QuEChERS结合液相色谱质谱联用技术测定动物源性食品中N-二甲基亚硝胺

目的:建立高效液相色谱质谱联用技术定量检测动物源性食品中的N-二甲基亚硝胺。方法:样品前处理粉碎后经乙腈提取,低温离心除去油脂,QuEChERS净化,采用多反应监测模式测定。结果:N-二甲基亚硝胺校准曲线在2.0~200.0 ng·mL^(-1)线性关系良好,相关系数为0.998 5,方法检出限和定量限分别为0.5μg·kg^(-1)和3.0μg·kg^(-1),回收率为86.8%~90.8%,相对标准偏差在2.2%~3.1%。结论:该方法取样量少,试剂消耗量少,提取和净化流程简便,定性和定量准确度好,可用于检测动源性食品中N-二甲基亚硝胺。

质谱MRM技术在蛋白质组学研究中的应用

质谱多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)技术是一种基于已知信息或假定信息有针对性地获取数据,进行质谱信号采集的技术,具有灵敏、准确和特异等优点。在基于蛋白组学的生物标志物研究、蛋白质翻译后修饰、定量蛋白质组和蛋白质相互作用等研究领域的应用逐渐受到重视。该文概述了该技术在蛋白质组学研究中的应用特点及其最新应用进展。

质谱MRM技术结合稳定同位素标记法的应用进展

定量检测是生物化学研究中最常见的一种分析方法,可以显示蛋白质的差异表达及翻译后修饰情况,有助于了解酶的活性状态、信号通路及活性分子间相互作用网络。生物质谱以其高通量、高灵敏度、高分辨率等特点使定量检测技术有了质的飞跃,促进了蛋白质组学各个领域的发展。近年来出现的质谱多反应监测技术引起了众多研究者的关注,已被广泛应用在目标定量蛋白质组学研究中。通过查阅文献资料,综述了质谱多反应监测技术结合稳定同位素标记法在蛋白质组学研究中的应用原理及特点,总结了近年来的一些研究进展,最后分析了该技术的局限性及可能优化改进的方面,以便使该项技术能够被相关研究人员很好利用。

高分辨质谱和数据挖掘揭示污泥厌氧发酵过程溶解性有机物的反应特性

尽管厌氧发酵技术已经具有近百年的发展和应用历史,其仍是近年广受关注的低碳排放资源化技术之一。但厌氧发酵技术的效率低和生物反应过程易受抑制影响是限制该技术发展的主要瓶颈,其中,开发针对厌氧发酵生物反应过程的智能监测特别是非稳定运行状态下早期预警技术,是实现厌氧发酵技术升级和提升生物转化效率的重要方向。

超高效液相色谱/串联质谱分析生活饮用水中莠去津和灭草松

目的：建立超高效液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱快速测定生活饮用水中莠去津、灭草松的方法。方法：水样经WatersOasisHLB固相萃取净化，应用超高效液相色谱／电喷雾串联四极杆质谱仪多离子反应监测（MRM）定量法检测莠去津、灭草松，建立了定量检测生活饮用水中莠去津、灭草松的快速、准确、高灵敏度的方法。结果：经方法学验证。该方法对莠去津、灭草松的最低检出限LOD分别为0．08、0．8μg／L（进样量10μl），最低定量限LOQ分别是0．1、1．0μg/L。在1．0～100．0μg／L的线性范围中，相关系数r〉0．9999，回收率：87．6％～103．0％。结论：方法灵敏度高、操作简单、定量准确、测定浓度范围宽阔，是环境水质样品中莠去津、灭草松含量检测的理想方法。

Semi-LC/MS技术快速定量分析黄芪样品中黄芪甲苷含量

为了测定黄芪中的黄芪甲苷含量,应用半高效液相色谱-质谱串联技术(Semi-LC/MS),以薯蓣皂苷为内标化合物,仅用一段色谱保护柱分离掉大部分干扰性成分,同时使目标化合物富集,采用Waters公司的多反应监测(MRM)扫描模式检测。结果表明:黄芪甲苷在2.85～57.0mg/L的范围内线性关系良好,稳定性和重复性实验RSD<3%,样品回收率达98.9%。Semi-LC/MS方法可以对黄芪样品中黄芪甲苷进行快速定量分析,是一种黄芪甲苷的简单、高效、灵敏的定量检测方法。

超高效液相色谱/串联质谱分析生活饮用水中2,4-滴、2,4,6-三氯酚和五氯酚的方法研究

目的：建立检测生活饮用水中2,4-滴、2,4,6-三氯酚和五氯酚的超高效液相色谱/串联质谱法（UPLC-MS/MS）。方法：水样经高速离心,Waters ACQUITY UPLC BEHC181.0×50 mm柱分离,以纯水和乙腈为流动相,采用UPLC-ESI-MS/MS法,以负离子检测方式,多离子反应监测（MRM）定量法检测生活饮用水中2,4-滴、2,4,6-三氯酚和五氯酚。结果：经方法学验证,该方法对2,4-滴、2,4,6-三氯酚和五氯酚的最低检测限分别为0.5、3.0、1.0μg/L（进样量10μl）。在线性范围中,相关系数r均大于0.99,平均回收率分别在85%～115%之间。结论：方法快速、灵敏度高、操作简单、定量准确、测定浓度范围宽阔,是生活饮用水样品中2,4-滴、2,4,6-三氯酚和五氯酚含量快速检测的理想方法。对东莞市生活饮用水样品检测表明：此水体中2,4-滴、2,4,6-三氯酚和五氯酚的含量都低于检测限。

质谱多反应监测技术筛查先天性心脏畸形蛋白标志物的价值

目的探讨质谱多反应监测技术(multiple reaction monitoring-mass spectrometry,MRM-MS)对先天性心脏畸形(congenital heart diseases,CHD)蛋白标志物的筛查价值。方法 CHD胎儿孕妇30例为CHD组,正常胎儿孕妇20例为对照组,分别采用MRM-MS法及ELISA法检测2组血清LMNA、TPM4、MYH9、TLN1、APOC1、PF4V1、SAA4和HP蛋白表达水平,Pearson法分析ELISA法与MRM-MS定量检测结果的相关性,ROC曲线评估候选蛋白标志物诊断CHD的效能。结果MRM-MS定量检测CHD组血清LMNA[(0.18±0.16)fmol/mL]、TPM4[(0.94±0.46)fmol/mL]水平低于对照组[(0.30±0.19)、(1.56±0.88)fmol/mL](P<0.05),APOC1[(33.89±13.65)fmol/mL]高于对照组[(22.81±10.49)fmol/mL](P<0.05),MYH9、TLN1、PF4V1、HP、SAA4表达水平与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05);血清LMNA以0.14fmol/mL为最佳截断值,诊断CHD的AUC为0.800(95%CI:0.662~0.938,P<0.001),准确率为78.6%,灵敏度为100.0%,特异度为54.5%;血清TPM4以0.87fmol/mL为最佳截断值,诊断CHD的AUC为0.752(95%CI:0.601~0.904,P=0.001),准确率为73.8%,灵敏度为90.0%,特异度为54.6%;血清APOC1以22.8fmol/mL为最佳截断值,诊断CHD的AUC为0.777(95%CI:0.621~0.933,P<0.001),准确率为81.0%,灵敏度为80.0%,特异度为81.8%;LMNA、TPM4、APOC1分别以0.80、0.79、67.78fmol/mL为最佳截断值时,3种蛋白联合诊断CHD的准确率最高(88.1%),灵敏度为85.0%,特异度为90.9%;Pearson相关分析结果显示,MRM-MS定量与ELISA检测的LMNA、TPM4、APOC1蛋白水平均呈正相关(r=0.74,P=0.002;r=0.75,P=0.001;r=0.78,P=0.001)。结论 MRM-MS定量技术可获得LMNA、TPM4、APOC1 3种蛋白分子标志物,其联合诊断CHD具有较高的准确率。

超高效液相色谱-串联质谱法测定鸡肉中肌苷及其关联物

建立一种利用超高效液相色谱-串联质谱法检测鸡肉中5’-腺苷酸(5’-adenosine monophosphate,AMP)、5’-肌苷酸(5’-inosine monophosphate,IMP)、肌苷(inosine,I)、次黄嘌呤(hypoxanthine,Hx)的方法,并进行方法学考察。结果表明:优化后的方法为样品中加入体积分数3%高氯酸-10%甲醇水溶液后添加匀浆均质子涡旋,离心,调节提取液pH值为5.0后用PEIME HLB柱净化,采用SB-Aq色谱柱(3.0 mm×100 mm,1.8μm),流动相为体积分数0.1%甲酸水溶液-乙腈,梯度洗脱,流速0.3 mL/min,正离子多反应监测模式测定,外标法定量;经方法学考察,4种核苷类成分(AMP、IMP、I、Hx)线性关系良好,相关系数均大于0.996,加标回收率为79.63%~91.08%,相对标准偏差为1.0%~4.5%(n=6)。

液相色谱质谱法测定豆腐中74种抗生素残留

建立一种同时检测豆腐中74种抗生素的超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)高通量方法。豆腐样品采用Na2EDTA-Mcllvain缓冲液提取后,经亲水亲脂平衡固相萃取柱(PEP)净化,氮吹浓缩复溶后,以0.1%甲酸水和乙腈为流动相,C18柱分离,多反应离子监测(MRM)进行检测,基质工作曲线外标法定量。74种抗生素在0~100μg/kg范围内呈良好的线性关系,线性相关系数均大于0.999,回收率介于73.5%至115.0%之间,相对标准偏差小于15%。该方法快速简便,准确性好,高通量的方法能对豆腐中抗生素的情况进行更全面的监测分析。

超高效液相色谱-串联质谱法测定猪肉中氯霉素残留

为了采用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法测定猪肉中氯霉素(CAP)的残留,试验采用水提取均质后的猪肉样品中的CAP,提取液用C18固相萃取柱(SPE)净化后,采用UPLCMS/MS电喷雾电离(ESI),负离子,多反应监测(MRM)模式检测,基质添加外标法定量。结果表明:CAP检出限为0.04 ng/g,定量限为0.15 ng/g。在添加浓度为0.2~2.0 ng/g范围内,CAP的回收率为51.2%~63.1%,日内相对标准偏差和日间相对标准偏差分别为3.1%~9.8%、6.1%~9.5%。

固相萃取-气相色谱-串联质谱法测定大豆油中126种农药残留

建立了同时测定大豆油中126种农药残留的检测方法。样品经乙腈饱和的正己烷溶解并初次除油后用正己烷饱和的乙腈萃取,于-5℃、20 000 r/min下离心5 min,Captiva EMR-Lipid固相萃取柱净化,乙酸乙酯复溶后采用气相色谱-质谱联用仪(GC-MS/MS)多反应监测(MRM)模式检测,外标法定量。结果表明:在0.003~0.2 mg/L范围内,126种农药的质量浓度与其对应的峰面积间线性关系良好,R2均大于0.995,在0.005、0.01和0.05 mg/kg 3个添加水平下,126种农药的回收率在60%~119%之间,其中122种农药的RSD低于20%,另外4种农药的RSD低于25%。该方法能够有效除去大豆油中甘油及亲脂性干扰物,方法灵敏度、准确度和精密度均符合农药残留检测的要求,为监测大豆油中农药残留含量、有效防范健康风险提供了一种高效、可靠的分析手段。

超高效液相色谱-串联质谱法测定羊奶中5种阿维菌素类药物残留的研究

为了建立同时测定羊奶中5种阿维菌素类药物(avermectins, AVMs),包括阿维菌素(AVM)、伊维菌素(IVM)、多拉菌素(DOR)、埃玛菌素(EMM)、埃普利诺菌素(EPR)残留量的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法,试验采用乙腈提取羊奶样品中的AVMs,提取液用C_(18)固相萃取柱净化后经C_(18)色谱柱分离,采用电喷雾离子源正离子(ESI+)在多反应离子监测(MRM)模式下同时测定5种AVMs,并用基质标准曲线回归方程定量,考察所建立方法的准确度和精密度,评价5种AVMs在6批不同来源羊奶中的基质效应,同时应用建立的方法检测10批鲜羊奶样品中5种AVMs。结果表明:IVM和EMM在0.5~50μg/L范围内以及AVM、DOM和EPR在2~200μg/L范围内线性关系良好,相关系数均达到0.999 6以上;方法的检出限为0.2~1.0μg/kg,定量下限为0.5~2.0μg/kg。羊奶基质中IVM和EMM在0.5,2,5μg/kg加标水平以及AVM、DOM和EPR在2,8,20μg/kg加标水平下,5种AVMs的回收率在73.5%~108.0%范围内,批内和批间相对标准偏差均小于15.0%。5种AVMs的基质效应均控制在85.0%~115.0%之间,基质效应差异不明显。试验建立的超高效液相-串联质谱法对10批鲜羊奶样品的检测结果与秦皇岛出入境检验检疫局的检测结果一致,仅从1份样品中检出IVM残留量为13.4μg/kg,其他样品均未检出AVMs残留。说明试验建立的方法简单、稳定、可靠,可用于羊奶中AVMs残留的检测。

基于液质联用技术的环二核苷酸cGAMP定量检测方法的建立与评估

目的:建立基于液质联用技术的定量检测环鸟苷酸-腺苷酸(cGAMP)的方法体系,用于评价细胞内DNA感受器环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)的活性。方法:在人白血病单核细胞系U937中,以脂质体转染鲱鱼精DNA(HT-DNA)的方式诱导cGAMP合成,采用甲醇-乙腈萃取法提取细胞中的cGAMP分子,真空干燥后利用液相色谱-质谱多反应监测技术(LC-MS/MRM)对cGAMP进行定量检测。同时利用蛋白质免疫印迹法和实时荧光定量PCR体系对细胞中cGAMP产生后的常规生物学效应指标进行检测,以评价该方法的可靠性。结果与结论:建立的基于液质联用技术检测方法实现了对细胞中cGAMP分子的定量分析。该方法具有特异性好、灵敏度高的特点,为深入研究cGAS的活性调控机制提供了技术支撑。

超高效液相色谱-离子肼质谱联用法测定米粉中甲醛

建立了一种超高效液相色谱-离子肼质谱联用技术测定米粉中甲醛的方法。采用2,4-二硝基苯肼溶液作为衍生液,将甲醛衍生成甲醛-2,4-二硝基苯腙后,经C18柱分离,采用电喷雾离子源(ESI),多反应监测(MRM)→相关信息扫描(IDA)→增强子离子扫描(EPI)的联合扫描模式,建立甲醛标准对照品数据库,并通过谱库检索,将阳性可疑样品EPI谱图与标准谱库进行对比确证,可有效排除假阳性。在质量浓度为0.01-1μg/mL的范围内,方法的线性关系良好,相关系数r>0.995,检出限为0.05 mg/kg,平均回收率为91.7%,RSD为2.08%。该方法前处理简单、灵敏度高、专属性强,能准确地对样品中非法添加的甲醛进行定性和定量测定。

液相色谱——三重四极杆串联质谱联用法测定水中的草甘膦

建立液相色谱-三重四极杆串联质谱法快速检测生活饮用水中草甘膦(LC-MS/MS),方法:水样与9-芴基甲基三氯甲烷丙酮溶液进行衍生化反应,经过0.2μm滤膜过滤后,用多离子反应监测(MRM)定量法检测草甘膦,建立了定量法检测生活饮用水中草甘膦快速、准确、高灵敏度的方法。经方法学验证,该方法对草甘膦的最低检测质量浓度为0.015mg/L(进样量2μl)。在线性范围内(0～0.8mg/L),相关系数均大于0.999,平均回收率在92.2-104.8%之间。结论:方法定量准确,灵敏度高,测量浓度范围广,是生活饮用水中草甘膦含量准确检测的好方法。

多重反应监测(MRM):靶标蛋白质定量的新方法

多重反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)是针对靶标分子的一种质谱分析技术.该技术采用三重四级杆质谱仪,检测靶标分子的母离子和子离子的质谱响应信号,从而获取较灵敏和高重现性的定性和定量信息,近年来在蛋白质组学领域得到了广泛应用.与全谱性的蛋白质组学分析不同,MRM注重有限目标的蛋白质定量测定,因此,它在蛋白质分析检测领域中的应用极有发展潜力.在临床检验中,酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)是蛋白质定量分析的常规技术,但是ELISA在多重蛋白质生物标志物的测定方面具有一定限制.随着蛋白质组学的深入进行,MRM的定量分析优势可否应用于临床检测已提至日程,世界范围内多个研究团队一直致力于推动这一领域的发展,也取得了令人瞩目的成就.本文简单介绍了MRM技术的原理、优势及发展前景等,同时,对其在蛋白质组学研究及临床应用中的潜力进行了讨论.

复方丹参滴丸的体内代谢产物分析

目的快速分析复方丹参滴丸中原儿茶醛、原儿茶酸、丹参素3种成分在大鼠尿和粪中的代谢产物。方法大鼠灌胃给予复方丹参滴丸,收集12 h内的尿和粪,采用LC-MS/MS法,以多反应监测(MRM)和二级全扫描质谱(full scan MS2)方式,对大鼠尿和粪中复方丹参滴丸3种成分的代谢产物进行分析和鉴定。结果在大鼠尿中检测到2种原形和6种代谢物,在粪中检测到1种原形和1种代谢物。结论本方法简便、快速,适用于复方丹参滴丸体内代谢产物的分析。

基于特征肽段的阿胶中异源性物种鉴别

为鉴别阿胶中动物源性掺假物,结合鸟枪蛋白组学技术对不同物种的热稳定特征肽进行检测和鉴定。首先找到3种胶类药材(阿胶、新阿胶、黄明胶)的特征肽段,并发现3个物种中不含羟脯氨酸的热稳定特异性肽段在I型胶原蛋白α1序列中的相似位置。通过对胶原蛋白源物种特异肽段的序列特征的研究,推测了制胶过程中胶原蛋白的裂解规律。其次,获得了2条马皮特征肽,分别来源于马源角蛋白和未命名的马源蛋白,可用于鉴定阿胶中马皮胶。本研究不仅能够实现阿胶和异源性动物皮胶的鉴别,同时还可以为阿胶的真伪鉴别及其他物种胶原蛋白源特异肽段的发现提供技术支持。