一种快捷可靠的大肠杆菌重组质粒筛选方法

针对如何大规模地筛选大肠杆菌重组子,将质粒快检和菌落PCR两种方法巧妙地融合,建立一种新的高效快捷的重组质粒筛选方法.该方法不需接种抽取质粒,在转化子长出当天即可筛选到重组质粒.大规模基因克隆表明该方法能够快速、准确地筛选出阳性克隆.

一步法快速质粒鉴定方法

对《分子克隆实验指南》(第三版)中的牙签法小量制备质粒DNA的方法做了改进,减少了 加样次数,免去冰浴、离心等步骤,改进后的方法在琼脂糖凝胶电泳前仅需一步加样和加热过程, 提高了实验效率。同时结合使用多孔道移液器和96孔板,更适合于在高通量筛选中鉴定阳性克 隆。实验对改进后的方法与《分子克隆实验指南》上的方法进行了比较,表明“一步法”的检测效 果、准确率与重复性均有到较好的结果。

中国北方地区快生豇豆根瘤菌的多样性研究

从采自不同土壤中的豇豆(Vigna unguiculata)根瘤中分离、纯化并通过结瘤试验筛选出14株豇豆快生根瘤菌,将其和来自其他种属的6个参比菌株的耐盐性、耐酸碱性、天然抗药性、碳源与氮源利用和质粒图谱分析进行了系统比较,通过聚类分析得到供试菌株的数值分类树状图谱。结果表明,分离自不同土壤中的豇豆快生根瘤菌具有较大的多样性。在77%的相似水平上,快生豇豆根瘤菌与参比菌株分为4个亚群,亚群中部分菌株的相似性与分离的土壤有关,而6株参比菌株则分别独立形成两个亚群。

高效甲苯降解菌的驯化及筛选方法研究

目的优化高效甲苯降解菌驯化及筛选方法。方法分别选取啤酒厂、染料厂活性污泥作为驯化对象,采用4种方法分离纯化甲苯降解菌,利用质粒快检鉴定降解性TOL质粒,A600、顶空气相色谱法测定降解菌的生长与降解甲苯能力,筛选出一株高效甲苯降解菌,并利用革兰染色、形态学及16SrDNA分析方法对其进行鉴定。结果染料厂活性污泥较啤酒厂驯化出的细菌种类多;密闭罐培养降解菌生长良好;筛选出一株含有TOL质粒的高效降解菌,经鉴定为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)。在28℃、pH7.0,初始甲苯浓度为500mg/L条件下,该菌48h降解率达到99.2%。结论密闭罐培养、质粒快检与顶空气相色谱有机结合在甲苯降解菌的驯化和筛选中具有快速、准确、效果好的特点。