一种新的质粒克隆载体的稳定性和拷贝数的测定

为了研究Ｃｏ１Ｅ２质粒的复制及其调控机理，构建了一种新的质粒克隆载体ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ２２＋，并且测定了它在宿主中的稳定性和拷贝数。结果表明，在宿主菌繁殖４０代前，它在宿主菌中的拷贝数达到最高，之后便很快下降，虽然在宿主菌繁殖到１８０代时它仍未从所有宿主菌中完全丢失；而且，加入氯霉素可以提高它在宿主中的拷贝数。这提示，为了获得更多的质粒，应在宿主菌培养４０代前并在向培养液中加入氯霉素继续培养２ｈ内收获质粒。

转化生长因子β1基因克隆及重组真核表达质粒的构建

背景:通过基因转移方法研究某一外源性基因在细胞中的作用是目前分子生物学常用的技术手段,与病毒载体相比,应用pcDNA4.0-TGF-β1真核表达质粒的转染方法无遗传毒性和细胞毒性,有更高的安全性。目的:通过克隆转化生长因子β1基因,观察构建重组转化生长因子β1基因真核表达质粒的可行性。设计、时间及地点:以细胞为观察对象的体外实验,于2007-03/2008-02在河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室完成。材料:2月龄清洁级健康SD大鼠,雌雄不拘,用于分离细胞中RNA。方法:从大鼠骨髓细胞中分离提取转化生长因子β1的mRNA,反转录-聚合酶链反应扩增后,克隆入pGEM-T载体,PCR鉴定重组子;酶切下目的基因转化生长因子β1,再亚克隆入载体pcDNA4.0质粒,酶切鉴定亚克隆重组子并进行DNA序列分析。主要观察指标:TGF-β1cDNA、pGEM-T-TGF-β1和重组子pcDNA4.0-TGF-β1的表达。结果:经过反转录-聚合酶链反应扩增得到TGF-β1cDNA条带;PCR扩增鉴定得到pGEM-T-TGF-β1。酶切鉴定得到亚克隆重组子pcDNA4.0-TGF-β1,经测序鉴定证实插入DNA序列与设计完全一致。结论:成功克隆大鼠转化生长因子β1基因,并构建出重组转化生长因子β1真核表达载体。

Cosmids的十年史

1977年3月,在巴塞尔生物:中心(那次 John 作了一个关于质粒克隆载体发展的学术报告)首次相见时,我们俩就确信,寻找一个能高效克隆大型 DNA 片段(】10kb)的全新的方法,是基因技术能否广泛应用的重要一环。当时,John 需要(这个需要就是发明的原动力)从细菌克隆出青霉素酰基转移酶基因。这用传统的载体是难以办到的(那时象 EcoRI、SmaI、HindⅢ和 Sau3A 这些限制性酶只能由自己制备)。John

食品上的应用

描述了利用突变株选育法用脆壁克鲁维酵母(Kluyveromyces fragilis)ATCC12424生产D一果糖时菊搪水解的改良.用液体培养基试验了利用亚硝基肛获得的50株突变株.最重要的改良是胞内菊糖酶的活性,用突变株KF28时此活性增加.