基于质谱测定小分子与Aβ亲和力的受体结合分析方法的建立和验证

建立基于质谱的受体结合分析方法(MSBA),测定小分子探针与淀粉样蛋白-β(Aβ)聚集体的亲和力。针对阳性探针IMPY及其氘代产物IMPY-D6建立液相色谱-质谱(LC-MS)联用方法和定量方法,随后进行基于质谱的饱和结合实验及竞争结合实验,最后将结果与文献中放射性受体结合实验结果进行比较。成功建立了IMPY的LC-MS方法及基于质谱的受体结合测定方法。其中,饱和结合实验中IMPY与Aβ1-40及Aβ1-42的Kd分别为(3.80±0.39) nmol/L和(18.38±1.11) nmol/L。竞争结合实验中IMPY与Aβ1-40及Aβ1-42的Ki分别为(18.64±0.76) nmol/L和(25.44±2.38) nmol/L。均与文献中放射性受体结合实验结果基本一致。MSBA作为一种非放射性结合实验方法,测定结果与放射性受体结合实验基本一致,可用于小分子探针与Aβ的亲和力的测定,该技术平台可拓展至用于常规小分子配体与受体亲和力的测定。

受体-配体结合的质谱分析方法研究进展

目的阐述受体-配体结合分析是一种重要的药物筛选方法,它通过体外实验来考察配体(药物)与受体的结合能力,在药物结构设计与新药筛选中发挥重要作用。方法查阅近期国内外相关文献。结果与结论质谱结合分析(MS binding assay)是近年来备受关注的一种受体-配体结合分析方法,该方法建立在质谱分析非放射性标记的配体的基础上,操作方便,灵敏度高,特异性好,适用范围广,样品用量少,克服了传统受体-配体结合分析中放射性标记和荧光标记的缺陷,是质谱技术在药物发现中的又一个新贡献。

基于配体结合分析-液相色谱串联质谱技术的生物技术药物定量分析方法研究进展

随着生物技术的发展,蛋白多肽类药物日益增多,对此类药物的定量检测及药代动力学研究变得越来越重要。传统生物技术药物分析方法主要是以配体结合分析(ligand-binding assay,LBA)为主,而液相色谱串联质谱(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)技术由于兼具色谱的高分离能力和质谱的高选择性等优点,也已成为生物大分子药物定量分析的有力手段。综合上述2种方法的各自优势,LCMS/MS技术联用LBA技术进行样品前处理,不仅能降低背景的复杂性,还能避免交叉反应,可以大大提高方法的选择性和灵敏度。另外,使用肽水平的免疫捕获可进一步提高分析灵敏度。联合使用配体结合分析-液相色谱串联质谱(hybird LBA with LC-MS/MS,LBA-LC-MS/MS)技术的关键影响因素包括(:1)捕获试剂的亲和力;(2)酶切位点和效率;(3)指纹肽的选择;(4)内标的选择;(5)蛋白质和肽段的纯化;(6)色谱分离;(7)质谱条件的优化。本文综述了近年来研究蛋白多肽类药物药代动力学的各种分析方法,其中LC-MS/MS和毛细管电泳(capillary electrophoresis,CE)-MS联用技术可望成为药代动力学研究中较有前途的分析方法。