大鼠肝再生过程中肝细胞质膜微区差异蛋白质鉴定与分析

动物肝是具有极强再生能力的器官,研究并阐明肝再生的机制可为肝移植等与肝损伤相关的疾病治疗提供理论依据.质膜包括"脂筏(lipid rafts)"和"质膜微囊(caveolae)"的微区,具有参与胞吞胞饮、信号转导、运输胆固醇等重要功能.肝再生过程中,肝质膜微区脂筏蛋白质受到内部调控的影响会发生改变.捕获脂筏微区信号蛋白分布的变化,对于理解和阐明肝再生过程中信号通路途径有重要意义.本研究应用成熟的大鼠2/3肝切除模型结合蔗糖密度梯度离心法,提取假手术组与肝再生组大鼠肝细胞质膜,并进一步纯化获得质膜微区蛋白质.通过SDS-PAGE分离以及ESI-QTOF质谱鉴定,对获得的质膜微区蛋白质进行差异分析.结果显示,有30个微区蛋白质差异表达,其中13个上调、17个下调.生物信息学分析表明,所鉴定到的蛋白质主要参与细胞增殖、程序性死亡、细胞凋亡等调控,同时涉及到与肝再生密切相关的血管生成等信号通路.本文为质膜微区蛋白质的研究提供了方法上的参考以及相关基础数据,为后续临床肝再生的研究奠定了一定的基础.

质膜微区对土拉弗朗西斯菌LVS感染鼠巨噬细胞的影响(英文)

目的评估土拉弗朗西斯菌LVS入侵鼠巨噬细胞过程中质膜微区的作用。方法用电穿孔法将穿梭质粒pFNLTP6 gro-gfp导入土拉弗朗西斯菌LVS。细胞膜用FM4-64染色,结合单抗的微囊蛋白-1用键合了Alexa594荧光素的羊抗鼠二抗显色。用Z轴电动聚焦的荧光显微镜分析土拉弗朗西斯菌LVS感染。用甲基-β-环式糊精干扰富含脂质的胞膜损耗胆固醇,以评估质膜微区的损伤对弗朗西斯菌入侵的影响。菲律平Ⅲ用以检测胆固醇损耗的效果。结果土拉弗朗西斯菌疫苗株可以诱导膜结构域伸出伪足将细菌吸收进入巨噬细胞。质膜微区相关成分微囊蛋白-1与含有弗朗西斯菌的囊泡一同进入宿主。弗朗西斯菌入侵巨噬细胞需要胆固醇丰富的膜结构域。结论胆固醇丰富的质膜微区和微囊蛋白-1在弗朗西斯菌早期进入巨噬细胞期间发挥重要作用。

植物细胞胞吞途径及其研究方法

胞吞作用(Endocytosis)通过对质膜脂类、整合蛋白以及胞外物质的内化严格控制物质和信号的交流,是细胞与外界环境交流和细胞内稳态维持的重要方式之一。相较于动物和酵母细胞,植物细胞胞吞作用的研究相对滞后。随着拟南芥突变体库的建立以及药理学等方法的应用,人们对植物细胞膜泡运输的调节机制有了新的认识。本文阐述植物细胞中主要的胞吞途径,并着重总结植物细胞胞吞途径研究常用的成像技术和生物化学方法,为今后开展胞吞途径的系统研究提供技术和方法上的参考。