鸡贫血病病毒套式PCR检测方法的建立及应用

鸡贫血病病毒不仅引起鸡的传染性贫血 ,而且也是引起鸡免疫抑制病的主要病原。本研究首次在国内建立了鸡贫血病病毒的套式PCR检测方法。试验证明此方法具有高度的特异性和敏感性 ,以鸡马立克氏病毒、鸡网状内皮组织增生病毒、鸡传染性法氏囊病毒、正常MDCC_MSB1细胞DNA作为模板扩增时均未出现可见带 ,在检测鸡的各种组织病料时均未出现假阳性结果 ,该法比一次性PCR的敏感性高约 1 0 0 0倍 ,能检测到约一个拷贝的鸡贫血病病毒DNA ,而一次性PCR只能检测到3.6× 1 0 3 个拷贝。此方法已成功地应用于临床试验。对于鸡贫血病毒的许多鸡胚分离物和细胞分离物 ,一次性PCR不能扩增出可见电泳条带 ,而套式PCR都能扩增出特异的DNA片段 ,从而说明 ,套式PCR的敏感性大大高于一次性PCR 。

新城疫病毒HN基因与鸡贫血病病毒VP3基因对小鼠黑色素瘤的联合抑制效应

在 C57BL/6小鼠的左后肢肌肉注射脂质体包裹的含新城疫病毒 HN基因和鸡贫血病病毒 VP3基因的重组质粒。 2周后 ,在左后肢相同部位皮下接种 B16黑色素瘤细胞 2× 10 5个 ,致瘤 2、10 d后 ,分别肌注相同的重组质粒 .通过细胞毒 T淋巴细胞和自然杀伤细胞 (NK)以及小鼠血清中唾液酸含量的测定 ,探讨新城疫病毒抑瘤的机制以及新城疫病毒 HN基因与鸡贫血病病毒 VP3基因的协同抑瘤效应。结果表明 ,与对照组相比 ,注射含 HN基因和 VP3基因的重组质粒可使荷瘤鼠的肿瘤体积缩小。用新城疫病毒或含新城疫病毒 HN基因重组质粒治疗的荷瘤鼠 ,NK活性、CTL 活性明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,血清中唾液酸含量低于对照组 ,但差异均不显著 (P >0 .0 5 )。从而证明新城疫病毒 HN基因能够增强小鼠对移植瘤的免疫杀伤力 ,是新城疫病毒发挥抗肿瘤作用的主要功能性基因。

鸡传染性贫血病病毒与三种致家禽肿瘤病毒混合感染的流行病学研究

根据鸡传染性贫血病病毒(CIAV)、马立克氏病病毒(MDV)、网状内皮组织增生症病毒(REV)、禽白血病病毒(ALV)基因保守序列各设计1对特异性引物,采集102份发病家禽的肝脏、脾脏、胸腺和法氏囊等病料,通过RT-PCR和PCR方法进行检测。结果显示:CIAV、MDV、REV、ALV单一感染检出率分别为23.5%(24/102)、4.9%(5/102)、1.0%(1/102)、8.8%(9/102);CIAV和MDV、CIAV和REV、CIAV和ALV、MDV和REV、MDV和ALV、REV和ALV二重感染率分别为2.0%(2/102)、4.9%(5/102)、10.8%(11/102)、2.0%(2/102)、2.0%(2/102)、1.0%(1/102);三重感染中CIAV、MDV和REV为0(0/102),CIAV、MDV和ALV为3.9%(4/102),CIAV、REV和ALV为7.9%(8/102),MDV、REV和ALV为1.0%(1/102);四重感染率为1.0%(1/102)。26份样品中四种病毒均未检出。CIAV阳性病料与阴性病料相对应的REV共感染率具有极显著差异(P<0.01),CIAV阳性病料与阴性病料相对应的ALV共感染率具有显著差异(0.01<P<0.05)。研究结果进一步丰富了四种病毒的流行病学数据。

卵黄抗体检测评估SPF鸡对鸡传染性贫血病病毒的感染状态研究

鸡传染性贫血病病毒（CIAV）是禽弱毒疫苗中常见外源病毒之一,选择未被CIAV污染的SPF鸡胚是生产合格疫苗的关键环节,疫苗生产企业通常通过检测SPF鸡血清中CIAV的抗体来评估CIAV感染状况,本研究以取样更为方便的卵黄抗体检测来评估SPF鸡群中CIAV感染状态。将40只SPF鸡于19周龄时人工接种CIAV,同时30只SPF鸡饲养于另一隔离环境内作为空白对照。23周龄时每只鸡分别采集种蛋和血清并一一对应,然后将卵黄分别进行1∶10、1∶20、1∶30稀释后与血清同时检测CIAV抗体,结果发现卵黄抗体1∶20倍稀释后判定结果与血清抗体吻合率最高。对70只SPF鸡从25~34周龄进行连续10周观察,结果显示卵黄抗体检测结果与血清抗体检测结果吻合率达91.57%。建议疫苗生产企业可通过抽检卵黄抗体来判断SPF鸡群的CIAV洁净度。

鸡贫血病病毒VP_2基因在大肠杆菌中的表达及其特性

将鸡贫血病病毒 (chicken anaem ia virus,CAV) VP2 基因克隆入表达性载体 p GEX- 5 X- 3,在大肠杆菌以谷胱甘肽转移酶 (GST)融合蛋白的形式获得了表达。以此表达产物免疫小鼠 ,制备抗 CAV VP2 的多克隆抗体。通过对 CAV感染的 MSB1细胞作间接免疫荧光试验 (IFA)检测 ,结果为阳性 ,这表明表达产物保留了 CAV相关的抗原特性。本研究为进一步探索 CAV VP2 的生物学特性奠定了基础。

鸡传染性贫血病病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

根据鸡传染性贫血病病毒(chicken infectious anemia virus,CAV)基因组保守区域设计1对特异性引物和探针,通过优化反应条件,建立了一种快速检测CAV的TaqMan实时荧光定量PCR方法,同时验证其特异性、灵敏性和重复性。本试验建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法灵敏度可达1.8×101拷贝/μL,远高于常规PCR方法;并与禽类其他病毒性疾病无交叉反应,具有高特异性。用分离的病毒人工感染1日龄SPF雏鸡,14日龄剖检,对感染鸡体内各器官的病毒分布及载量进行检测,结果表明,在脑、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胸腺、法氏囊和血清中均可检测到病毒,肝脏、胸腺病毒载量明显高于其他组织。本研究建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可同时检测大量临床样品,适用于CAV的诊断与流行病学分析。

我国部分地区鸡贫血病病毒全基因组核苷酸序列的比较与分析

本研究测定了3个鸡贫血病病毒(Chinken anemia virus,CAV)国内分离株及12个直接来源于临床样品的CAV毒株全基因组序列,结果表明15个CAV毒株的全基因组长度和结构与已报道的其它CAV毒株一致,长度均为2298nt,包含有3个重叠的ORFs。与GenBank发表的13个毒株序列进行序列比较发现,所有毒株核苷酸序列的相似性在95.2%～99.5%之间,CAV全基因组序列有2个高度变异区(HVR),分别位于1033nt～1470nt和1858nt～2193nt。CAVORF3变异度最高,其5'端2/5处和3'端2/5～1/5处为2个高度变异区。ORF2变异度也较高,主要出现在5'端1/4处,ORF1最为保守。以CAV全基因组核苷酸序列和ORF3核苷酸序列为基础分别构建的CAV毒株分子进化树,均可以将全部CAV毒株划分为2个基因群。我国部分地区分离的大多数毒株,属基因Ⅰ群,与德国Cux-1等主要流行毒株有较为相近的亲缘关系;其它CAV国内毒株,属基因Ⅱ群,与日本G6株和TR20株有着更为相近的关系。

鸡贫血病病毒长春株VP3基因的克隆及序列分析

采用 PCR扩增方法成功克隆了鸡贫血病病毒 (CAV)长春分离株的 VP3基因 ,并进行了核苷酸序列测定。通过与 TK5 80 3、SJ1株进行序列比较 ,发现长春分离株 VP3基因与 TK5 80 3仅有 1个碱基差异 ,而氨基酸序列完全相同 ;与山东 SJ1株有 3个碱基差异和

鸡传染性贫血病病毒在MDCC-MSB1细胞的传代致弱研究

为研究鸡传染性贫血病(Chicken infectious anemia,CIA)减毒活疫苗,试验将鸡传染性贫血病病毒(CIAV)在鸡淋巴细胞MDCC-MSB1上进行37℃和40℃传代致弱。结果显示:40℃条件下传至60代和37℃下传至90代,病毒的VP1氨基酸分别有2个和3个突变,两种条件下有2个突变是在同一位置;VP2和VP3很稳定,在试验中未发生氨基酸突变;致病性试验发现,突变毒株仍具有致病性,但有降低的趋势。试验表明,鸡淋巴细胞传代CIAV可以引发包含中和抗原表位的VP1突变,且提高温度能促进变异速度,为进一步研究CIAV的变异特征、弱毒疫苗研发提供了参考依据。

鸡贫血病病毒的免疫电镜检测

鸡贫血病病毒的免疫电镜检测常国权，杨盛华（长春农牧大学军事兽医研究所）先前被称为鸡贫血因子的鸡贫血病病毒（ＣＡＶ）最初是由Ｙｕａｓａ（１９７９）在日本分离发现的，现已证实其广泛分布于世界各地鸡群中。ＣＡＶ可引起雏鸡的再生障碍性贫血、各类血细胞减少以及...

我国部分地区黄羽肉鸡群鸡传染性贫血病病毒的流行病学调查及致病性分析

为调查鸡传染性贫血病病毒(CIAV)在我国黄羽肉鸡群中的流行情况及毒株致病性情况,于2021年1—8月对山东、江苏、广东、安徽等10个省市417个黄羽肉鸡群CIAV感染情况进行了调查,每个鸡群采集5只病弱鸡肝脏样品,混合后进行PCR检测;同时对一CIAV阳性种鸡群进行了解剖和病理学诊断,并进行了CIAV分离、测序和致病性分析。结果显示:417个鸡群中CIAV阳性群181个,阳性群占比为43.41%;疑似发病种鸡表现冠、面部皮肤苍白,血液吉姆萨染色可见幼稚型红细胞,剖检和病理学诊断均可见骨髓脂肪化;全基因组测序显示分离株具有高致病性毒株的分子特征,与NCBI已发表的其他毒株进行遗传进化分析,结果显示与亚洲CIAV遗传关系相近;1日龄SPF鸡经肌肉注射途径接种分离病毒,接种鸡出现明显的胸部皮炎、骨髓脂肪化等发病症状,死亡率达87.5%,表明分离的CIAV野毒株具有较强致病性。研究结果为当前CIAV研究和疾病的防控提供了参考数据。

羽毛在传播鸡贫血病病毒中具有重要作用

以色列Kimron兽医研究所针对鸡贫血病病毒（CAV）的传播途径进行了研究。为了确定水平传播的途径，他们对羽毛在其中的作用进行了研究。研究显示，可以从感染鸡只的羽轴样品中扩增出CAV DNA。通过对比羽轴和淋巴器官的扩增情况发现，来自羽轴的DNA是检测CAV的有效方式。并且，为了进一步确证CAV是否通过血液或者内部方式到达羽轴从而导致组织病理变化，对羽囊组织进行了CAV导致的损失检查。他们发现有特异的组织学变化，但是免疫组化方法无法检测到病毒蛋白。

鸡贫血病毒SJ1株DNA的分子克隆

通过ＰＣＲ方法扩增，用ｐＵＣ１１９和ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ质粒载体分段克隆了山东省分离的ＳＪ１株的全病毒ＤＮＡ。

鸡贫血病毒广州株VP3和VP1基因的克隆与序列分析

采用PCR方法成功克隆了3株鸡贫血病病毒（CAr）广州株VP3和VPl的部分基因，并进行了核苷酸序列测定。序列分析表明，3株CAV广州株与国内外其他21株CAV毒株的核苷酸序列相似性在89．5％-100．0％之间；推导氨基酸序列的相似性在84．8％-98．2％之间。系统发育进化树分析显示，3株CAV广州株和中国TJBD40、SD22、SD24株都同处于一个分支上，而与马来西亚的SMSC-1株、日本的G6株以及澳大利亚的CAU269／7株的亲缘关系较远。

鸡传染性贫血病毒套式PCR检测方法的建立

本试验根据GenBank中登录的禽传染性贫血病毒(CAV)基因序列,设计合成2对引物,外引物的扩增片段大小为485bp,内引物的扩增片段大小为297bp,建立了适合CAV快速检测的套式PCR方法(nested PCR),并采用该方法对CAV阳性毒株及临床病料进行了检测。结果显示,该方法能扩增到297bp的条带,禽流感病毒(H9亚型)、新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、禽网状内皮增生病病毒、减蛋综合征病毒、禽呼肠孤病毒、马立克氏病病毒的扩增结果均为阴性。该方法第1步扩增的敏感性是100pg,第2步PCR扩增的敏感性是1fg,敏感性提高了105倍。本研究建立的CAV套式PCR方法具有敏感性高、重复性好、特异性强等优点,可用于CAV的临床诊断和分子流行病学调查等。

鸡贫血病病毒VP1基因的克隆分析

目的:探讨鸡贫血病病毒VP1基因的克隆方法与效果。方法:从组织病料中提取鸡贫血病病毒核酸,根据GenBank上发表的序列设计两对引物,扩增基因片段,然后分别将其克隆到原核表达栽体pMXB10上,经PCR和酶切鉴定。结果:PCR产物经琼脂糖凝胶电泳分析,分别在690BP和790bp有特异性产物出现。对重组质粒PMXB10VP1A和PMXB10VP1B进行酶切鉴定,与预期结果相同。结论:鸡贫血病病毒VP1基因的克隆成功有效。

马传染性贫血病的诊断与防治

简称马传贫（EIA），由反录病毒科（Retroviri—dae）慢病毒亚科（Lentivirinae）中的马传染性贫血病病毒引起，马、骡、驴常染有此类传染病。其特征主要为间歇性发烧、消瘦、进行性衰弱、贫血、出血和浮肿，在无烧期间则症状逐渐减轻或暂时消失。本病仅能感染马属动物（马、骡、驴）。在自然条件下，以马的易感性最高，骡、驴次之。