藏鸡致病性沙门菌的耐药性分析及质粒耐药基因的检测

为研究藏鸡致病性沙门菌的耐药性及其质粒耐药基因携带情况,分别采用琼脂纸片扩散法和PCR扩增技术对14株藏鸡致病性沙门菌进行耐药表型及质粒耐药基因检测,并通过质粒接合试验验证其质粒耐药基因的水平传播。结果显示,14株分离菌对氨苄西林的耐药性(85.71%)最高,对阿莫西林(78.57%)、羧苄西林(78.57%)、复方新诺明(71.43%)、利福平(71.43%)、四环素(64.29%)的耐药比较严重,仅对头孢唑啉、庆大霉素、丁胺卡那敏感,且92.86%(13/14)的菌株表现为多重耐药性。此外,14株菌共检出blaTEM(78.57%)、blaCTX-M(71.43%)、blaOXA(42.86%)、blaPSE(50.00%)、blaDHA(14.28%)、blaCMY-2(50.00%)、qnrA(28.57%)、qnrS(42.86%)、aac(6′)-Ib-cr(35.71%)、oqxA(42.86%)和oqxB(35.71%)等11种质粒耐药基因。质粒耐药基因可通过接合试验水平转移,其接合成功率为57.14%(8/14)。结果表明,这14株藏鸡致病性沙门菌的耐药性比较严重,且广泛携带质粒耐药基因。

沙门氏菌耐药谱及质粒耐药基因的筛查

目的:分析不同来源沙门氏菌耐药性及其质粒耐药基因携带情况,从而揭示质粒耐药基因与菌株耐药性的对应关系。方法:对226株食源性及医源性的沙门氏菌分离株用试卡法测试其耐药性,按2012年美国实验室标准委员会(CLSI)指导原则的标准计算细菌对抗菌药物的耐药率(R),中介率(I),和敏感率(S),并对具有耐药表型和中介表型的非敏感菌株进行质粒耐药基因的筛查。结果:针对青霉素类抗生素进行筛查,耐氨苄青霉素的菌株达到15.9%(36/226),耐舒巴坦/氨苄青霉素达到12.8%(29/226);针对氨基糖苷类抗生素,耐妥布霉素的菌株达到6.2%(14/226),耐庆大霉素5.8%(13/226);针对喹诺酮类抗生素,耐环丙沙星的菌株达到4.0%(9/226),耐左氧氟沙星1.8%(4/226);针对头孢菌素类抗生素,耐头孢唑啉4.4%(10/226),耐头孢他啶和头孢曲松分别为2.2%(5/226),耐头孢替坦0.9%(2/226)。针对碳青霉烯类和除青霉素类、头孢菌素类以外的β-内酰胺类的筛查结果均为敏感。β-内酰胺类抗生素非敏感菌株中,质粒上β-内酰胺类耐药基因携带率为59.5%(50/84),其中CMY基因携带率为10.7%(9/84),OXA基因携带率为27.3%(23/84),TEM基因携带率为39.2%(33/84),PSE基因携带率为1.2%(1/84)。喹诺酮类抗生素非敏感菌株中,质粒上喹诺酮类耐药基因携带率为14.7%(5/34),其中qnrA基因携带率为11.8%(4/34);qnrS基因携带率为2.9%(1/34)。对喹诺酮类和氨基糖苷类抗生素非敏感菌株中,质粒上acc(6’)-Ib-cr基因的携带率为17.1%(7/41)。仅CMY基因在食源性和医源性分离株中的分布具有统计学差异(χ2=5.480,P<0.05)。结论:本研究涉及的沙门氏菌分离株中,对青霉素类抗生素耐药性较强,其次是氨基糖苷类、头孢菌素类和喹诺酮类。大多数耐β-内酰胺类抗生素的沙门氏菌菌株都携带相对应的质粒耐药基因,而耐喹诺酮类以及氨基糖苷类抗生素的沙门氏菌携带相对应的质粒耐药基因较少。

碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌临床分离株中质粒介导的喹诺酮类耐药基因检测

目的:探讨质粒介导的喹诺酮类耐药(PMQR)基因在碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)临床分离株中的分布情况。方法:收集CRKP 29株,聚合酶链反应(PCR)扩增并确定产物基因型。结果:CRKP中PMQR基因检出率为48.3%(14/29),其中qnrB 5株,包括qnrB2 1株、qnrB4 3株、qnrB10 1株;qnrS 5株,均为qnrS1;1株同时携带qnrS1和qnrB4;有3株携带aac(6')-Ib-cr基因。所有PMQR基因阳性菌株均同时携带β-内酰胺酶基因,其中8株同时携带碳青霉烯酶基因,占57.1%(8/14),以blaKPC-2(4/14)及blaNDM-1(3/14)为主。结论:PMQR基因在临床分离的CRKP中较为普遍,以qnr基因为主,且qnr阳性菌株碳青霉烯酶基因携带率较高,均为多重耐药株。

多重耐药菌中质粒介导喹诺酮耐药基因的检测和分析

目的分析广州医学院第一附属医院临床分离的60株多重耐药大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌质粒介导的喹诺酮耐药基因存在状况。方法采用VITEK-2全自动细菌鉴定仪检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对抗生素的药物敏感性，选择多重耐药的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌作为研究对象，用多重PCR法进行质粒介导的喹诺酮耐药基因的检测和分析。结果检测出耐药基因qnrA型2株，qnrB型耐药基因15株，aac（6’）-Ib基因9株，其中aac（6’）-Ib—cr型耐药基因5株。其中有1株肺炎克雷伯菌检测到同时含有qnrA和aac（6’）-Ib—cr基因；还有3株肺炎克雷伯菌检测到同时含有qnrB和aac（6’）-Ib—cr基因。未检测到qnrC、qnrD、qnrS、qepA型的耐药基因。结论临床分离的多重耐药大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌含有多种质粒介导的喹诺酮耐药基因，应引起临床的重视。

新质粒介导喹诺酮耐药基因qnrB24的基因分析

目的 对新的质粒介导喹诺酮耐药基因（qnrB24）进行相关研究和分析。方法 对新发现的qnrB24基因阳性菌株进行转移接合实验,了解qnrB24对喹诺酮类药物的耐药性,碱裂解法提取接合子质粒,Southern blot明确质粒大小。采用热不对称交错聚合酶链反应（PCR）技术研究基因5′端以及3′端未知侧翼碱基序列。结果 这个突变基因命名为qnrB24（Genbank登录号HM192542）。药敏试验结果显示携带qnrB24基因接合子对环丙沙星的最小抑菌浓度（MIC）值为0.125μg/mL,左氧氟沙星MIC值为0.190μg/mL。接合子对常见氟喹诺酮类抗菌药物的敏感性较大肠杆菌J53受体菌下降约8~11倍,接合子耐药水平低于临床分离菌株。Southern杂交显示该基因位于约60.0Kb质粒上。热不对称交错PCR结果显示,qnrB24基因5′端为假定的转座酶。结论 qnrB24通过质粒介导引起细菌对喹诺酮类药物的耐药性上升,容易发展成高水平耐药,因此需要监测其在细菌中的流行性。

2012-2013年山东省禽源大肠杆菌中质粒介导喹诺酮类药物耐药基因的检测

为研究近年来山东省禽源致病性大肠杆菌中质粒介导喹诺酮类药物耐药（plasmid-mediated quinolone resistance， PMQR）基因的基因型分布，及其对喹诺酮类抗生素的耐药性的影响，分别采用针对qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、oqxA、oqxB与qepA 8个耐药基因的通用引物，对93株2012-2013年分离自山东省的禽源大肠杆菌进行PCR检测，并对其进行了5种喹诺酮类药物的药敏试验。结果表明山东省禽源大肠杆菌对5种喹诺酮类抗生素均产生了较高耐药性（50.54%-86.30%）；PMQR基因携带率达到60.21%（56/93），其中26.88%（25/93）的菌株携带2种PMQR基因，1.07%（1/93）的菌株携带3种PMQR基因；qnrA、qnrB、qnrC、qnrD与qepA基因未被检测到，qnrS、oqxA和oqxB基因在山东省禽源致病性大肠杆菌中分布较为广泛，其检出率依次为22.58%（21/93）、40.86%（38/93）和24.73%（23/93）。

肺炎克雷伯菌的敏感性及其质粒介导的耐药基因的分布特点分析

目的分析肺炎克雷伯菌的敏感性和质粒介导的耐药基因在肺炎克雷伯菌中的分布特点。方法收集我院肺炎克雷伯菌115株,微量肉汤稀释法测定细菌的敏感性;使用PCR和DNA测序技术检测超广谱β内酰胺酶、AmpC酶、碳青霉烯酶及16S rRNA甲基化酶的编码基因和喹诺酮耐药基因。根据亚胺培南的MIC,将菌株分为碳青霉烯不敏感肺炎克雷伯菌(CNSKP)和碳青霉烯敏感肺炎克雷伯菌(CSKP),分析上述基因在两组中的分布差异。结果 115株细菌对所测药物的不敏感率在30%以上;DNA分析显示blaCTX-M-14是最主要的blaESBL;oqxAB的流行率最高,为60.9%,并且在CSKP中的分布显著高于CNSKP组,而blaCTX-M、blaTEM和rmtB在CRKP组的分布在CNSKP显著高于CSKP组(P<0.05)。结论应加强抗生素的合理使用和感染控制措施的实施,以减缓耐药元件的播散,预防CNSKP的产生。

猪源携带质粒介导喹诺酮类耐药基因大肠杆菌气源性传播的研究

为了调查养猪场携带质粒介导喹诺酮类耐药基因大肠杆菌的气源性传播情况,本试验分别在5个猪场舍内及舍外上风向和下风向不同距离收集空气样品,并在舍内随机采集粪便样品,分离大肠杆菌。药敏试验检测其对14种抗生素的耐药性。以质粒介导喹诺酮类耐药基因(qnr、aac(6′)-Ib-cr、qepA)为指示基因,利用肠杆菌基因间重复一致序列聚合酶链式反应(ERIC-PCR)鉴定技术,分别对5个猪场不同样品中大肠杆菌的遗传相似性进行分析,评估其向舍外空气的传播情况。结果显示,5个猪场中的大肠杆菌对庆大霉素、卡那霉素、四环素、链霉素、萘啶酸、复方新诺明等12种常用抗生素耐药率较高,且呈现多重耐药。ERIC-PCR结果显示,46.34%(19/41)的舍内空气分离株与粪便分离株来源相同,其中73.68%(14/19)的分离株携带的耐药基因也相同;68.42%(26/38)的舍外空气分离株与舍内空气或粪便分离株来源相同,其中65.38%(17/26)的菌株携带相同的耐药基因。结果表明,起源于舍内粪便的携带质粒介导喹诺酮类耐药基因的大肠杆菌能形成气溶胶污染舍内空气,并借助舍内外气体交换,传播到舍外不同距离空气中(≥400m),对养殖场周围的环境卫生及社区居民的健康形成威胁。

犬源大肠杆菌质粒介导的喹诺酮类药物耐药基因的检测及药物敏感性分析

采用PCR方法检测了102株犬源大肠杆菌中质粒介导的喹诺酮类药物耐药(plasmid-mediated quinolone resistance,PMQR)基因的分布,并采用微量肉汤稀释法测定了6种抗菌药物对犬源大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC)。在被检测的8种PMQR基因中,仅有oqx A、oqx B、qnr S这3种耐药基因被检测出,检出率分别为9.80%、11.76%和14.70%,其中同时含有2种耐药基因的菌株检出率为8.82%,同时含有3种耐药基因的菌株检出率为4.90%;犬源大肠杆菌对喹诺酮类药物已经具有较高的耐药性,其对恩诺沙星、环丙沙星和氧氟沙星的耐药率分别达到了71.57%、64.71%、48.04%。

临床分离气单胞菌喹诺酮类的耐药机制研究

目的探讨临床分离气单胞菌属细菌(Aeromonas spp.)喹诺酮类药物耐药机制。方法收集从北京友谊医院2017年腹泻患者粪便标本中分离的气单胞菌,采用微量肉汤稀释法检测其对喹诺酮类药物的敏感性,提取菌株核酸进行PCR扩增,测序分析气单胞菌喹诺酮耐药决定区(quinolone-resistance-deter mining region,QRDR)及喹诺酮耐药质粒相关(plasmid-mediated quinolone resistance,PMQR)基因。结果共收集111株气单胞菌,其中7株(6.3%)对萘啶酸(NAL)和环丙沙星(CIP)均耐药,54株(48.6%)对NAL耐药但对CIP敏感,50株(45.0%)对NAL和CIP均敏感。QRDR测序结果显示,NAL耐药菌株gyrA基因第83位发生丝氨酸(Ser)突变,突变为异亮氨酸(Ile)、缬氨酸(Val)或酪氨酸(Tyr)。对NAL-CIP耐药的菌株中,除了gyrA基因突变外,parC基因第87位Ser突变为Ile。CIP敏感的104株菌株中,仅有7株parC基因第87位Ser突变。PMQR基因检测结果显示,QnrS基因检出率为7.2%(8株),aac(6′)-Ib-cr基因检出率为6.3%(7株),且QnrS和aac(6′)-Ib-cr基因检出主要集中在CIP耐药菌株中,CIP耐药菌株PMQR基因检出率为85.7%。结论气单胞菌喹诺酮低水平耐药主要与gyrA基因第第83位突变或QnrS基因有关。gyrA基因第83位突变和parC基因第87位突变Ser87Ile联合PMQR基因存在时,可能与气单胞菌对喹诺酮的高水平耐药相关。

水产动物源细菌质粒介导的喹诺酮类耐药研究概况

喹诺酮类药物是一种人工合成的抗菌药物,这类抗菌药都有喹诺酮环结构,又称吡酮酸类或吡啶酮酸类。喹诺酮类药物能够穿透细胞壁进入细胞直接作用于DNA促旋酶(拓扑异构酶Ⅱ)和拓扑异构酶Ⅳ[1],通过抑制这两种酶而阻断DNA的复制,从而发挥抗菌作用[2]。由于这类药物拥有抗菌谱广、高效、用药量低、给药方便、毒副作用低和与其他抗菌药物不产生交叉耐药等优点[3],广泛应用于人医临床、畜牧水产养殖的细菌病治疗中。目前喹诺酮类药物主要用于治疗水产养殖动物常见病原如气单胞菌(Aeromonas)、弧菌(Vibrio)等引起的细菌性疾病[4]。

潍坊市肉鸭源大肠杆菌喹诺酮类药物耐药性的检测

为研究近年来山东省肉鸭源致病性大肠杆菌对喹诺酮类药物的耐药性,本研究将2010年以来分离自山东省潍坊市发病肉鸭的232株大肠杆菌进行了洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星等4种喹诺酮类药物的药敏试验,并对其进行了质粒介导喹诺酮类药物耐药基因的PCR检测。结果表明,山东省潍坊市肉鸭源大肠杆菌对4种喹诺酮类抗生素均产生了较高耐药性(54.31%~82.760%),质粒介导喹诺酮类耐药(PMQR)基因携带率达到58.19%(135/232),26.29%(61/232)的菌株携带两种产PMQR基因,1.72%(4/232)的菌株携带三种PMQR基因。未检测到qnr A、qnr B、qnr C、qnr D与Qep A基因,qnr S、oqx A和oqx B基因在山东省禽源致病性大肠杆菌中分布较为广泛,其检出率依次为19.83%(46/232)、41.81%(97/232)和26.29%(61/232)。

儿科肺炎克雷伯菌中质粒介导的喹诺酮耐药基因流行现状

目的了解质粒介导的喹诺酮耐药基因（plasmid-mediated quinolone resistance genes，PMQR）在儿科临床分离肺炎克雷伯菌中的流行情况与分布特点。方法收集首都儿科研究所附属儿童医院临床分离的肺炎克雷伯菌，E-test法及琼脂稀释法测定菌株对不同抗生素的最低抑菌浓度（MIC）；PCR法检测质粒介导的喹诺酮耐药基因qnrA、qnrB、qnrS、aac（6’）-I b-cr和qepA；PCR扩增后测序检测超广谱B．内酰胺酶（ESBLs）相关基因及染色体喹诺酮耐药决定基因gyrA及parC的突变情况：质粒接合实验检测耐药基因是否在菌株间转移。结果131株肺炎克雷伯菌中，喹诺酮类药物耐药率为9．92％：PMQR基因检出率为30．5％（40／131），其中90％为产ESBLs菌株，各种基因检出率qn培基因6．87％，qnrS基因22．9％，aac（6’）-Ib-cr基因4．58％，未检出qnrA及qepA基因；40株PMQR阳性菌株中，2株存在gyrA和parC编码氨基酸序列改变；23株PMQR阳性菌株通过接合试验传递成功。相对于受体菌，接合子对环丙沙星的MIC提高了2～32倍。结论质粒介导喹诺酮类药物耐药基因在儿科肺炎克雷伯菌中有高水平的携带率，阳性菌株多为产ESBLs株，耐药基因可在菌株问水平传播。

质粒介导的耐药基因水平传播研究进展

质粒是细菌染色体外能够自我复制的DNA分子,携带耐药基因的质粒能对包括β-内酰胺类、大环内酯类、氨基糖苷类、喹诺酮类、磺胺类、四环素类、氯霉素类等抗生素产生耐药性（[1]）。其介导的耐药基因可随移动遗传元件（插入序列、转座子）在细菌间发生水平传播（[2]）,是社区和住院病人获得性感染的主要致病机制。目前,从临床菌株分离的质粒大部分来自埃希菌属、沙门菌属和肺炎克雷伯菌属等肠杆菌科细菌。而不动杆菌属分离的质粒大部分来自鲍曼不动杆菌（http：／／www．ncbi．nlm．nih．gov／nuccore／，Oct 2014）。本文将对革兰阴性杆菌中的碳青霉烯酶、CTX-M型超广谱β-内酰氨酶（ESBL）和质粒介导的喹喏酮类耐药（PMQR）基因进行综述。

从患者胆汁分离的大肠埃希菌中质粒介导的氟喹诺酮类耐药基因的检测

目的分析浙江省衢州市开化县第二人民医院消化内科胆汁分离的大肠埃希菌的耐药特点并调查质粒介导的喹诺酮类耐药基因的分布情况和流行特点。方法收集该院消化内科患者2011年1月至2013年6月分离的大肠埃希菌724株,均为非重复性菌株,采用全自动微生物分析仪器VITEK 2 COMPACT进行细菌鉴定及药物敏感性分析,采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)分析质粒介导的氟喹诺酮类耐药基因(plasmidmediated quinolone resistance genes,PMQR)如qnr A、qnr B、qnr S、aac(6')–Ib-cr和qep A基因的流行特点。结果胆源性大肠埃希菌的构成比达18.65%(135/724),其对环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率高达61.5%(83/135)和55.6%(75/135),未检出碳青霉烯类抗生素耐药菌株;PCR检测PM QR基因结果显示:135株胆源性大肠埃希菌中,121株(89.63%)qnr A1基因阳性,45株(33.33%)qnr B4基因阳性,32株(23.70%)qnr B6基因阳性,43株(31.85%)qnr S1基因阳性,34株(25.19%)aac(6')-Ib-cr基因阳性菌株,未检出qep A基因;其中45株(33.33%)同时携带qnr A1、qnr B4基因,32株(23.70%)同时携带qnr A1、qnr B6,25株(18.52%)同时携带qnr A1、qnr B4、qnr S1,21株(15.56%)同时携带qnr A1、qnr B4、qnr S1、acc(6')-Ib-cr,12株(100%)同时携带qnr A1、qnr B6、qnr S1、acc(6')-Ibcr,且环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率随着PM QR基因组合种类的增多而增多。结论消化内科胆汁分离的大肠埃希菌氟喹诺酮类抗生素耐药严重,耐药基因主要以qnr A1为主,qnr B4和qnr B6次之,且存在多种PMQR基因组合形式,这些潜在播散的氟喹诺酮耐药基因对于临床胆道感染的治疗有很大的挑战。