水蛭素对缺氧诱导心脏微血管内皮细胞间质转分化的作用及机制研究

目的探讨通络药物水蛭素对缺氧诱导的人心脏微血管内皮细胞(HCMECs)间质转分化(EndMT)的作用及可能机制。方法取常规培养的HCMECs细胞,随机分为对照组、缺氧组、水蛭素组(包括0、20、40、80、100μg/ml 5个浓度)。对照组常规培养不做任何处理,缺氧组置入低氧培养箱72 h,水蛭素组预加入Hirudin工作液,4 h后置入低氧培养箱72 h。MTS比色法检测HCMECs增殖能力;倒置显微镜观察HCMECs形态;免疫荧光鉴定HCMECs间质转分化情况,Western-blot检测内皮间质转分化相关蛋白:包括内皮细胞标记血小板—内皮细胞黏附分子(PECAM-1/CD31)、血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin),间质细胞标记α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、成纤维细胞特异性蛋白-1(FSP-1),以及低氧诱导因子1α(HIF-1α)、转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad同源物2/3(Smad2/3)、锌指转录因子(snail)等相关信号通路的蛋白表达。结果MTS法检测显示,缺氧显著抑制细胞活性(P<0.01),水蛭素在20~100μg/ml浓度范围内可提高细胞活性,且呈现浓度依赖性,当浓度为100μg/ml时细胞活性最强(P<0.01)。各组细胞培养72 h后,倒置显微镜下观察发现:对照组细胞呈铺路石样或鹅卵石状结构,缺氧组细胞由鹅卵石状结构变为分散的长梭形,接近成纤维细胞形态,水蛭素组长梭形细胞形态明显改善,细胞恢复鹅卵石样。Western-blot与免疫荧光结果显示:与对照组比较,缺氧组CD31、VE-cadherin蛋白水平降低(P<0.01),且vWF表达减少,α-SMA、FSP-1蛋白水平升高(P<0.01),且vimentin表达增强;与缺氧组比较,水蛭素明显增加CD31、VE-cadherin蛋白表达(P<0.01),并增强vWF表达,下调α-SMA、FSP-1蛋白表达(P<0.01),并减弱vimentin表达;与对照组相比,缺氧组信号通路HIF-1α、TGF-β1、p-smad2/3、snail蛋白表达均升高(P<0.01),与缺氧组比较,水蛭素下调HIF-1α、TGF-β1、p-smad2/3、snail蛋白表达(P<0.01)。结论水蛭素可以改善缺氧诱导的HCMECs细胞发生EndMT,其机制可能与调控HIF-α/TGF-β1/smad/snail通路有关。

内皮间质转分化在器官纤维化中的研究进展

纤维化是各组织器官在受到损伤刺激后启动的修复反应,是机体的一种自我保护机制。研究发现,内皮间质转分化(endothelial-to-mesenchymal transition,EndMT)参与心脏、肺脏、肾脏、肝脏、胰腺等多种器官纤维化的生理病理过程,已成为纤维化疾病研究的一个重点。该文将总结EndMT的调控机制及其在器官纤维化中作用,以及以EndMT为靶点的相关治疗进展,以期为器官纤维化的防治提供新的靶点。

尿酸盐在慢性肾病并发肾间质纤维化中的作用及机制

目的探讨尿酸盐在慢性肾病并发肾间质纤维化过程中的作用及机制。方法利用0.2%腺嘌呤的饲料喂养小鼠9周,构建慢性肾病小鼠模型。造模结束后,小鼠眼眶后静脉丛采血,检测肾功能和血尿酸含量;HE染色和PAS染色分析肾脏组织病理变化;Masson染色观察肾脏纤维化程度;尿酸盐染色观察肾组织中尿酸盐沉积;Western blot和免疫组化检测目标分子的表达变化。利用不同浓度尿酸刺激原代培养小鼠肾小管上皮细胞(mRTECs)及人肾小管上皮细胞系(HKC);划痕实验观察尿酸对细胞迁移的影响。结果动物水平上,生化分析检测结果显示,模型组小鼠血清尿素氮(P=0.0064)、肌酐(P=0.0080)、血尿酸(P=0.0007)水平较对照组明显增加;HE和PAS染色结果显示,模型组小鼠出现严重肾小管损伤及炎症细胞浸润;Masson染色结果显示,模型组胶原沉积明显增加;尿酸盐染色结果显示,与对照组比较,模型组小鼠肾组织出现大量尿酸盐结晶;Western blot和免疫组化结果显示,模型组小鼠波形蛋白、平滑肌肌动蛋白和转化生长因子β1(TGF-β1)水平较对照组升高,E钙黏蛋白水平较对照组降低。细胞水平上,划痕结果显示,尿酸刺激促进肾小管上皮细胞迁移;Western blot检测结果与免疫组化一致。结论尿酸可通过促进肾小管上皮细胞分泌TGF-β1,进而促进上皮-间质细胞转分化,加速肾间质纤维化的发生。

HES5对肾小管上皮细胞转分化和凋亡的影响及其机制研究

目的探讨HES5(hairy and enhancer of split 5)对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化和凋亡的作用及其潜在机制。方法分析和筛选GSE66494数据中的差异表达基因。建立小鼠的输尿管梗阻模型(unilateral uretera obstruction,UUO),检测肾组织中HES5的表达水平。TGF-β1(10 ng/mL)处理HK-2细胞24 h建立肾小管上皮-间质转化模型后,通过qRT-PCR和Western blot检测HES5的表达水平。用过表达HES5的质粒转染HK-2细胞,24 h后检测其纤连蛋白(Fibronectin,FN)、胶原蛋白Ⅰ(CollagenⅠ)和波形蛋白(Vimentin)及凋亡相关标志物(Bax、Bcl2)等蛋白表达;然后,将HK-2细胞分为4组:Control组、siHES5组、TGF-β1组、siHES5+TGF-β1组,检测各组的纤维化及凋亡标志物的表达情况。运用TUNEL及流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况。Western blot检测各组AKT、p-AKT、PI3K、p-PI3K的蛋白表达。通过加入PI3K抑制剂(LY294002)处理过表达HES5的HK-2细胞后,检测Vimentin的表达。结果HES5的表达在慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)和小鼠纤维化肾组织中均显著上调;过表达HES5可以促进HK-2细胞中FN、CollagenⅠ、Vimentin、Bax的合成,抑制Bcl2的表达(P<0.05);敲低HES5不仅下调纤维化标志物的表达,还抑制了肾小管上皮细胞凋亡;此外,HES5基因敲低使TGF-β1诱导的HK-2细胞内PI3K/AKT信号通路的激活程度降低(P<0.05);PI3K/AKT信号通路抑制剂减弱了HES5对Vimentin的诱导作用。结论敲低HES5可以抑制TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化和凋亡,这可能与PI3K/AKT信号通路活性降低有关。

IL-33调控NF-κB/Twist信号通路促进肺泡上皮细胞上皮-间质转分化的机制研究

目的:探究IL-33是否通过激活NF-κB/Twist信号通路,进而诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞发生上皮-间质转分化(EMT)而促进肺纤维化(PF)的进程。方法:C57BL/6小鼠48只,随机分成对照(CON)组、博莱霉素(BLM)组、BLM+IL-33(30μg/kg)组和BLM+抗IL-33抗体(Anti-IL-33 Ab)(100μg/kg)组,每组12只。气管注射BLM(5000 U/kg)诱导PF小鼠模型。造模后每隔1 d腹腔注射1次重组IL-33和抗IL-33抗体,连续注射3周。HE和Masson染色观察肺组织病理变化及胶原沉积情况。ELISA检测血浆IL-33的水平。免疫组化检测肺组织IL-33跨膜受体ST2L的表达。体外培养小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞,实验设Control组、IL-33(100 ng/ml)组、IL-33^(+)二甲基亚砜(DMSO)组及IL-33^(+)吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC,100μmol/L)组,每组设复孔6个。细胞先用PDTC或DMSO预处理1 h,再用IL-33处理48 h。RT-PCR检测肺组织或肺泡上皮细胞中CollagenⅠ、CollagenⅢ、E钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA的表达。Western blot检测肺组织和(或)肺泡上皮细胞IL-33、CollagenⅠ、CollagenⅢ、E-cadherin、Vimentin、α-SMA、p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白表达及细胞核内NF-κB p65和Twist的蛋白水平。结果:体内实验,与CON组相比,BLM组IL-33、ST2L的表达明显升高,p-IκBα、p-NF-κB p65及核内NF-κB p65和Twist的蛋白水平显著升高,肺组织E-cadherin的表达明显下调而Vimentin、α-SMA、CollagenⅠ和CollagenⅢ的表达明显上调(P<0.05)。与BLM组相比,IL-33组IL-33、ST2L的表达进一步升高,p-IκBα、p-NF-κB p65及核内NF-κB p65和Twist的蛋白水平进一步增加,肺组织E-cadherin的表达进一步下调而Vimentin、α-SMA、CollagenⅠ和CollagenⅢ的表达进一步上调(P<0.05),肺纤维化程度进一步加重;而Anti-IL-33 Ab的作用正好和IL-33的作用相反。体外实验,IL-33能够明显增加细胞内IκBα、NF-κB p65磷酸化水平,显著增加细胞核内NF-κB p65和Twist蛋白水平,明显下调E-cadherin的表达而显著上调Vimentin、α-SMA、CollagenⅠ和CollagenⅢ的表达(P<0.05)。而IL-33的这些作用能够被NF-κB抑制剂PDTC所逆转。结论:IL-33可能通过激活NF-κB信号通路而促使转录因子Twist的表达,进而诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞发生EMT而导致PF发生。

Hedgehog信号通路通过上皮细胞间质转分化调控乳腺癌细胞侵袭

目的研究Hedgehog信号通路对乳腺癌细胞侵袭能力的影响及其可能机制。方法通过Western blot和Real-time RT-PCR,检测人乳腺癌细胞MDA-231和人正常乳腺上皮细胞MCF-10A中SHH、SMO和Gli-1蛋白和mRNA表达。通过小干扰RNA转染MDA-231,以未转染细胞为正常对照组,转染siRNA Control为阴性对照组,Western blot和RT-PCR法检测靶向沉默SMO基因的效果,Transwell小室侵袭试验检测各组MDA-231细胞的侵袭能力,Western blot检测Gli-1、Snail、MMP-9、E-cadherin和Vimentin的表达变化。结果人乳腺癌细胞MDA-231高表达SHH、SMO和Gli-1。通过RNA干扰技术靶向沉默MDA-231细胞SMO基因,其细胞侵袭能力显著下调,其Gli-1、Snail、MMP-9、Vimentin表达下调,E-cadherin表达增强。结论 Hedgehog通路的异常激活与乳腺癌细胞侵袭相关,其机制可能与诱导乳腺癌上皮细胞间质转分化有关。

核因子-κB在黄芩甙诱导大鼠骨髓基质细胞分化为神经细胞中的作用

目的研究核因子 κB(NF- κB)在黄芩甙诱导骨髓基质细胞分化为神经细胞中的作用。方法在无血清条件下 ,以中药单体黄芩甙作为主要诱导剂 ,诱导大鼠骨髓基质细胞分化为神经细胞 ;同时以无血清培养基为对照组。采用免疫荧光细胞化学染色检测神经细胞标记蛋白表达和NF-κB亚基P6 5核移位情况 ;蛋白质印迹 (Westernblot)检测细胞中NF-κB抑制蛋白 (IκBα)表达变化 ;原位末端标记 (TUNEL法 )染色评价细胞凋亡率。结果黄芩甙诱导后细胞形成较典型的神经细胞形态 ,同时表达多种神经细胞标记蛋白。对照组无类似情况 ,但出现P6 5由胞浆向胞核移位 ,细胞内IκBα表达水平显著降低 ,细胞凋亡率为 (2 8.2±6.1) % ;黄芩甙诱导后P6 5信号主要仍在胞浆中表达 ,细胞内IκBα表达水平降低程度较少 ,细胞凋亡率〔(12 .2± 2.8) %〕 ,也显著低于对照组 (P <0. 0 1)。结论黄芩甙可抑制NF κB的活化 。

RNA干扰抑制Slug表达在TGF-β1诱导的肾小管细胞间质转分化中的抑制作用

目的观察Slug在TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞向间质细胞转分化中的表达及对黏附分子E-cadherin表达的影响。方法构建能表达针对Slug的小干扰RNA(Small interferingRNA,siRNA)的干扰载体(SlugsiRNAvector)和表达不针对任何已知mRNA的siRNA的阴性对照RNA干扰载体(Control siRNA vector),并用脂质体转染法瞬时转染HKC细胞。用TGF-β1分别处理HKC、siSlug和siC,刺激48h后,分别采用PT-PCR和Western blot技术检测各组Slug、α-SMA(alpha-smooth muscleactin)、和E-cadherin的表达水平。结果 TGF-β1刺激后Slug表达水平增高,E-cadherin表达水平降低;通过siRNA干扰后Slug表达减弱,而E-cadherin的表达增强。结论在TGF-β1诱导的HKC细胞EMT过程中,Slug表达与E-cadherin呈负相关,且RNAi阻滞Slug表达能有效地抑制TGF-β1诱导EMT,提示Slug是介导TGF-β1有效地诱导EMT的重要分子。

百令胶囊对肾小管间质纤维化大鼠肾小管上皮-间质转分化的干预作用(英文)

目的探讨百令胶囊对小管间质纤维化大鼠小管上皮-间质转分化的干预作用。方法利用腺嘌呤诱导建立肾小管间质纤维化大鼠模型,实验SD大鼠随机分为模型组、干预组、对照组各30只,分别于实验第7周、12周、17周收获动物各10只,进行功能学和肾脏组织病理学检测和观察。利用免疫组织化学对骨形态发生蛋白-7(BMP-7)、转化生长因子-β1(TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白(-αSMA)在肾小管间质纤维化大鼠中的表达变化进行动态观察及百令胶囊的干预影响。结果实验第7周模型组大鼠即表现出大量蛋白尿、小管损伤、间质的轻度纤维化和炎症细胞浸润(P<0.01);随病程进展,上述病变呈进行性加重(P<0.01)。百令胶囊干预组动物在实验第7周、12周功能学组织学的改善同实验组相比有明显差异(P<0.01),17周后二者无显著差异。免疫组织化学显示百令胶囊12周前能显著上调BMP-7的表达和降低-αSMA和TGF-β1在肾脏小管间质中的表达(P<0.01),12周后这种变化无差异。结论百令胶囊在发病早期通过有效干预上皮-间质转分化达到改善肾脏纤维化的作用,随着肾小管间质纤维化程度的加重,百令胶囊逐渐失去其阻断作用。

降钙素基因相关肽对大鼠肺泡上皮Ⅱ型细胞间质转分化的作用及机制

目的:观察降钙素基因相关肽(CGRP)对大鼠肺泡上皮细胞间质转分化(EMT)的作用并探讨其机制。方法:实验设Control组、TGF-β1(5 ng/ml)、CGRP(1、10、100 nmol/L)组、CGRP8-37(1μmol/L)+CGRP(100nmol/L)组。每组设9个复孔。细胞分别用CGRP或加CGRP8-37预处理1 h,再用转化生长因子β1(TGF-β1)处理48 h。MTT法检测大鼠肺泡上皮Ⅱ型细胞(RLE-6TN细胞)活性。分别采用Real-time PCR和Western blot检测细胞E-cadherin、α-SMA、e IF3a、Notch1和collagenⅢmRNA及蛋白表达。结果:与TGF-β1(5 ng/ml)相比,不同剂量CGRP(1、10、100 nmol/L)均可明显提高RLE-6TN细胞活性,显著抑制e IF3a、Notch1、α-SMA及collagenⅢ胶原的表达,上调E-cadherin的表达,而CGRP的这些作用可以被CGRP阻断剂CGRP8-37所取消。结论:CGRP对EMT具有一定的抑制作用,其机制可能与其抑制Notch1、e IF3a表达有关。

苦参素对肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞-间质转分化的影响

目的探讨苦参素对肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞-间质转分化的影响及可能机制。方法大鼠行单侧输尿管结扎(UUO)建立肾小管间质纤维化模型。实验分为假手术、UUO及苦参素治疗组。治疗组在UUO的基础上每天以苦参素100mg/kg腹腔注射。各组于术后第7、14、21天分别处死5只大鼠,分别检测大鼠血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)及24h尿蛋白定量。用PAS及Masson染色法观察肾脏病理改变。用免疫组织化学法观察转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad3、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及Ⅰ型胶原(ColⅠ)的表达。用RT-PCR法测定肾组织TGF-β1及α-SMA mRNA水平。结果与UUO组比较,苦参素治疗组肾脏TGF-β1、Smad3、α-SMA及ColⅠ的表达明显减少,肾小管损害和肾间质纤维化的程度也明显减轻。治疗组TGF-β1 mRNA及α-SMA mRNA表达显著低于对应时间点的UUO组。结论苦参素可下调TGF-β1、ColⅠ的表达,抑制肾小管上皮细胞转分化及肌成纤维细胞的活化与增殖,其作用途径可能是通过下调Smad3的表达,从而干预Smad3介导的细胞内信号转导,最终减轻肾间质纤维化。

1型糖尿病大鼠心肌纤维化中微血管内皮细胞间质转分化的鉴定

目的鉴定链脲佐菌素(STZ)诱导的1型糖尿病大鼠心肌纤维化中是否发生了心肌微血管内皮细胞-间质转分化。方法 STZ诱导大鼠心肌纤维化,12 w超声心动图检测大鼠心功能指标,VG染色观察心肌组织胶原含量变化,免疫组化鉴定心肌组织中微血管内皮细胞间质转分化。结果心脏超声提示实验组大鼠左室前后壁厚度(LVWT)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)明显大于对照组,左室射血分数(LVEF)和左室短轴缩短率(FS)明显小于对照组(P<0.05)。心肌VG染色实验组粉红色胶原组织增多,而对照组仅有少许红色胶原组织表达。心肌免疫组化染色观察,实验组与对照组CD31、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)均表达阳性,但实验组CD31表达减弱(P<0.05)、微血管壁α-SMA表达增强(P<0.05)。免疫酶双染技术检测,对照组微血管内皮被染为棕黄色,实验组微血管内皮红色染色较强,而棕黄色较弱。结论 STZ诱导的1型糖尿病大鼠心肌纤维化过程中发生了心肌微血管内皮细胞-间质转分化。

手术联合放射治疗伴有淋巴样间质的未分化癌的疗效分析

目的分析涎腺伴有淋巴样间质的未分化癌(恶性淋巴上皮病Malignantlymphoepitheliallesions,MLEL)的临床特点、发展规律、治疗方法及转归。方法收集自1989年～1997年来收治的涎腺伴有淋巴样间质的未分化癌患者共21例,其中原发于腮腺18例。对腮腺II、III期患者行肿块切除+腮腺浅叶或全叶切除+面神经保留术。对IV期患者根据情况,行腮颌颈联合根治术或腮颈联合根治术。术后2～9周内行原发灶或加同侧颈部照射,肿瘤剂量平均为52.03Gy。以寿命表法对生存率进行分析。结果全组病例中,3/21有良性淋巴上皮病复发史,其中,第2次复发至确诊为伴有淋巴样间质的未分化癌最长2a,最短0.5a。II、III、IV期患者分别为8(42.9%)、3(14.3%)、10(47.6%)例。II、III期者均为N0。全组5年生存率达70.66%,II、III、IV期的5年生存率分别为86.68%、66.67%、33.3%。本组死亡5例,均为IV期,死于肿瘤复发;其中4/5例颈上、中淋巴结有转移。复发者7/21,其中5/7为IV期,N2、N3患者。复发后经治疗死亡者,最短存活7个月,最长7a。4/21有远处转移,均为T4N2M0。结论对复发性良性淋巴上皮病患者应高度警惕其恶变。IV期患者应行腮腺全叶切除,面神经未受累者可考虑保留面神经,因同侧下颌下、颈淋巴结转移多见,建议行根治性或功能性颈清。

Gli-1在缺氧诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮-间质转分化中的重要作用

目的探讨Gli-1在缺氧诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮-间质转分化(EMT)及侵袭中的重要作用。方法通过缺氧培养乳腺癌MDA-MB-231细胞,以常氧培养作为对照。Transwell小室侵袭试验检测各组MDAMB-231细胞的侵袭能力;Western blot检测HIF-1α、Gli-1、E-Cadherin和vimentin蛋白的表达水平。通过shRNA稳定转染乳腺癌细胞,再次通过Transwell小室侵袭试验检测缺氧对乳腺癌细胞侵袭能力的影响,Western blot检测HIF-1α、Gli-1、E-Cadherin和vimentin蛋白的表达水平。结果缺氧可明显诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭,并上调HIF-1α、Gli-1和vimentin蛋白,下调E-cadherin蛋白。靶向沉默Gli-1基因后,缺氧失去了对乳腺癌细胞侵袭和EMT的诱导作用。结论缺氧通过上调Gli-1表达活化Hedgehog通路,诱导乳腺癌细胞侵袭及EMT过程。

TGF-β_2对晶状体上皮细胞增生和上皮间质转分化的实验研究

目的探讨转化生长因子β2(TGF-β2)对晶状体上皮细胞(LECs)增生和上皮间质转分化的影响。方法体外培养的人LECs株HLE-B3,加入不同质量浓度的TGF-β2进行处理,分别采用MTT法测定其对细胞增生的影响;采用PI细胞周期染色分析检测细胞周期的改变;应用Western blot及免疫荧光分别检测connexin43、fibronectin及integrinβ1等转分化相关蛋白表达的变化。结果经TGF-β2处理后的细胞增生受到抑制,呈TGF-β2质量浓度和时间依赖性;细胞周期中S期细胞的比例明显降低;connexin43表达随TGF-β2处理时间的增加而逐渐降低,fibronectin及integrinβ1的表达则随TGF-β2处理时间的增加而逐渐上升。结论TGF-β2抑制了LECs的增生,显著下调LECs connexin43的表达,促进了细胞外基质的过度沉积,对后发性白内障的防治具有一定的应用前景。

内皮间质转分化在动脉粥样硬化中的研究进展

内皮间质转分化在机体发育过程中发挥重要作用,也参与包括动脉粥样硬化在内的多种心血管疾病的发生发展。氧化应激、炎症、振荡剪切应力等促动脉粥样硬化因素可以导致内皮间质转分化的发生。内皮间质转分化可以导致斑块的钙化、纤维帽变薄,增加斑块的不稳定性。内皮间质转分化可能成为防治动脉粥样硬化的又一关键环节。该文将对内皮间质转分化在动脉粥样硬化方面的研究进行总结。

博莱霉素诱导α平滑肌肌动蛋白Cre重组酶转基因小鼠肺纤维化上皮细胞-间质转分化的研究

目的探讨在博莱霉素诱导的肺纤维化中是否发生了上皮细胞-间质转分化(EMT)现象,支气管上皮细胞是否参与了这一过程。方法采用α平滑肌肌动蛋白Cre重组酶转基因小鼠(α-SMA-Cre/R26R双转基因鼠)为实验动物,构建博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化模型,进行组织X-gal染色和α平滑肌肌动蛋白免疫荧光检测。结果气管内灌注博莱霉素的转基因小鼠支气管上皮下部分X-gal蓝染明显增多,终末小气道周围和肺血管壁蓝染细胞出现或增多,部分地区出现了支气管周围肺泡上皮细胞(ACE)阳性蓝染和浸润。结论在博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠模型中可以观察到EMT现象,气道上皮细胞和肺泡上皮细胞能向间充质细胞转化,参与肺纤维化病理过程。

去甲斑蝥素抑制单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮-间充质转分化的实验研究

目的:利用单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠模型,观察去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)对肾小管上皮细胞间质转分化的影响。方法:SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(UUO组)和UUO+NCTD治疗组(NCTD组),每组6只。采用单侧(左)输尿管结扎方法,建立梗阻性肾小管间质纤维化大鼠模型,Sham组只游离输尿管而不结扎。术后14d处死动物,取结扎侧肾脏,同时处死Sham组大鼠,取出肾组织。采用免疫组化、Western Blot及RT-PCR检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E钙黏蛋白(E-cadherin)与转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白的mRNA表达的变化。结果:免疫组化、Western Blot及RT-PCR均显示,与Sham组比较,UUO组肾组织α-SMA和TGF-β1的mRNA表达升高、E-cadherin蛋白和mRNA表达降低(P<0.05);NCTD能抑制UUO大鼠肾组织α-SMA和TGF-β1表达的上调,上调E-cadherin的表达(P<0.05)。结论:NCTD具有抑制UUO大鼠肾小管上皮-间充质转化的作用,该作用可能与抑制TGF-β1的过表达有关。

去甲斑蝥素对TGF-β_1诱导的人近端肾小管细胞上皮间质转分化以及转录因子Snail1表达的影响

目的:探讨去甲斑蝥素对体外人源性肾小管细胞株(HK-2)上皮间质转分化以及转录因子Snail1的影响。方法:常规培养HK-2细胞,分为对照组、TGF-β1组、去甲斑蝥素组(NCTD组)。对照组为无血清DMEM培养,TGF-β1组为TGF-β15ng/ml诱导,NCTD组为不同浓度NCTD(0.5、1.0、2.5μg/ml)与TGF-β1(5ng/ml)共同作用,各组作用时间48h。采用RT-PCR、Western blot分别检测α-SMA、E-cadherin与Snail1表达水平的变化。结果:与对照组相比,TGF-β1组α-SMA mRNA和蛋白表达上调(P<0.05),E-cadherin mRNA和蛋白表达下调(P<0.05);与TGF-β1组相比,NCTD干预组α-SMA mRNA和蛋白表达下调(P<0.05),而E-cadherin mRNA和蛋白表达上调(P<0.05),且均呈剂量依赖性。与对照组相比,TGF-β1组Snail1 mRNA和蛋白表达上调(P<0.05);与TGF-β1组比较,NCTD干预组Snail1 mRNA和蛋白表达下调(P<0.05),具有一定的剂量依赖关系。结论:去甲斑蝥素具有抑制肾小管上皮细胞EMT的作用,该作用可能与下调转录因子Snail1的表达有关。

去整合素Echistatin对糖尿病兔后发性白内障模型中晶状体上皮细胞间质转分化及胶原合成的影响

目的观察去整合素Echistatin对糖尿病兔晶状体摘出术后后囊膜混浊(posterior capsular opacification,PCO)的影响,探讨Echistatin对晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)间质转分化及胶原合成的抑制作用。方法应用四氧嘧啶耳缘静脉注射建立糖尿病兔模型,随机分组并行晶状体摘出术,术毕前房分别注入0.2 mL高压灭菌蒸馏水(对照组),7.5 mg·L-1Echistatin(7.5 mg·L-1组)、10.0 mg·L-1Echistatin(10.0 mg·L-1组),每组又分为10 d和6周2个时间点(n=4)。裂隙灯显微镜观察各组糖尿病兔术后10 d和6周PCO分级情况,同时摘取术眼应用RT-PCR法检测晶状体后囊膜上α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和Ⅳ型胶原mRNA表达情况。结果术后10 d,各组间α-SMA mRNA和IV型胶原mRNA表达差异均无统计学意义(均为P>0.05)。术后6周,Echistatin干预组PCO分级均明显低于对照组(P=0.024);7.5 mg·L-1Echistation组α-SMA mRNA表达为3.97±0.76,对照组为9.06±3.40,10.0 mg·L-1组为6.80±3.15,7.5 mg·L-1组明显低于其余两组(P=0.002、0.024);Ⅳ型胶原mRNA表达对照组为30.88±20.13,7.5 mg·L-1组为8.62±6.99,10.0 mg·L-1组为5.76±6.73,Echistatin干预组Ⅳ型胶原mRNA表达均低于对照组(P=0.005、0.002)。结论去整合素Echistatin对糖尿病兔晶状体摘出术后PCO的发生和发展有一定的抑制作用,可能与其抑制晶状体后囊膜上α-SMA和Ⅳ型胶原的mRNA表达有关。