甲氧西林耐药金葡菌的耐药性和质粒分型研究

对上海七所医院收集的60株甲氧西林耐药金葡菌(MRSA)进行药敏试睑,质粒分型及噬菌体分型。实验结果显示MRSA对所测17种抗菌药物中的四环素,庆大霉素,萘啶酸,氯霉素,红霉素及吡(口派)酸的耐药率高达80%—100%;对丁胺卡那霉素,甲氧苄胺嘧啶,利福平及乙基西梭霉素的耐药率约20%—35%;仅两株MRSA对五种氟喹诺酮类耐药,所有菌株对褐霉素及万古霉素均呈敏感。质粒抽提及琼脂糖电泳结果显示,60株MRSA可分为15种不同的质粒型,31株菌仅有分子量为1.6Md的质粒,24株菌除1.6Md外还含其他质粒。19株利福平耐药株中,绝大多数为质粒1型及2型:前者从瑞金医院烧伤病房获得,后者则从华山医院神经科病房分离得到,提示此菌可能为此两病房常驻菌,应采取相应措施防止交叉感染。

质粒介导产β-内酰胺酶淋球菌的检测及其TEM-1基因质粒分型

质粒介导的产青霉素酶淋球菌（PPNG）对青霉素高度耐药,PPNG在世界各地流行,我国各地也有PPNG阳性率逐年增加的报道.上海地区曾对2005年度分离的PPNG耐药质粒基因进行分型,表明PPNG质粒流行类型主要以亚洲型质粒为主.根据PPNG所携带的耐药质粒基因类型可了解当地淋球菌的流行情况.我们于2000-2008年对临床淋球菌分离株进行PPNG检测及其TEM-1基因质粒分型,报道如下.

肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌质粒介导的ESBLs的检测、分型及其耐药性分析

目的 对本院2000年7月－2000年12月收集到的143株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中的46例ESBLs阳性菌进行研究，了解其ESBLs阳性率、质粒分型及其耐药性。方法 收集鉴定分离菌株，进行药敏实验和ESBLs的检测、PCR扩增。结果 共收集到81例大肠埃希菌，20例ESBLs阳性，62例肺炎克雷伯菌，26例ESBLs阳性。大肠埃希菌的TEM型占65．4％，肺炎克雷伯菌的TEM型占70．0％。大肠埃希菌的SHV型占34．3％，肺炎克雷伯菌的SHV型占30．0％。TEM和SHV混合型1例。结论 ESBLs菌的阳性率高、耐药性强、耐药谱广，本地区的ESBLs阳性菌以TEM型为主，占69．6％，SHV型82．6％。

不同源鼠伤寒沙门氏菌耐药性质粒不相容性分群的初步研究

试验利用PCR方法检测101株不同源鼠伤寒沙门氏菌携带质粒的不相容群,共设计18对引物,PCR分为5个三重PCR和3个单一PCR,用来检测识别FIA、FIB、FIC、HI1、HI2、I1、L/M、N、P、W、T、A/C、K、B/O、X、Y、F和FII复制子。101株不同源鼠伤寒沙门氏菌中94株(93.1%)携带质粒不相容群,共携带10种质粒不相容群,分别是Inc HI1、Inc HI2、Inc I1、Inc FIA、Inc FIB、Inc N、Inc Y、Inc P、Inc FIIA和Inc FrepB,其中76.6%的菌株携带2个或2个以上质粒不相容群。结合药物敏感性试验结果,追踪鼠伤寒沙门氏菌耐药传播机制。本研究调查了耐药性质粒在鼠伤寒沙门氏菌的水平传播特性,不同环境中大量的菌株介导特定多重耐药性质粒的扩散,对调查跟踪质粒赋予耐药的流行病学有重要意义。

烧伤感染阴沟肠杆菌的分型研究

目的对烧伤感染阴沟肠杆菌进行种以下的鉴定,了解其在烧伤感染中的变化特点。方法 利用生物学分型、药敏谱分型及质粒分型对住院烧伤患者烧伤创面分泌物、血液、静脉导管尖端、尿液、粪便、空气、痂下组织中分离的阴沟肠杆菌进行分析。结果生物编码为30317703620和34307723620两种生物型分离率为最高。分出44种药敏谱型。分离出11种质粒谱型,质粒谱分型较为集中。结论烧伤感染阴沟肠杆菌可能仅是由少数型别菌种播散而来,生物分型、药敏谱模式分型不同是由于表型异质性而造成或存在流行质粒在烧伤感染阴沟肠杆菌不同型别间传播。阴沟肠杆菌的粪便-伤口传播可能是除了肠源性感染以外的一个很重要的传染途径。

幽门螺杆菌的基因分型方法及其应用

近几年,有关幽门螺杆菌(HP)基因分型方法及其应用的研究取得了很大进展。基因分型方法包括;质粒分型、限制性内切酶分型(REA)、核糖分型、染色体DNA脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型、多聚酶链反应限制性内切酶消化(PCR-RFLP)分型、任意引物PCR(AP-PCR)分型、PCR单链构型多态性(PCR-SSCP)分型和核苷酸序列分析等。基因分型方法广泛用于HP的研究,如基因图的构建、感染复发、耐药机制、致病机制、分子流行病学等研究。

山东省HIV异源双链泳动分析法分型体系研究

[目的]克隆山东省流行的HIV-1优势亚型的代表毒株的包膜蛋白基因,建立用于山东省HIV-1分型的异源双链泳动分析体系.[方法]2003年11～12月将与山东省HIV-1 B′/C、B′和A/E各亚型共享序列最接近的毒株用套式聚合酶链反应(PCR)技术扩增包膜(env)基因,克隆到p GEM-Teasy载体中,构建成用于异源双链泳动分析(HMA)分型的山东标准亚型质粒,并摸索各反应和电泳的最佳条件.[结果]共建立HMA的分型标准质粒11株,建立以标准质粒为分型标准、包含3套可供选择的片段扩增策略的HMA体系,与序列分析比较各亚型代表株的检出率(敏感性)分别达到了B′94%、B′/C 90%、A/E 90%.[结论]建立的HMA分型体系经济、方便、易掌握、结果可靠,值得推广.

产气肠杆菌携带基因bla_(NDM-1)的质粒特征及基因环境分析

目的了解产气肠杆菌携带bla_(NDM-1)质粒的转移性、复制子分型及周围环境。方法产气肠杆菌HNNDM0711为实验菌株,利用接合实验研究其质粒的转移性,对接合子进行稳定性试验,采用质粒复制子分型法对质粒进行分型,利用染色体步移技术对基因bla_(NDM-1)上下游进行测序,使用BLASTN和BLASTP对基因组序列进行比对,使用Vector NTI 11.5.1注释并生成序列管道图,序列通过软件Banklt递交至Genbank。结果产气肠杆菌HN-NDM0711接合实验阳性,阳性接合子稳定传代4 d后,所有克隆株对亚胺培南和美罗培南的最低抑菌浓度(MIC)均未发生变化,基因bla_(NDM-1)均为阳性。质粒复制子为IncA/C型;基因bla_(NDM-1)位于不常见的插入序列ISAba14和IS91之间,在bla_(NDM-1)的上游出现一个Tn3转座子和I型整合子,整合子上含有一个由庞大镶嵌序列构成的少见耐药基因盒。结论 IncA/C型质粒pHN-NDM0711携带基因bla_(NDM-1)及耐药基因盒,可能源于不同抗菌药物选择压力下的基因重组,建议严格控制临床、工业和农业抗菌药物的使用,从源头上减少此类细菌的产生。

耐碳青霉烯鼠伤寒沙门菌的药敏及分子特征分析

目的分析鼠伤寒沙门菌的耐药情况及分子特征,为临床治疗和感染防控提供依据。方法对我院分离的鼠伤寒沙门菌CYEY-S001,采用VITEK2-Compact全自动微生物分析系统和K-B纸片法对药敏结果进行检测。通过全基因组测序分析其基因和分子特征,并进行质粒接合试验,研究质粒的可转移性。利用碳青霉烯酶表型试验检测其实所含的碳青霉烯酶类型,PCR确认其携带的耐药基因,质粒复制子分型确定质粒类型。结果该鼠伤寒沙门菌CYEY-S001对除氨曲南之外的青霉素类、头孢菌素类和碳青霉烯类抗生素全部耐药,全基因组测序分析表明其为ST34型鼠伤寒沙门菌,含有bla_(NDM-5)、aac(6’)-Iaa、floR、cmlA1、sul3和tet(A)等多种耐药基因。携带的质粒类型为IncHI2,bla_(NDM-5)位于该质粒上,可通过水平转移,结合子获得了与鼠伤寒沙门菌完全一致的耐药结果。3种碳青霉烯酶表型试验均正确识别出了其携带碳青霉烯酶的类型为金属β-内酰胺酶。结论碳青霉烯耐药鼠伤寒沙门菌对感染治疗和预防控制带来了新的挑战。新发现的IncHI2-bla_(NDM-5)质粒存在向其他细菌物种横向传播的风险。

某ICU病房内铜绿假单胞菌交叉感染调查分析

目的调查ICU病房铜绿假单胞菌医院交叉感染发生的危险因素和传播规律。方法应用生物、血清、耐药谱和质粒谱等分型方法对某ICU病房从患者和周围环境分离到的7株铜绿假单胞菌进行同源性分析。结果铜绿假单胞菌的四种分型结果显示,质粒谱分型和血清分型的一致性较好,7株菌具有相同的血清型和质粒谱型,说明此次医院内铜绿色假单胞菌感染来源于氧气湿化瓶液体,并通过患者周围物品及陪护人员手接触发生交叉感染的同一克隆菌株。结论质粒分型和血清分型用于铜绿假单胞菌医院感染流行病学调查追溯传染源,是一种较实用的方法,生物分型和耐药谱分型有不足,但作为实验室的常规方法对早期发现流行株和抗菌药物的合理应用具有重要参考价值。本次调查结果显示,加强医疗器具及周围环境消毒和陪护人员管理是预防医院交叉感染的重要措施。

畜禽源耐黏菌素大肠埃希氏菌的分离鉴定与特性分析

我国从2017年4月30日起禁止将黏菌素作为动物促生长剂使用,为评估禁用政策效果,并了解畜禽源耐黏菌素大肠埃希氏菌对临床常用药物的耐药情况,在2017年和2020年分别从长春市3个畜禽养殖场采集373份粪便样品分离鉴定出546株耐黏菌素大肠埃希氏菌。分离菌株对黏菌素的MIC为0.25 mg/L~8 mg/L,2020年MIC≥2 mg/L菌株分离率(18.02%)低于2017年(26.24%);16种药物敏感性测定中,2017年和2020年均以耐4种抗生素占比最高,2020年多重耐药菌株占比(60.25%)低于2017年(80.85%);PCR鉴定出34株mcr-1基因阳性菌株,2020年mcr-1基因检出率(3.21%)低于2017年(14.89%);2017年mcr-1基因阳性大肠埃希氏菌中检测到12种类型质粒,2020年mcr-1基因阳性大肠埃希氏菌中检测到7种类型质粒,携带的质粒类型减少。结果表明,禁止黏菌素作为饲料添加剂使用后对大肠埃希氏菌的黏菌素耐药性有很大的影响,但多重耐药情况依然较严重,携带质粒复制子复杂多样,应当持续进行监测。

CTX-M-15型大肠埃希菌的分子分布特征及质粒传播规律研究

目的探讨CTX-M-15型大肠埃希菌的分子分布特征及质粒传播规律。方法 232株CTX-M-15型大肠埃希菌鸟枪法测序序列从GenBank数据库获取,利用CGE在线工具获得菌株的MLST分型、耐药基因及质粒类型信息,应用eBURST软件绘制MLST分型结果聚类图。结果 232株CTX-M-15型大肠埃希菌共检测出37个MLST型别,其中以ST131菌株检出率较高,为35.34%(82/232)。菌株中耐药基因数目为1~22个不等,出现耐药基因数目较多菌株的ST型别为ST131和ST617,其中blaOXA-1、aac(6')Ib-cr、aac(3)-II、aadA、mph(A)等7种耐药基因在ST131菌株和非ST131菌株中的分布差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),且ST131菌株检出率高于非ST131菌株(P<0.05或P<0.01)。菌株中检测到blaOXA-48、blaKPC-2、blaNDM-1、blaCMY、blaVIM等其他类型的β-内酰胺类耐药基因,主要的β-内酰胺基因组合形式是blaTEM-1+blaCTX-M-15,而在ST131中主要的组合形式是blaOXA-1+blaCTX-M-15(32/82)。检测到的不相容性质粒的类型有9种,其中IncF型质粒的检出率较高,为95.26%(221/232),该质粒在ST131菌株中的检出率为98.78%(81/82)。菌株中IncF型复制子类型出现频率较高的是IncFIA+IncFIB+IncFII(83/232),在ST131菌株中上述复制子中检出率较高的是IncFIA+IncFII,为51.22%(42/82)。IncF型质粒经pMLST分型可获得59种型别,F36:A4:B1、F31:A4:B1、F48:A1:B49型质粒主要存在于ST131菌株和CC10克隆复合体中,而ST131菌株中主要的质粒类型是F2:A1:B-(38/82)。结论 CTX-M-15型耐药基因主要存在于ST131型别的大肠埃希菌株中,ST131菌株比其他菌株具有更强的适应能力,同种型别的质粒可以在亲缘关系相近的菌株之间传播。

粪便标本中携带mcr-1基因革兰阴性杆菌的分离与分子特征分析

目的了解住院患者及体检人群肠道中携带mcr-1基因的革兰阴性杆菌的定植情况,阐明mcr-1基因流行的分子特性。方法收集广州医科大学附属第一医院临床粪便标本1 263份和广州金域体检中心粪便标本750份,在含黏菌素的麦康凯培养基上分离耐药菌株;PCR法检测耐药菌株中的mcr-1基因,多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)及肠杆菌基因间重复共有序列PCR(enterobacterial repetitive intergenic consensus-PCR,ERIC-PCR)对菌株进行同源性分析;用质粒接合试验验证mcr-1基因的可转移性,用基于PCR的复制子分型法对质粒进行分型,用PCR法检测12种毒力基因。结果1 263份住院患者标本中共筛选到92株耐药菌(7.3%,92/1 263),其中2株携带mcr-1(1株同时携带碳青霉烯酶基因blaNDM-5);750份体检标本中筛选到36株耐药菌(4.8%,36/750),其中1株携带mcr-1基因。MLST分析显示3株mcr-1阳性大肠埃希菌(MIC均为8μg/ml)为不同的序列型(sequence type,ST),ERIC-PCR显示为3种不同的克隆株。3株携带mcr-1基因的菌株均接合成功。mcr-1基因阳性菌株携带6种质粒型(IncFⅡ、IncX2、IncHI2、IncFIB、IncX4和IncX1)及毒力基因fimH、iutA、fyuA。结论耐黏菌素菌株及mcr-1基因在住院患者及体检人群中均存在一定的流行率,为临床抗感染治疗带来潜在风险。