞菌 (A .hydrophila)。通过人工感染试验等表明该两种分离菌为相应感染症的致病菌。

猪萎缩性鼻炎支气管败血波氏杆菌PCR检测方法的建立

对表现猪萎缩性鼻炎临床症状的猪群中分离得到的34株支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb),采用针对Bb flagellum gene的一对引物进行PCR扩增,结果所有分离物均能扩增出237bp特异性DNA条带,与传统生化鉴定结果相一致,且其最小检出量为0.64pg;而猪鼻腔和肺组织中常见的多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌、铜绿假单胞菌、变形杆菌及大肠埃希氏菌均未能出现任何DNA条带。这表明,本试验建立的PCR方法具有特异性强、灵敏度高、可靠性好等特点,可用于猪萎缩性鼻炎的临床诊断。

草鱼和青鱼细菌性败血感染症的病原菌研究

以发病死亡的草鱼（Ctenopharyngodon idellus）和青鱼（Mylopharyngodon piceus ）肝脏、肾脏为材料进行细菌分离。对分离出作纯培养的菌株，按常规方法进行形态与培养特征、主要理化特性的鉴定及16S rRNA基因序列测定与系统发育学分析；以常用的琼脂扩散（K—B）法测定对抗菌类药物的敏感性，以是否出现抑菌圈及其直径大小作为敏感、耐药的判定指标；用3×10^8 CFU／mL的菌液对健康鲤鱼（腹腔接种0．3mL／尾）进行人工感染试验，以引起发病死亡并能重新检出感染菌作为致病性的判定指标。结果表明，供试4株纯培养菌（编号：HL060811—1至HL060811—4）均为气单胞菌属Aeromonas）的嗜水气单胞菌（A．hydrophila）；均表现对供试的头孢唑啉等29种抗菌药物敏感（抑菌圈直径16～42mm），对青霉素G等8种药物耐药或低度敏感（抑菌圈直径0—14mm）；能引起供试健康鲤鱼的发病与死亡，并能从感染死亡鱼肝组织中检出相应感染菌。

兔源支气管败血波氏杆菌和肺炎克雷伯菌的分离鉴定及其对抗菌药物的敏感性分析

兔感染支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica)和肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)后,常引起兔多发性呼吸道疾病,严重危害家兔养殖业。作者剖检河南省某兔场疑似病死兔,并采集组织分离鉴定病原菌,然后进行药敏试验,以期确定引起兔呼吸困难、腹泻的病原。结果显示,经细菌分离培养得到1株革兰阴性、两端钝圆的小杆状可疑致病菌及1株革兰阴性、卵圆形的可疑致病菌;其16S rRNA基因序列扩增片段大小分别为1492和1494 bp,与B.bronchiseptica AU 12671和K.pneumoniae菌株F5feb.57相似性分别为99.85%和100.00%,即该兔场患病兔为B.bronchiseptica和K.pneumoniae混合感染。药敏试验结果显示所分离的B.bronchiseptica和K.pneumoniae同时对庆大霉素、头孢曲松、头孢唑啉3种药物敏感,对其他药物有不同程度的耐药性。综上表明,此次分离的细菌为B.bronchiseptica和K.pneumoniae,本试验为家兔B.bronchiseptica和K.pneumoniae混合感染的分离鉴定及科学用药提供参考。

猪源支气管败血波氏杆菌百日咳杆菌黏附素基因的原核表达及其抗体检测ELISA方法

[目的]以猪源支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)百日咳杆菌黏附素(PRN)基因的原核表达产物为抗原建立检测PRN抗体的间接ELISA方法。[方法和结果]利用谷胱甘肽-S-转移酶(GST)表达系统对PRN基因在大肠杆菌中进行融合表达。SDS-PAGE和Westernblot检测证实该基因获得高效表达,产物易于纯化且具有良好的免疫学活性。通过凝血酶酶切GST-PRN并回收,获得不含GST载体蛋白的PRN蛋白片段。以PRN蛋白片段为抗原建立检测天然PRN抗体的间接ELISA方法。该方法对猪巴氏杆菌病等7种常见细菌性疾病阳性血清的检测结果均为阴性,其敏感性比乳胶凝集试验提高4～128倍,能检测到人工感染14d后的仔猪血清抗体IgG,对临床送检的1,229份猪血清的检测阳性率为32.7%。ELISA方法对阳性猪场的监测结果预示了保育期仔猪的合群导致猪群大量感染支气管败血波氏杆菌。[结论]该方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点,可用于猪群PRN抗体水平监测和猪波氏菌病流行病学调查。

败血支原体16S rRNA基因的克隆与核酸序列分析

从败血支原体Ｄ９６０４株培养物中直接快速提取染色体ＤＮＡ；构建了ＭＧ基因文库，以ＰＣＲ扩增１６ＳｒＲＮＡ基因全长片段，并对其进行了核苷酸序列分析。结果表明，Ｄ９６０４株与Ａ５９６９株只有５个核苷酸的差异，同源性为９９．６７％。

牛源支气管败血波氏杆菌的分离与鉴定

从2008年黑龙江省某奶牛场犊牛中暴发的一种以呼吸道病变为主疾病的患病牛中分离出3株细菌,根据其形态特征、培养特性、生化特性等将分离菌鉴定为支气管败血波氏杆菌。对分离菌进行药敏试验、皮肤坏死试验及16 S rRNA基因的克隆和序列分析。结果显示,该菌对氟哌酸、丁胺卡那霉素、庆大霉素、氯霉素敏感,可导致豚鼠皮肤坏死;其16 S rRNA基因序列与GenBank中收录的标准菌株Bb RB50株(BX640449)同源性为100%。证实,引起该病的病原是支气管败血波氏杆菌。

兔支气管败血波氏杆菌的分离与鉴定

对陕西商洛某养殖场病死兔解剖、无菌采取病料,从病料中分离到1株革兰阴性小杆菌,经生物学特性试验和生理生化试验鉴定,为兔支气管败血波氏杆菌。药敏试验结果表明,该分离菌株对环丙沙星、氟哌酸、氧氟沙星等抗生素高度敏感;对氯霉素、红霉素、四环素等抗生素耐药。外毒素试验和动物致病性试验对小白鼠均有致病作用。

兔多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌复合PCR方法的建立及临床应用

根据Gen Bank中多杀性巴氏杆菌ATP合成酶基因(atp B)的保守序列设计特异性引物,建立巴氏杆菌PCR检测方法,并与已建立的支气管败血波氏杆菌PCR检测方法进行合并,经反应条件的优化,成功建立多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌复合PCR诊断方法。该方法检出的最小多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌菌数分别为40 CFU和4 CFU;对兔源产气荚膜梭菌、大肠杆菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、猪鼻支原体、链球菌的检测结果均为阴性,说明该方法具有良好的特异性。用该方法对中国4个省份采集的临床鼻拭子样本共712份进行检测,结果显示,多杀性巴氏杆菌阳性率为25.56%,支气管败血波氏杆菌阳性率为34.55%,双阳性率为13.20%。该复合PCR方法能快速、敏感地从家兔鼻拭子样品中检出多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌,为临床疾病检测和流行病学调查提供了技术保障。