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Stx1-A亚单位的原核表达、复性及抗原性鉴定
1
作者
葛以跃
崔仑标
+7 位作者
史智扬
焦永军
曾晓燕
戚宇华
唐震
单云峰
吴涛
汪华
《医学分子生物学杂志》
CAS
CSCD
2008年第4期319-322,共4页
目的构建志贺毒素1-A亚单位(Stx1-A)原核表达质粒,使其在大肠埃希菌中表达,对表达的重组蛋白进行纯化,并探讨其抗原性及应用价值。方法以大肠埃希菌O157DNA为模板扩增Stx1-A基因,重组克隆入原核表达载体pET32a(+),转化大肠埃希菌BL21(DE...
目的构建志贺毒素1-A亚单位(Stx1-A)原核表达质粒,使其在大肠埃希菌中表达,对表达的重组蛋白进行纯化,并探讨其抗原性及应用价值。方法以大肠埃希菌O157DNA为模板扩增Stx1-A基因,重组克隆入原核表达载体pET32a(+),转化大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基硫代-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,包涵体经镍柱柱上复性和纯化,并对纯化产物进行Western印迹鉴定。结果重组质粒经双酶切鉴定和测序分析后证实构建成功。重组蛋白经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示,其表达量占细菌总蛋白量的15%左右,主要以包涵体形式存在,通过镍柱柱上复性获得纯化的可溶性Stx1-A蛋白,纯度达95%以上,Western印迹检测显示特异性条带。结论成功构建了pET32a(+)/Stx1-A重组质粒,并获得了具有抗原特异性的可溶性Stx1-A蛋白,为进一步制备抗Stx1-A抗体和研究其生物学功能奠定了基础。
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关键词
大肠埃希菌O157
志贺样毒素
质粒的构建与鉴定
原核表达
原文传递
题名
Stx1-A亚单位的原核表达、复性及抗原性鉴定
1
作者
葛以跃
崔仑标
史智扬
焦永军
曾晓燕
戚宇华
唐震
单云峰
吴涛
汪华
机构
江苏省疾病预防控制中心微生物检验科
出处
《医学分子生物学杂志》
CAS
CSCD
2008年第4期319-322,共4页
基金
江苏省自然科学基金(No.BK2007608)~~
文摘
目的构建志贺毒素1-A亚单位(Stx1-A)原核表达质粒,使其在大肠埃希菌中表达,对表达的重组蛋白进行纯化,并探讨其抗原性及应用价值。方法以大肠埃希菌O157DNA为模板扩增Stx1-A基因,重组克隆入原核表达载体pET32a(+),转化大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基硫代-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,包涵体经镍柱柱上复性和纯化,并对纯化产物进行Western印迹鉴定。结果重组质粒经双酶切鉴定和测序分析后证实构建成功。重组蛋白经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示,其表达量占细菌总蛋白量的15%左右,主要以包涵体形式存在,通过镍柱柱上复性获得纯化的可溶性Stx1-A蛋白,纯度达95%以上,Western印迹检测显示特异性条带。结论成功构建了pET32a(+)/Stx1-A重组质粒,并获得了具有抗原特异性的可溶性Stx1-A蛋白,为进一步制备抗Stx1-A抗体和研究其生物学功能奠定了基础。
关键词
大肠埃希菌O157
志贺样毒素
质粒的构建与鉴定
原核表达
Keywords
E. coli 0157
Shiga-like toxin
recombinant plasmid
prokaryotic expression
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Stx1-A亚单位的原核表达、复性及抗原性鉴定
葛以跃
崔仑标
史智扬
焦永军
曾晓燕
戚宇华
唐震
单云峰
吴涛
汪华
《医学分子生物学杂志》
CAS
CSCD
2008
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