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pcDNA3.0-PTEN质粒转染15dPGJ2对乳腺癌MCF-7细胞体外培养的影响
被引量:
2
1
作者
马斌林
耿中利
+3 位作者
阿力比亚提.艾尼
徐虓
孙刚
董朝
《新疆医科大学学报》
CAS
2009年第7期833-838,共6页
目的:探讨15dPGJ2和PTEN质粒转染对人乳腺癌细胞株MCF-7体外培养的抑制作用,为临床靶向和基因治疗提供基础试验依据。方法:取生长良好的乳腺癌MCF-7细胞株,按5.0×10^6/L接种96孔板,按析因试验设置试验组,分别给予过氧化物...
目的:探讨15dPGJ2和PTEN质粒转染对人乳腺癌细胞株MCF-7体外培养的抑制作用,为临床靶向和基因治疗提供基础试验依据。方法:取生长良好的乳腺癌MCF-7细胞株,按5.0×10^6/L接种96孔板,按析因试验设置试验组,分别给予过氧化物酶体增殖物受体d然激动剂15dPGJ2,用野生型抑癌基因PTEN真核表达载体pcDNA3.0-PTEN质粒转染(脂质体转染法)MCF-7乳腺癌细胞株。采用MTT比色法观察15dPGJ2和野生型PTEN质粒转染对体外培养的MCF-7细胞系生长的抑制作用;用倒置光学显微镜观察MCF-7细胞用药前后的形态学变化;取生长良好对数生长期的MCF-7乳腺癌细胞株,调整细胞浓度至2.0×10^7/L接种于6孔板,设置3个复孔。连续培养3d;待细胞生长超过40%时,用15dPGJ240μmol/L,pcDNA3.0-PTEN质粒2μg/ml转染后连续培养3d常规消化收集细胞,离心,70%酒精固定,应用流式细胞仪检测凋亡细胞和细胞周期变化。结杲:15dPGJ2和PTEN质粒转染能有效的抑制体外培养的乳腺癌细胞株MCF-7的生长(P〈0.05),两者联合使用抑制效果更好(P〈0.05)。pcDNA3.0-PTEN质粒转染、15dPGJ240/μmol/L和两者联合干预在MCF-7乳腺癌细胞株连续72h时即达到有效抑制率,联合处理组处理MCF-7乳腺癌细胞株细胞生长抑制率最大(P〈0.05)。pcDNA3.0-PTEN质粒转染72h能将60.6%的MCF-7乳腺癌细胞阻滞在G0-1期(DNA合成前期)周期阻滞效果最为明显(P〈0.05)。与对照组相比pcDNA3.0-PTEN质粒转染、15d-PGJ2干预及联合用药均不能有效的诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡(P〈0.05))。联合用药细胞凋亡率低于单用15d-PGJ2(P〈0.05),pcDNA3.0-PTEN质粒转染可降低MCF-7乳腺癌细胞的凋亡率(P〈0.05)。结论:体外培养抑制试验证明pcDNA3.0-PTEN质粒转染、15dPGJ2 40μmol/L能有效的抑制乳腺癌细胞株MCF-7的生长,pcDNA3.0-PTEN质粒转染能抑制MCF-7乳腺癌细胞的恶性表型,pcDNA3.0-PTEN质粒转染抑制MCF-7乳腺癌生长的机制是周期阻滞,联合15d-PGJ2不增加周期阻滞作用。
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关键词
MCF-7
乳腺癌
15dPGJ2
pcdna
3.0
-PTEN
质粒
转染
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职称材料
兔抗人重组生长激素rhGH多克隆抗体的制备、纯化及鉴定
2
作者
牛志国
邓保国
+1 位作者
宋向凤
王辉
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第1期72-73,80,共3页
目的制备抗人生长激素(growth hormone,GH)的多克隆抗体并鉴定其性能。方法真核细胞表达质粒pcDNA3.0-GHcDNA免疫家兔,制备rhGH多克隆抗体;ELISA法检测抗体效价。亲和层析法纯化后,进行Western blot、免疫组织化学和激光共聚焦显微镜检...
目的制备抗人生长激素(growth hormone,GH)的多克隆抗体并鉴定其性能。方法真核细胞表达质粒pcDNA3.0-GHcDNA免疫家兔,制备rhGH多克隆抗体;ELISA法检测抗体效价。亲和层析法纯化后,进行Western blot、免疫组织化学和激光共聚焦显微镜检测,鉴定抗体的特异性与适用范围。结果得到兔抗人重组人生长激素rhGH多克隆抗体,效价达1:40000。纯化后的抗体可特异识别超表达的hGH和人内源性GH,可用于免疫组织化学实验、Western blot及激光共聚焦。结论用质粒免疫家兔制备的抗GH抗体具有较高的效价以及特异性,为hGH的功能性研究提供了有力的支持。
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关键词
重组人生长激素
质粒pcdna3.0-ghcdna
多克隆抗体
免疫亲和层析纯化
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职称材料
带Flag标签的Sirt4真核表达载体的构建及功能验证
3
作者
朱祥
马晓燕
+5 位作者
马路园
张德宇
刘娟
杨旭辉
赵彩彦
徐小洁
《军事医学》
CAS
北大核心
2019年第1期37-41,共5页
目的构建带Flag标签pcDNA3.0载体的Sirt4真核表达载体,同时验证该基因与肝癌细胞HepG2生长之间的关系。方法以人卵巢文库为模板,采用PCR技术扩增出Sirt4的CDS区编码序列,将PCR产物插入到带Flag标签的pcDNA3.0载体上,转化大肠杆菌DH5α...
目的构建带Flag标签pcDNA3.0载体的Sirt4真核表达载体,同时验证该基因与肝癌细胞HepG2生长之间的关系。方法以人卵巢文库为模板,采用PCR技术扩增出Sirt4的CDS区编码序列,将PCR产物插入到带Flag标签的pcDNA3.0载体上,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞提取质粒,测序正确后将pcDNA3.0-Flag和pcDNA3.0-Flag-Sirt4分别转染肝癌细胞HepG2,Western印迹实验鉴定目的基因蛋白表达,CCK-8法、克隆形成实验测定其对肝癌细胞HepG2生长的影响,Transwell证明Sirt4对肝癌细胞HepG2体外侵袭能力的影响。结果双酶切结果显示,pcDNA3.0-Flag-Sirt4真核表达载体构建成功;Western印迹实验验证该基因蛋白成功表达;CCK-8法和克隆形成实验证明过表达Sirt4基因抑制HepG2细胞增殖,Transwell证明过表达Sirt4明显抑制HepG2细胞体外侵袭能力。结论pcDNA3.0-Flag-Sirt4真核表达载体构建成功,过表达Sirt4基因可抑制肝癌细胞增殖及体外侵袭能力,为进一步研究Sirt4在肝癌中的发生与发展奠定了基础。
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关键词
肝肿瘤
HEPG2
pcdna
3.0
-Flag-Sirt4
细胞增殖
质粒
转染
原文传递
题名
pcDNA3.0-PTEN质粒转染15dPGJ2对乳腺癌MCF-7细胞体外培养的影响
被引量:
2
1
作者
马斌林
耿中利
阿力比亚提.艾尼
徐虓
孙刚
董朝
机构
新疆医科大学附属肿瘤医院乳腺头颈外科
出处
《新疆医科大学学报》
CAS
2009年第7期833-838,共6页
基金
新疆少数民族科技人才特殊培养计划科研项目(编号:200823114)
新疆维吾尔自治区教育厅高校青年教师启动基金项目(编号:XJEDU2006525)
文摘
目的:探讨15dPGJ2和PTEN质粒转染对人乳腺癌细胞株MCF-7体外培养的抑制作用,为临床靶向和基因治疗提供基础试验依据。方法:取生长良好的乳腺癌MCF-7细胞株,按5.0×10^6/L接种96孔板,按析因试验设置试验组,分别给予过氧化物酶体增殖物受体d然激动剂15dPGJ2,用野生型抑癌基因PTEN真核表达载体pcDNA3.0-PTEN质粒转染(脂质体转染法)MCF-7乳腺癌细胞株。采用MTT比色法观察15dPGJ2和野生型PTEN质粒转染对体外培养的MCF-7细胞系生长的抑制作用;用倒置光学显微镜观察MCF-7细胞用药前后的形态学变化;取生长良好对数生长期的MCF-7乳腺癌细胞株,调整细胞浓度至2.0×10^7/L接种于6孔板,设置3个复孔。连续培养3d;待细胞生长超过40%时,用15dPGJ240μmol/L,pcDNA3.0-PTEN质粒2μg/ml转染后连续培养3d常规消化收集细胞,离心,70%酒精固定,应用流式细胞仪检测凋亡细胞和细胞周期变化。结杲:15dPGJ2和PTEN质粒转染能有效的抑制体外培养的乳腺癌细胞株MCF-7的生长(P〈0.05),两者联合使用抑制效果更好(P〈0.05)。pcDNA3.0-PTEN质粒转染、15dPGJ240/μmol/L和两者联合干预在MCF-7乳腺癌细胞株连续72h时即达到有效抑制率,联合处理组处理MCF-7乳腺癌细胞株细胞生长抑制率最大(P〈0.05)。pcDNA3.0-PTEN质粒转染72h能将60.6%的MCF-7乳腺癌细胞阻滞在G0-1期(DNA合成前期)周期阻滞效果最为明显(P〈0.05)。与对照组相比pcDNA3.0-PTEN质粒转染、15d-PGJ2干预及联合用药均不能有效的诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡(P〈0.05))。联合用药细胞凋亡率低于单用15d-PGJ2(P〈0.05),pcDNA3.0-PTEN质粒转染可降低MCF-7乳腺癌细胞的凋亡率(P〈0.05)。结论:体外培养抑制试验证明pcDNA3.0-PTEN质粒转染、15dPGJ2 40μmol/L能有效的抑制乳腺癌细胞株MCF-7的生长,pcDNA3.0-PTEN质粒转染能抑制MCF-7乳腺癌细胞的恶性表型,pcDNA3.0-PTEN质粒转染抑制MCF-7乳腺癌生长的机制是周期阻滞,联合15d-PGJ2不增加周期阻滞作用。
关键词
MCF-7
乳腺癌
15dPGJ2
pcdna
3.0
-PTEN
质粒
转染
Keywords
MCF-7
breast cancer
15dPGJ2
pcdna
3.0
-PTEN plasmid
transfection
分类号
R737.9 [医药卫生—肿瘤]
R589.2 [医药卫生—内分泌]
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职称材料
题名
兔抗人重组生长激素rhGH多克隆抗体的制备、纯化及鉴定
2
作者
牛志国
邓保国
宋向凤
王辉
机构
新乡医学院免疫学研究中心
新乡医学院微生物学教研室
出处
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第1期72-73,80,共3页
基金
河南省教育厅自然科学资助项目(200510472009)
文摘
目的制备抗人生长激素(growth hormone,GH)的多克隆抗体并鉴定其性能。方法真核细胞表达质粒pcDNA3.0-GHcDNA免疫家兔,制备rhGH多克隆抗体;ELISA法检测抗体效价。亲和层析法纯化后,进行Western blot、免疫组织化学和激光共聚焦显微镜检测,鉴定抗体的特异性与适用范围。结果得到兔抗人重组人生长激素rhGH多克隆抗体,效价达1:40000。纯化后的抗体可特异识别超表达的hGH和人内源性GH,可用于免疫组织化学实验、Western blot及激光共聚焦。结论用质粒免疫家兔制备的抗GH抗体具有较高的效价以及特异性,为hGH的功能性研究提供了有力的支持。
关键词
重组人生长激素
质粒pcdna3.0-ghcdna
多克隆抗体
免疫亲和层析纯化
Keywords
rhGH
pcdna
3.0
-ghcdna
plasmid Polyclonal antibody Immunoaffinity chromatography purification
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
下载PDF
职称材料
题名
带Flag标签的Sirt4真核表达载体的构建及功能验证
3
作者
朱祥
马晓燕
马路园
张德宇
刘娟
杨旭辉
赵彩彦
徐小洁
机构
军事科学院军事医学研究院生物工程研究所细胞工程研究室
长春中医药大学附属医院心内科
河北医科大学第三附属医院传染科
出处
《军事医学》
CAS
北大核心
2019年第1期37-41,共5页
基金
国家自然科学基金面上项目(81672602)
国家自然科学基金优秀青年科学基金项目(81822037)
全军后勤科研计划重点项目(BWS16J010)
文摘
目的构建带Flag标签pcDNA3.0载体的Sirt4真核表达载体,同时验证该基因与肝癌细胞HepG2生长之间的关系。方法以人卵巢文库为模板,采用PCR技术扩增出Sirt4的CDS区编码序列,将PCR产物插入到带Flag标签的pcDNA3.0载体上,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞提取质粒,测序正确后将pcDNA3.0-Flag和pcDNA3.0-Flag-Sirt4分别转染肝癌细胞HepG2,Western印迹实验鉴定目的基因蛋白表达,CCK-8法、克隆形成实验测定其对肝癌细胞HepG2生长的影响,Transwell证明Sirt4对肝癌细胞HepG2体外侵袭能力的影响。结果双酶切结果显示,pcDNA3.0-Flag-Sirt4真核表达载体构建成功;Western印迹实验验证该基因蛋白成功表达;CCK-8法和克隆形成实验证明过表达Sirt4基因抑制HepG2细胞增殖,Transwell证明过表达Sirt4明显抑制HepG2细胞体外侵袭能力。结论pcDNA3.0-Flag-Sirt4真核表达载体构建成功,过表达Sirt4基因可抑制肝癌细胞增殖及体外侵袭能力,为进一步研究Sirt4在肝癌中的发生与发展奠定了基础。
关键词
肝肿瘤
HEPG2
pcdna
3.0
-Flag-Sirt4
细胞增殖
质粒
转染
Keywords
liver neoplasms
HepG2
pcdna
3.0
-Flag-Sirt4
cell proliferation
plasmids
transfection
分类号
R735.7 [医药卫生—肿瘤]
R446.62 [医药卫生—诊断学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
pcDNA3.0-PTEN质粒转染15dPGJ2对乳腺癌MCF-7细胞体外培养的影响
马斌林
耿中利
阿力比亚提.艾尼
徐虓
孙刚
董朝
《新疆医科大学学报》
CAS
2009
2
下载PDF
职称材料
2
兔抗人重组生长激素rhGH多克隆抗体的制备、纯化及鉴定
牛志国
邓保国
宋向凤
王辉
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010
0
下载PDF
职称材料
3
带Flag标签的Sirt4真核表达载体的构建及功能验证
朱祥
马晓燕
马路园
张德宇
刘娟
杨旭辉
赵彩彦
徐小洁
《军事医学》
CAS
北大核心
2019
0
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