钙离子转运ATP酶B2杂合突变导致小鼠渐进性前庭功能障碍

目的·研究不同月龄钙离子转运ATP酶B2(ATPase plasma membrane Ca^(2+)transporting 2,ATP2B2)Oblivion杂合突变小鼠前庭毛细胞结构和前庭功能的变化。方法·选取2月龄及8月龄Atp2b2 Oblivion杂合突变雄性小鼠各10只,以同龄C57BL/6J野生型雄性小鼠作为对照。通过免疫荧光实验观察不同月龄2组小鼠前庭毛细胞ATP2B2表达情况,并对微纹区及纹外区毛细胞数量进行统计;通过扫描电子显微镜(电镜)观察小鼠前庭毛细胞纤毛形态;通过透射电镜观察小鼠前庭毛细胞带状突触和线粒体;采用前庭诱发电位(vestibular evoked potential,VsEP)、前庭肌源性诱发电位(vestibular evoked myogenic potential,VEMP),及转棒、平衡木实验检测小鼠的前庭功能。结果·2组小鼠ATP2B2均主要表达于前庭毛细胞纤毛,2月龄及8月龄Atp2b2 Oblivion杂合突变小鼠微纹区及纹外区毛细胞数量与野生型小鼠均无明显差异。扫描电镜下,2月龄及8月龄杂合突变小鼠椭圆囊毛细胞纤毛无明显结构异常。透射电镜下,2月龄杂合突变小鼠前庭毛细胞表皮板与神经连接部位附近的线粒体结构无异常,突触结构无异常;8月龄杂合突变小鼠前庭毛细胞表皮板附近线粒体出现空泡样变性,神经连接部位附近的线粒体及突触结构无异常。2月龄及8月龄杂合突变小鼠VsEP及VEMP阈值均较野生型小鼠显著上升,VsEP波形分析显示杂合突变小鼠P1潜伏期延长,P1N1波幅降低(均P<0.05)。2月龄杂合突变小鼠转棒、平衡木实验结果未见明显改变,但8月龄杂合突变小鼠完成转棒、平衡木能力较野生型小鼠显著下降(均P<0.05)。结论·Atp2b2 Oblivion杂合突变小鼠2月龄时前庭电生理功能下降,8月龄时出现前庭相关行为学异常,Atp2b2 Oblivion杂合突变小鼠呈渐进性前庭功能障碍。

铝和铝+钙对小麦幼苗根尖质膜、液泡膜微囊ATP酶和膜流动性的影响

研究了铝和铝 +钙对小麦幼苗根尖质膜、液泡膜微囊H+ ATP酶、Ca2 + ATP酶、Mg2 + ATP酶活性及其动力学参数和膜流动性的影响。在质膜和液泡膜微囊制剂中加入 1.0mmol/L的Al3+(AlCl3)时 ,H+ ATP酶、Ca2 + ATP酶、Mg2 + ATP酶活性和酶促反应的Vmax及膜流动性下降 ,而酶促反应的最适pH和Km 均不受影响。提高酶促反应介质的Ca2 +(CaCl2 )浓度可以缓解Al3 +对膜ATP酶活性和膜流动性的影响。推测Al3

紫外线B照射对人晶状体上皮细胞质膜钙ATP酶3表达的影响

背景 细胞质膜钙ATP酶3（PMCA3）参与维持晶状体上皮细胞（LECs） Ca2＋的平衡,可能与白内障的病理过程有关,紫外线B（UVB）是引起白内障的重要因素之一,但UVB对LECs中PMCA3表达的影响少有报道. 目的 研究UVB对人LECs系B-3（HLE B-3） PMCA3表达的影响. 方法 对HLE B-3细胞进行培养和传代,当细胞达80％以上融合时分别暴露于用不同剂量（0、5、10、20 mJ·s/cm2）的UVB分别照射0、20、40和80 s,然后继续培养24、48和72 h,用MTT法检测不同剂量UVB照射后细胞的生存率;用JC-1染色法检测UVB照射后细胞线粒体膜电位（△ψm）的变化;以DCFH-DA染色法检测UVB照射后细胞内活性氧簇（ROS）的变化;采用annexin V-FITC/PI染色法检测UVB照射后细胞的凋亡情况;用Fluo-3/AM染色法检测细胞内Ca2＋浓度的变化;分别采用实时荧光定量PCR（real-time PCR）法和Western blot法检测UVB照射后细胞中PMCA3 mRNA及PMCA蛋白的表达变化. 结果 随着UVB照射剂量的增加和照射时间的延长,细胞生存率均明显下降,差异均有统计学意义（F分组=72.411,P=0.000; F时间=36.588,P=0.000）,其中10 mJ·s/cm2、20 mJ·s/cm2 UVB照射后24 h HLE B-3细胞的生存率分别为（75.3±2.2）％和（48.7±4.5）％,明显低于对照组的（100.0±0.0）％,差异均有统计学意义（P=0.001、0.000）;5、10、20 mJ·s/cm2 UVB照射后48 h细胞的生存率分别为（84.9±1.2）％、（69.3±17.4）％和（32.8±4.5）％,均明显低于对照组的（100.0±0.0）％,差异均有统计学意义（P=0.047、0.000、0.000）;5、10、20 mJ·s/cm2 UVB照射后72 h细胞的生存率分别为（55.1±3.0）％、（42.1±1.9）％和（26.1±4.7）％,与对照组的（100.0±0.0）％相比生存率明显降低,差异均有统计学意义（均P=0.000）.JC-1染色法检测表明,对照组细胞内可见红色荧光,5mJ·s/cm2 UVB照射后细胞内出现绿色荧光,10 mJ·s/cm2及20 mJ·s/cm2 UVB照射组出现绿色荧光增强,红色荧光减弱.5、10、20 mJ· s/cm2 UVB照射后细胞内的ROS由0.4％分别增加至35.8％、51.9％和76.7％.0 mJ·s/cm2 UVB照射组凋亡和坏死细胞比例为2.0％,5、10、20 mJ·s/cm2 UVB照射组凋亡和坏死细胞率分别为4.2％、7.6％和15.1％.10 mJ·s/cm2和20 mJ·s/cm2 UVB照射组细胞内Ca2＋水平分别为0 mJ·s/cm2照射组的（1.2±0.1）倍和（1.3±0.1）倍,差异均有统计学意义（P=0.039、0.004）.5、10和20 mJ·s/cm2 UVB照射组HLE B-3细胞PMCA3 mRNA表达量均明显低于对照组,差异均有统计学意义（P=0.001、0.004、0.000）,各组细胞中的PMCA蛋白相对表达量也均明显低于对照组,差异均有统计学意义（P=0.000、0.000、0.001）. 结论 UVB照射可导致白内障发生的机制可能与人LECs中PMCA3表达量下降和诱导LECs凋亡有关,UVB的作用呈剂量和时间依赖性.

甲基强的松龙对大鼠脊髓损伤后质膜钙ATP同工酶2和神经内分泌蛋白7B2表达的影响

目的:探讨甲基强的松龙(MP)对大鼠脊髓损伤后质膜钙ATP同工酶2(plasm amembrane Ca2+-AT-Paseiso form2)和神经内分泌蛋白7B2(neuroendrocrine protein 7B2)表达的影响。方法:SD大鼠30只。随机分为假手术组、单纯脊髓损伤组(损伤组)、脊髓损伤+大剂量甲基强的松龙治疗组(MP组)。应用改良Allen打击法致T8脊髓损伤。MP组大鼠尾静脉内注射大剂量MP(30mg/kg)。损伤后24h将损伤平面上下0.5cm的脊髓组织切取,进行RT-PCR反应,检测质膜钙ATP同工酶2和神经内分泌蛋白7B2的基因表达情况。结果:在术后24h假手术组质膜钙ATP同工酶2mRNA表达的相对丰度为0.3232±0.0032,损伤组为0.1518±0.069,MP组为0.5721±0.1325,三组间有显著性差异,MP组大于假手术组(P<0.05),假手术组大于损伤组(P<0.01)。假手术组神经内分泌蛋白7B2mRNA表达的相对丰度为1.2289±0.1189,损伤组为0.5843±0.2951,MP组为1.2890±0.2268,MP组和假手术组与损伤组比较差异有显著性(P<0.01),MP组与假手术组比较差异无显著性(P>0.05)。结论:脊髓损伤后,细胞合成质膜钙ATP同工酶2明显降低,邻近损伤处的脊髓组织神经内分泌蛋白7B2的表达降低,大剂量MP能显著促进并逆转质膜钙ATP同工酶2表达的丰度,促进神经内分泌蛋白7B2的表达,发挥细胞保护作用。

质膜钙ATP酶异构体1～3在新生大鼠耳蜗基底膜的表达

目的通过Western blot方法检测质膜钙ATP酶异构体1～3（plasma membrane Ca2＋-ATPase isoforms 1～3,PMCA1～3）在新生大鼠耳蜗基底膜（basilar membrane,BM）的表达,并检测PMCA2在单个新生大鼠耳蜗毛细胞纤毛的表达量。方法 1取出生后2天（P2）和8天（P8）健康SD大鼠各4只,断头后分离出BM,提取总蛋白,分别取20μg,通过Western blot法检测BM的PMCA1～3表达。2取P2和P8大鼠BM总蛋白3μg,通过Western blot方法检测BM的PMCA2的表达。3取4只P8大鼠,分离出BM,提取总蛋白,分别取5、10、20μg总蛋白并取100、400和800ng牛血清白蛋白（BSA）作为对照组,跑完电泳后将胶分为2部分,部分泳道用于SYPRO染胶,其余泳道用于Western blot检测PMCA2的表达。结果 1在20μg的P2和P8大鼠BM总蛋白中,PMCA1仅有微弱的表达（分别为0.126±0.024、0.131±0.012）,PMCA2表达水平较高（分别为4.16±0.528、4.25±0.319）,PMCA3几乎没有表达（均为0）,三者间差异有统计学意义（P〈0.05）。2在3μg的P2和P8大鼠BM总蛋白中,P8大鼠PMCA2的表达水平（4.571±0.336）高于P2大鼠（3.622±0.285）,差异有统计学意义（P〈0.05）。3PMCA2在单个P8大鼠BM的含量约为2.5ng。结论 PMCA1～3在新生大鼠耳蜗BM的表达水平不同,PMCA2表达量最大,这可能是由于耳蜗毛细胞对这几种PMCA亚型有不同的Ca2＋调节需求。

质膜钙ATP酶异构体1～4的剪接体在新生大鼠前庭器官的表达

目的研究质膜钙ATP酶异构体(plasma membrane Ca^(2+)-ATPase isoforms,PMCAs)1~4(PMCA1~4)的A端和C端剪接变异体在新生大鼠前庭器官的表达。方法取出生2天的健康SD大鼠10只,断头后分离出前庭器官(椭圆囊斑和球囊斑),提取总RNA,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测PMCA1~4的A端和C端剪接变异体的表达。结果在新生大鼠的椭圆囊斑和球囊斑PMCA1~4表达的剪接体分别为PMCA1x/b,PMCA2w/(a、b),PMCA3z/(a、b、c)和PMCA4(x、z)/b。结论在新生大鼠前庭器官,PMCA1、PMCA2、PMCA3和PMCA4之间表达的A端和C端剪接变异体类型均不同,这可能是由于椭圆囊斑和球囊斑对这些PMCA亚型有着不同的Ca2+调节需求。

肌浆网钙转运ATP酶和受磷蛋白在大鼠心肌梗死后的表达变化

目的建立大鼠急性心肌梗死模型,观察心肌梗死后心室重塑过程中肌浆网钙转运ATP酶(Ca-2+ATPase,SERCA)和受磷蛋白(PLB)的表达变化。方法雄性SD大鼠,应用前降支动脉结扎法建立大鼠心肌梗死模型,术后4周观察血流动力学参数,SERCA mRNA和PLB mRNA的表达。结果大鼠心肌梗死后4周,心肌梗死组左心室舒张末压(LVEDP)显著大于假手术组,左心室内压最大上升和下降速率(±dp/dtmax)显著低于假手术组。心肌梗死组心肌组织中SERCA mRNA表达下调,PLB mRNA表达上调。结论大鼠心肌梗死4周后心室收缩和舒张功能已降低,进入了心力衰竭阶段,SERCA mRNA和PLB mRNA的表达变化与心力衰竭的发生发展相关,可能是心肌梗死后心肌收缩和舒张功能失调的重要机制。

缬沙坦对心力衰竭家兔肌质网钙ATP酶表达及功能的影响

目的探讨家兔慢性心力衰竭时心肌肌质网钙ATP酶(SERCA2)表达和功能的改变及血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂缬沙坦长期干预的意义。方法 27只家兔随机分为3组,假手术组、心力衰竭组和缬沙坦组各9只。通过超容量负荷联合压力负荷建立家兔心力衰竭模型,于术后7周观察左心室结构、血流动力学的变化及SERCA2的表达和功能的改变。结果与假手术组比较,心力衰竭组左心室质量指数[(1.32±0.06)vs(3.61±0.09)g/kg]、左心室舒张末压[(-0.50±1.05)vs(23.00±2.37)mmHg)]显著升高(P<0.05),左心室短轴缩短率[(37.83±3.58)%vs(17.38±3.13)%]及左室射血分数[(72±5)%vs(38±6)%]明显降低(P<0.05);与心力衰竭组比较,缬沙坦组左心室质量指数和左心室舒张末压显著降低[(2.07±0.14)g/kg;(2.17±0.72)mmHg;P<0.05];左心室短轴缩短率及左室射血分数明显升高[(33.8±2.9)%;(65±4)%;P<0.05]。心力衰竭组SERCA2的表达[(0.69±0.04)vs(1.02±0.02)]和功能[(54.4±7.9)%vs(95.5±2.1)%]显著低于假手术组(P<0.05)。缬沙坦组SERCA2的表达和功能显著高于心力衰竭组[(0.91±0.02);(81.7±4.9)%;P<0.05]。结论缬沙坦长期干预,能够改善心力衰竭心脏舒缩功能,可能与增加SERCA2的表达和提高其功能有关。

肌浆网钙ATP酶过表达对心房颤动兔心房及L型钙通道a1c蛋白表达的影响

目的探讨心肌肌浆网钙ATP酶2a(SERCA2a)基因过表达,对兔急性心房颤动(AF)的心房肌L型电压依赖钙通道蛋白alc亚单位(LVDCCalc)表达的影响。方法 48只成年新西兰兔,随机分成为房颤组(AF组,n=12)、9-型腺相关病毒+增强型绿色荧光蛋白组+房颤组(rAAV9+EGFP+AF组,n=12)、9-型腺相关病毒+肌浆网钙ATP酶2a+增强型绿色荧光蛋白组+房颤组(rAAV9+SERCA2a+EGFP+AF组,n=12),并设假手术组作为对照(Control组,n=12)。rAAV9+EGFP+AF组和rAAV9+SERCA2a+EGFP+AF组起搏前30 d开胸心包腔内注射包含报告基因的rAAV9-EGFP和包含靶基因的rAAV9-SERCA2a-EGFP各500μL(1×1012v.g/μL)。转染30 d后,AF组、rAAV9+EGFP+AF组和rAAV9+SERCA2a+EGFP+AF组,以600 BPM刺激频率,持续起搏兔右心房24h制作AF模型。处死各组动物,倒置荧光显微镜下观察右心房肌组织EGFP表达情况,行HE染色对右心房组织形态检查,应用免疫组化技述检测SERCA2a蛋白及LVDCCalc蛋白在心房肌中的表达情况。结果 rAAV9+EGFP+SERCA2a+AF组SERCA2a蛋白及LVDCCalc蛋白表达量显著高于AF组和rAAV9+EGFP+AF组(P<0.05),但与对照组比较差异无显著性。结论心房肌转SERCA2a基因,显著减少了急性房颤心房肌的LVDCCa1c蛋白表达的降低,有逆转急性AF电重构的作用。

糖尿病减弱心肌组织肌浆网钙转运三磷酸腺苷酶的小泛素样修饰

目的:探索糖尿病是否可以通过心肌组织肌浆网钙转运三磷酸腺苷(ATP)酶(SERCA2a)的小泛素样修饰进而影响SERCA2a的活性与表达。方法:采用小动物超声和左心室压力测定评价2型糖尿病大鼠(糖尿病组)和对照大鼠(对照组)心肌收缩和舒张功能;比较糖尿病组大鼠和对照组大鼠心肌组织内SERCA2a的表达情况,用免疫共沉淀方法以及小泛素样修饰试剂盒比较糖尿病组大鼠和对照组大鼠心肌组织内SERCA2a小泛素样修饰程度。结果:和对照组大鼠比较:糖尿病组大鼠心肌收缩、舒张功能均下降,尤以舒张功能下降更为明显;糖尿病组大鼠心肌组织内SERCA2a蛋白水平、基因表达和小泛素样修饰程度均下降;小泛素样修饰E2(Ubc9)的蛋白水平在糖尿病大鼠心肌中也下降,而小泛素样蛋白1(SUMO1)和小泛素样修饰E1(SAE1和SAE2组成的二聚体)蛋白水平无明显变化。结论:SERCA2a小泛素样修饰程度和Ubc9蛋白水平在糖尿病心肌组织中下降,提示SERCA2a小泛素样修饰和Ubc9与糖尿病的心肌损伤密切相关。

质膜Ca^(2+)-ATP酶异构体2基因多态性与突发性耳聋的关系

目的探讨质膜Ca2+-ATP酶异构体2(PMCA2)基因的多态性与突发性耳聋的关系。方法采用分组研究的方法,对164名受检者进行调查和听力测试,按听力学评价的结果将其分为感音神经性听力损失的突发性耳聋组(n=82)和听力正常组(n=82);用PCR和等位基因特意扩增法检测PMCA2基因上rs2289274和rs6790640两个单核苷酸位点的多态性。结果在突发性耳聋组中,rs2289274位点基因型频率分别为AA 55.8%,AG 17.4%,GG 26.8%,等位基因频率A 64.5%和G35.5%。在听力正常组中,rs2289274位点基因型频率分别为AA 26.8%,AG 28.0%,GG 45.2%,等位基因频率A 41.1%和G58.9%。在突发性耳聋组中,rs6790640位点基因型频率分别为CC 18.3%,CT 35.4%,TT 46.3%,等位基因频率C 36.3%和T63.7%。在听力正常患者组中,rs6790640位点基因型频率分别为CC 2.4%,CT 63.4%,TT 34.1%,等位基因频率C 34.1%和G65.9%。两位点的基因型分布及其等位基因频率在突发性耳聋组和听力正常患者组之间部分差异有统计学意义(P<0.05)。结论PMCA2基因rs2289274和rs6790640两个单核苷酸位点的多态性可能是突发性耳聋的遗传易感性因素。

肌浆网钙ATP酶过表达对急性心房颤动兔心房有效不应期的影响

目的探讨肌浆网钙ATP酶2a(SERCA2a)基因过表达对急性心房颤动(AF)兔心房有效不应期(AERP)的影响。方法 40只成年健康新西兰大白兔随机分4组:正常对照组(control组,n=8)、房颤组(AF组,n=8)、绿色荧光蛋白+房颤组(EGFP+AF组,n=12)、肌浆网ATP酶2a+绿色荧光蛋白+房颤组(SER-CA2a+EGFP+AF组,n=12)。control组仅植入电极不起搏;AF组、EGFP+AF组和EGFP+SERCA2a+AF组采用快速心房起搏(频率600次/min)制作急性AF模型,后两组起搏前30d分别向心包腔内注射携带EGFP和SERCA2a+EGFP基因的rAAV载体。转染30d,荧光显微镜下观察心肌组织绿色荧光表达情况,观察起搏0、4、8、12、24hAERP的变化。结果 EGFP+AF组兔心肌冰冻切片在荧光显微镜下可见弥漫绿色荧光,起搏4h后AF组和EGFP+AF组AERP较control组显著缩短(P<0.05),随起搏时间延长呈进行性加重,AERP在AF组和EGFP+AF组间无明显差异(P>0.05),SERCA2a+EGFP+AF组自起搏12h后AERP较AF组和EGFP+AF组缩短程度减轻(P<0.05)。结论以rAAV9为载体介导SERCA2a基因转导可有效逆转快速心房起搏兔心房肌的电重构,是一种潜在的治疗AF的方法。

苹果果肉质膜微囊主动运输Ca^(2+)的Ca^(2+)ATP酶特性

应用４５Ｃａ２ ＋ 示踪法研究了苹果果肉质膜微囊依赖于Ｃａ２＋ 的ＡＴＰ 酶（Ｃａ２＋ＡＴＰ酶）活性与Ｃａ２＋ 运输之间的关系及激素对该酶活性的影响。结果表明：Ｃａ２ ＋ＡＴＰ 酶存在于质膜上并受载体Ａ２３１８７ 刺激而活性增加，该酶活性与依赖于ＡＴＰ 的Ｃａ２ ＋ 运输依抑制剂ＥＢ、游离Ｃａ２＋ 和ＡＴＰ浓度的变化并呈极为相似的饱和动力学特征；而其ＥＢ 半抑制浓度，Ｃａ２＋ 和ＡＴＰ 半饱和浓度分别为０ ．１ ，０ ．１ 和５０ μｍｏｌ／Ｌ，从而证实了正是Ｃａ２＋ＡＴＰ酶推动苹果果肉质膜微囊的Ｃａ２＋ 的主动运输。生长素与萘乙酸均可促进苹果果肉质膜微囊Ｃａ２＋ＡＴＰ酶活性和Ｃａ２＋ 吸收，而赤霉素则无此作用。

心肌肌浆网Ca^2＋-ATP酶过表达对慢性缺血性心力衰竭小型猪心功能的改善作用

目的研究心肌肌浆网Ca2+-ATP酶(SERCA2a)基因过表达对慢性缺血性心力衰竭(HF)小型猪心功能的改善作用。方法使用Ameroid缩窄环束扎小型猪前降支起始段,4周后行超声心动和血流动力学检查确认心功能下降,放免法测定血清炎性因子(TNF-α、IL-6)和神经体液因子(BNP、AngII、ET-1)的变化。将动物模型随机分为HF组、HF+EGFP组、HF+SERCA2a组,并设假手术组作为对照,每组各4只。HF+EGFP组和HF+SERCA2a组再次开胸,心肌组织内注射包含报告基因的rAAV1-EGFP和包含靶基因的rAAV1-SERCA2a各1ml(1×1012v.g/ml)。基因转导60d后,处死各组动物,行免疫组化和Western blotting检测SERCA2a在心肌中的表达情况;超声心动和血流动力学检测转导SERCA2a对心功能的影响,并用放免法检测上述炎性因子和神经体液因子的变化。结果成功建立小型猪慢性心肌缺血HF模型12只,Ameroid环植入4周后,超声心动和血流动力学数据提示模型组心脏舒缩功能显著下降(P<0.05),并伴有外周血上述炎性因子和神经体液因子的激活。基因转导后60d,SERCA2a蛋白在HF+SERCA2a组的表达量显著高于HF及HF+EGFP组(P<0.05),但与对照组比较无显著差异;其心功能参数LVEF、Ev/Av、±dp/dtmax较HF及HF+EGFP组显著增高(P<0.05),并伴随血清炎性因子和神经体液因子浓度的明显下降(P<0.05),提示心功能好转,心衰严重程度下降。结论过表达SERCA2a可改善慢性缺血性心力衰竭的心脏功能,可能成为慢性心肌缺血、心力衰竭治疗的潜在手段。

ATP2A2通过钙离子浓度变化参与肿瘤发生机制的研究进展

ATP2A2是ATP2As基因家族的成员,编码肌浆(内质)网钙转运ATP酶中的一种,即SERCA2b。由于该酶的主要功能为将钙离子从胞质转运至肌浆(内质)网内,因而它在控制肿瘤生长、分化、血管生成、转移和凋亡的钙离子相关信号通路中发挥着重要作用。近期研究已在一些类型的肿瘤中明确了ATP2A2表达水平的具体变化,在探究ATP2A2是如何参与肿瘤形成以及它是否可作为肿瘤标记物和治疗靶点方面迈出了第一步。本文对ATP2A2参与肿瘤发生的可能机制的相关研究进行了总结,认为其表达异常可引起细胞胞质内和内质网间钙离子稳态的破坏,从而造成细胞的恶性增殖并促进肿瘤的迁移和血管形成等。本文还对该基因的研究和应用前景进行了展望。

性激素对老龄大鼠颏舌肌细胞肌浆网Ca^(2+)-ATP酶活性及其基因表达的影响

目的:观察雌、雄激素对老龄大鼠颏舌肌细胞肌浆网(SR)Ca2+-ATP酶活性及其基因表达的影响,探索性激素影响上气道稳定性的机制。方法:将24只老龄雄性大鼠随机分为3组:老龄对照组、老龄雌激素组(肌注苯甲酸雌二醇,每次0.1mg/kg,每周2次,共4周)和老龄雄激素组(肌注丙酸睾酮,每次2.5mg/kg,每周2次,共4周)。采用定磷法检测颏舌肌SRCa2+-ATP酶活性,荧光定量RT-PCR测定SRCa2+-ATP酶mRNA表达的变化。结果:与对照组相比,老龄雌激素组颏舌肌SRCa2+-ATP酶活性[前者34.24±6.14μmolPi/(mgprotein·hour),后者38.39±8.49μmolPi/(mgprotein·hour)]及其mRNA表达水平(前者0.0297±0.0140,后者0.0314±0.0174)差异无统计学意义(P>0.05);老龄雄激素组SRCa2+-ATP酶活性[22.91±4.56μmolPi/(mgprotein·hour)]下降到对照组的67%(P<0.01),其mRNA表达水平(0.0172±0.0086)亦明显下降(P<0.05)。结论:雄激素可能通过降低颏舌肌SRCa2+-ATP酶活性、抑制其mRNA的表达而影响老龄大鼠颏舌肌的功能;而雌激素没有此项作用。

小肠上皮细胞钙转运机制研究进展

钙离子跨上皮细胞转运分为细胞旁途径和跨细胞途径。前者是经紧密连接顺电化学梯度进行；后者则需要借助上皮细胞顶膜上的钙离子通道蛋白TRPV6、胞浆钙结合蛋白CB、基底侧膜上的质膜钙ATP酶（PMCA）与钠一钙交换体（NCX）介导。1，25-二羟维生素D3、甲状旁腺激索（PTH）、降钙素（CT）等钙调激素对钙离子跨膜转运发挥调节作用。

香烟烟雾染毒对雄性大鼠睾丸组织ATP酶活性的影响

目的探讨香烟烟雾染毒对大鼠睾丸结构及睾丸组织ATP酶活性的影响。方法清洁级成年雄性SD大鼠70只,随机分为对照组(10只)和低、中、高剂量染毒组(每组20只,分别给予10支、20支、30支香烟烟雾暴露)。染毒组采用呼吸道静式染毒,每日1次,每次30 min,各剂量染毒组分别染毒6周和12周(每个时段10只大鼠)。实验期间记录各组大鼠体质量变化。实验结束后,摘取睾丸,HE染色观察睾丸组织结构,酶联免疫吸附试验检测睾丸组织Na+-K+-ATP酶、Ca^(2+)-ATP酶活性。结果随染毒剂量增加,各组大鼠体质量逐渐降低(P<0.05)。染毒组大鼠睾丸病理切片观察到不同程度损伤,且随着染毒时间的延长和染毒剂量的增加,损伤逐渐加重。染毒6周后,高剂量组大鼠睾丸组织Na+-K+-ATP酶活性低于其他3组(P<0.05),Ca^(2+)-ATP酶活性低于对照组(P<0.05)。染毒12周后,低、中、高剂量组大鼠睾丸组织Na+-K+-ATP酶、Ca^(2+)-ATP酶活性均较对照组显著降低(P<0.05)。结论香烟烟雾染毒可减缓雄性大鼠生长,导致睾丸组织损伤,Na+-K+-ATP酶和Ca^(2+)-ATP酶活性降低。

变链菌F-ATP酶β亚基基因的克隆与F-ATP酶活性分析

目的:分析变链菌F-ATP酶β亚基基因的克隆片段对转化后大肠杆菌的F-ATP酶活性的影响。方法:采用PCR方法,以变链菌基因组DNA为模板扩增F-ATP酶β亚基5′末端序列,将克隆片段与载体pVA891酶切后连接,形成重组质粒;并转化大肠杆菌,对转化后大肠杆菌的F-ATP酶活性进行初步分析。结果:变链菌F-ATP酶β亚基基因的克隆片段通过构建重组质粒转化进入大肠杆菌,转化后大肠杆菌的F-ATP酶活性与未转化的亲代菌株进行比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:本研究从基因的角度进一步论证了F-ATP酶β亚基基因对细菌F-ATP酶活性具有影响。

川芎嗪对大鼠缺血心肌细胞核钙转运异常的影响

目的 :观察大鼠缺血心肌细胞核钙转运功能的变化及川芎嗪的作用。方法 :将Wistar大鼠随机分成对照组、缺血组和川芎嗪保护组。采用皮下注射异丙肾上腺素 (ISP,5mg·kg- 1 ) ,2 4h后再注射相同剂量一次 ,造成心肌缺血模型。超速离心纯化细胞核 ,酶学法鉴定核纯度和测定核膜Ca2 + ATPase活性 ,同位素法观测核钙的摄取。结果 :缺血组心肌细胞核膜Ca2 + ATPase活性较对照组下降 2 1 .4% (P<0 .0 1 ) ,4 5Ca2 + 摄取率也呈显著性降低 ,其最大反应速度 (Vmax)降低 48.5 % ,细胞核膜Ca2 + 依赖性ATP酶的Vmax 降低 3 4.1 % ,Km 值降低 42 .2 % (P <0 .0 1 ) ,川芎嗪保护组心肌细胞核Ca2 + ATP酶活性及核4 5Ca2 + 摄取率较缺血组均有显著性升高 ,且有剂量依赖关系。结论