鸡贮精腺差异表达基因的研究

用mRNA差异显示技术对鸡贮精腺中基因的差异表达进行研究,分离并筛选出1个差异表达片段SST01,经测序和BLAST分析,发现SST01与鸡2号染色体上的neurexophilin基因高度同源(98%)。Neurex-ophilin是一种只在神经细胞中分泌的糖蛋白,说明神经系统参与贮精腺内精子的贮存或释放。Neurexophilin作为精液素的配体发挥功能,而精液素使细胞粘连,从而说明neurexophilin参与精子在贮精腺内的贮存过程。

金丝雀输卵管内贮精腺体的组织学及组织化学的研究

本文对产蛋期金丝雀（Ｓｅｒｉｎｕｓｃａｎａｒｉａ）输卵管内的贮精腺体进行了组织学和组织化学观察。结果表明，贮精腺体分布于子宫－阴道交接处阴道一侧长度为０．２１±０．０７ｃｍ区域（以下简称ＵＶ区域）内的固有膜中。该腺体为管状腺，少数具有分枝，由单层柱状上皮细胞构成。腺细胞顶部无纤毛，细胞核排列整齐，位于细胞的基部。贮精腺体呈ＰＡＳ阳性，糖原及酸性粘多糖的含量极微或未能检出。脂类含量较为丰富。酸性磷酸酶活性很高，不含碱性磷酸酶。在组织学及组织化学特征上，ＵＶ区域与毗邻的子宫及阴道区域存在明显差异，贮精腺体细胞与ＵＶ区域粘膜上皮细胞之间的差异也较为显著。

番鸭输卵管内贮精腺体超微结构的观察

本文研究了番鸭（Ｃａｉｒｉｎａｍｏｓｃｈａｔｏ）输卵管中贮精腺体（Ｓｐｅｒｍｓｔｏｒａｇｅｇｌａｎｄｓ，以下简称ＳＳＧ）的超微结构。结果显示，ＳＳＧ由无纤毛的单层柱状细胞组成，细胞游离面密集分布着形态较为均一的微绒毛，顶部侧面具典型的连接复合体结构。胞质内具发育完善的高尔基复合体，线粒体的数量较多，糖原则不明显。此外，在胞质内还出现了较多的聚集成束的纤丝状结构，在ＳＳＧ上皮下的基质中分布有大量的胶原纤维，但未发现与精子排放有关的收缩结构。腺腔内大部分精子与腺细胞没有密切联系，只有位于周边的精子与微绒毛顶部相接触。

番鸭输卵管内贮精腺体的组织学及组织化学的研究

运用微分干涉显微镜对番鸭（Ｃａｉｒｉｎａｍｏｓｃｈａｔｏ）输卵管内的贮精腺体进行活体观察，并结合组织学和组织化学方法较系统地研究了该腺体的分布、形态及组织化学等特征。结果显示，番鸭贮精腺体分布于子宫－阴道交接处约０．５ｃｍ范围内的固有膜内。腺体呈管状，少数具有分枝，由单层柱状上皮细胞构成，细胞顶部无纤毛，腺体开口呈圆形或狭缝状。腺腔内的精子常聚集于腺体的盲端。对贮精腺体的组织化学研究显示：酸性磷酸酶活性很高，含有脂类、胆固醇、缩醛磷脂、乳酸脱氢酶、琥珀酸脱氢酶及甾体脱氢酶，不含糖原。

贮精能力差异母鸡的贮精腺形态、激素水平及激素受体基因表达量的研究

旨在探究不同贮精能力母鸡的贮精腺形态、主要性激素水平以及激素受体基因表达量的差异,以期进一步揭示母鸡贮精能力差异产生的原因。本研究以27周龄158只的白来航母鸡和28只公鸡为试验材料,混精连续输精2 d,第3天开始按照个体收集种蛋孵化,根据输精后21 d内每天的种蛋受精情况统计个体受精率作为母鸡贮精能力;挑选高、低贮精能力极端个体各4只,分别为高、低贮精能力组;采血测定血清孕酮、雌激素、睾酮和催乳素激素浓度;解剖获取富含贮精腺的子宫阴道连接部组织,并沿纵向分为两份,一份制作石蜡切片并HE染色,用于贮精腺形态观察,另一份采用荧光定量PCR检测相应激素受体基因的表达量。结果表明,高、低贮精能力组子宫阴道连接部的黏膜面积、贮精腺数量、贮精腺密度均差异不显著(P>0.05),但高贮精能力组母鸡的贮精腺平均横截面积显著高于低贮精能力组(P<0.05);高贮精能力组母鸡的血清孕酮激素浓度显著高于低贮精能力组(P<0.05),雌激素、睾酮和催乳素激素浓度在组间均差异不显著(P>0.05);与低贮精能力组相比,高贮精能力组睾酮受体基因和催乳素受体基因表达上调,雌激素α、β受体基因和孕酮受体基因下调,但未达显著水平(P>0.05)。结果提示,母鸡的贮精能力可能与贮精腺横截面积有关,此外,孕酮激素可能对诱导贮精腺中精子的激活起重要作用,从而影响母鸡持续受精能力。

鸡贮精腺上皮细胞的分离及原代培养

试验旨在探讨稳定可靠的贮精腺上皮细胞分离及原代培养方法,为研究鸡贮精机理提供细胞模型。以鸡输卵管的子宫阴道交接部组织样为材料,采用酶消化法和组织块培养法分离培养母鸡贮精腺上皮细胞,观察母鸡贮精腺上皮细胞的培养情况,比较不同细胞培养方法获得贮精腺上皮细胞的生长情况。结果表明,用胶原酶或胰酶单独消化母鸡子宫阴道交接部组织,经100目过滤后获得的贮精腺上皮细胞24 h后可贴壁,但48～72 h后细胞死亡;用胶原酶Ⅺ(0.01 g/mL)与胰酶(0.25%)先后消化母鸡子宫阴道交接部组织后再经100目过滤获得的贮精腺上皮细胞贴壁性良好,24～48 h细胞出现明显增殖,72 h后细胞增殖速度减慢,开始死亡;用组织块培养法7 d可获得鸡贮精腺上皮原代细胞,该细胞可传2～3代;用组织块培养法获得的细胞进行免疫组化试验,发现细胞表达贮精腺差异表达基因编码的NXPH1蛋白,该蛋白在培养细胞内的表达符合其分泌蛋白特性,表明组织块培养法所获细胞可用于后续研究。综上,用组织块培养法获得的鸡贮精腺上皮细胞可为研究母鸡贮精腺机制提供细胞模型。

采用Percoll液纯化分离贮精腺细胞试验

以新扬州鸡为素材,用胶原酶/透明质酸酶和各梯度浓度的Percoll液的方法分离子宫阴道交接处(UVJ)的贮精腺细胞并进行细胞培养以达到细胞纯化的目的,旨在建立鸡贮精腺细胞纯化分离和培养技术,为进一步研究和分析贮精腺的构造和功能,以及调控机理的研究提供技术平台。结果表明:用胶原酶/透明质酸酶分离培养,消化45 min,100目过滤的贮精腺细胞用Percoll液原代培养至少存活120h,细胞的纯化效果很明显。

禽类贮精腺的研究进展

禽类贮精腺指存在输卵管的子宫阴道交接部能使精子长时间存活并保持受精能力的管状腺。本文综述了禽类和其他动物贮精腺组织结构和细胞组成的微观研究、禽类贮精腺分泌物的组成及其对贮精腺的贮精作用以及禽类贮精腺贮精机理的研究进展。

禽类贮精能力影响因素的研究进展

禽类输卵管的壳腺部和泄殖腔之间存在一种特殊的管状腺被称作贮精腺,能使禽类精子在输卵管内暂时存活的能力叫做贮精能力。在家禽生产中,高贮精能力的母禽可以降低人工授精的频率,减少对母禽的应激,减少种公禽的储备,节省人力劳动成本。该文主要从影响禽类贮精能力的直接因素、外界环境和遗传等方面对贮精能力的影响做以综述,以期为禽类贮精能力的提高研究提供思考。

母鸡持续受精能力的群体变异分析

旨在探究母鸡持续受精能力在品种间的差异和群体内的变异程度及相关性状之间的相关性,为制定合理的输精间隔和开展母鸡持续受精能力的选育提供理论依据。本研究以27周龄的白来航、哥伦比亚洛克、芦花和洛岛红4个品种健康的母鸡各158只为试验材料,连续输精2d,第3天开始按照母鸡个体收集种蛋孵化,统计输精后4周内的种蛋受精情况,比较各品种输精后产蛋数、日/周受精率、4周平均受精率、最长受精天数和最大连产受精蛋数等性状,并计算部分性状间的相关系数。结果显示,4个品种输精后日受精率随着天数的增加而降低,但程度不同,白来航、哥伦比亚洛克、芦花和洛岛红日受精率大于90%的输精后最大天数分别为10、9、8和11d。4个品种输精后前9d种蛋的日受精率除了第4天(P=0.01)外均无显著差异(P>0.05),第10~18天种蛋的日受精率除了第13(P=0.08)和16天(P=0.19)外均差异显著(P<0.05),第19~28天无显著差异(P>0.05);输精后品种间第1(P>0.05)和4周(P>0.05)的周受精率均无显著差异,第2(P=0.005)和3周(P=0.04)均差异显著;不同品种母鸡的产蛋数、4周受精蛋数、4周平均受精率、最长受精天数、最大连产受精蛋数、第1周受精蛋数、第2周受精蛋数、第3周受精蛋数和第2~3周受精蛋数均存在显著差异(P<0.05),其中洛岛红的各个指标均最高;品种内个体间上述性状也存在变异,其中洛岛红变异较小,哥伦比亚洛克和芦花变异较大;母鸡受精能力相关性状间均为正相关,其中第2周受精蛋数(r=0.86,P<0.0001)、第2~3周受精蛋数(r=0.92,P<0.0001)与4周受精蛋数相关系数较大。本研究结果表明,不同品种母鸡持续受精能力存在差异,可制定品种特异性输精间隔;品种内母鸡持续受精能力存在较大变异,具有进一步选育的基础;第2周受精蛋数可以在保证准确性的前提下减少性状测定的工作量,相较而言是评估和选育母鸡持续受精能力的理想性状。

蛋种鸡产蛋后期受精率降低因素分析

随着蛋种鸡产蛋高峰结束进入产蛋后期,种蛋受精率明显且持续降低。母鸡输卵管对精子筛选、贮存和释放能力、公鸡精子活力、本交条件下公鸡行为、身体状况等因素均会影响受精率。本文简要介绍了卵子受精过程、母鸡和公鸡周龄对受精效率的影响及建议、采取措施等,以期为现场生产中产蛋后期受精率的改善提供一定的参考和指导。

碳酸酐酶4基因在母鸡输卵管不同部位的差异表达分析

母鸡贮精腺位于输卵管的子宫阴道交接部和伞部,为探究鸡碳酸酐酶4基因在输卵管不同部位的表达情况,以探明该基因是否在母鸡贮精腺部位高表达,为进一步研究禽类贮精腺的贮精机理奠定基础。参考鸡CA IV基因序列,在其保守区设计特异性引物,并以鸡β-actin基因为内参基因建立荧光定量方法,基于荧光定量分析CA IV基因在鸡输卵管伞部、膨大部、峡部、子宫部、子宫阴道交接部和阴道部的表达。结果表明,子宫阴道交接部的CA IV基因表达量最高,伞部次之,在膨大部、峡部、子宫部和阴道部表达量较低。CA IV基因在子宫阴道交接部的表达量显著高于在伞部、膨大部、峡部、子宫部和阴道部的表达(P<0.05),在伞部的表达量显著高于膨大部、峡部、子宫部和阴道部的表达(P<0.05)。CA IV基因在母鸡输卵管子宫阴道交接部和伞部位的高表达预示着其参与贮精腺内的精子储存。

鸭

S834.1 980543应激对肉用种鸭繁殖性能的影响/姜小雨(四川省畜牧兽医研究所)//四川畜牧兽医.-1997,(1).-22～24S834.2 980544用牛的小卫星探针 BM6.21A 进行鸭的 DNA

鸡碳酸酐酶4基因在毕赤酵母中的表达

[目的]通过毕赤酵母的表达获得鸡碳酸酐酶4(CAⅣ)蛋白。[方法]根据鸡CAⅣ的序列,结合毕赤酵母密码子的偏好性,合成CAⅣ基因。将CAⅣ基因克隆到pPICZαA真核表达载体,获得重组表达质粒pPICZαA-CAⅣ。将其电转毕赤酵母GS115后,获得重组毕赤酵母菌GS115/pPICZαA-CAⅣ。用终浓度为1%的甲醇对重组阳性菌进行诱导表达,通过SDS-PAGE和Westernblot法检测蛋白的表达,并用Ni离子亲和层析法对表达出的蛋白进行纯化。[结果]成功构建了表达载体pPICZαA-CAⅣ,转化重组酵母菌后可分泌出36kDa左右的CAⅣ蛋白,并通过Ni离子亲和层析法获得了单一性的目的蛋白CAⅣ。[结论]获得分子量约36kDa的鸡CAⅣ蛋白。