人脐血贴壁层细胞对脐血造血细胞体外扩增的作用

实验于2004-10/2005-06在吉林省肿瘤防治研究所和吉林医药学院病原教研室完成。脐血采自长春市妇产医院健康产妇,知情同意,足月顺产,待胎儿娩出后,无菌经脐静脉穿刺取血,枸橼酸钠抗凝。Ficoll-paque淋巴细胞分层液(相对体积质量:1.077±0.22)密度梯度离心法分离出脐带血单个核细胞后,采用长期液体培养法培养脐带血贴壁层细胞,并与脐带血单个核细胞共同培养,观察细胞生长形态并通过流式细胞仪分析细胞周期。结果显示,脐带血贴壁层细胞与脐带血单个核细胞共培养7d后,与无贴壁层细胞培养的脐带血单个核细胞的细胞周期相比,贴壁层细胞能明显促进细胞的增殖,S+G2+M期细胞百分数明显增高,差异具有显著性意义[(42.7±1.1)%,(35.5±2.8)%,P<0.05]。脐血贴壁层细胞能促进脐血单个核细胞进入细胞周期,体外扩增后的脐血单个核细胞集落形成能力明显大于无贴壁细胞[(57.7±4.7)个/5×104,(40.3±5.1)个/5×104,P<0.01]。

脐血贴壁层细胞和骨髓基质细胞对脐血单个核细胞增殖能力的影响

目的:比较脐血贴壁层细胞和骨髓的基质细胞对脐血单个核细胞增殖能力的影响。方法:实验于2005-02/07在吉林省肿瘤防治研究所完成。①对象:正常足月顺产儿脐带由长春市妇产医院提供;肋骨取自吉林省肿瘤医院外科手术患者,排除血液疾患。产妇及外科手术患者对治疗及实验均签署知情同意书,实验经医院医学伦理委员会批准。②实验方法:采用红细胞裂解法制备有核细胞,以Ficoll-paque淋巴细胞分层液按密度梯度离心法分离出脐血单个核细胞,体外培养24h后去除悬浮细胞,收集脐血贴壁层细胞,加入到24孔板中,2×106L-1/孔,再加入含12.5%马血清、12.5%胎牛血清、1×10-7mol/L氢化考地松的IMDM培养体系1mL。将肋骨剪成3cm小块,冲洗髓腔收集细胞悬液,用淋巴细胞分层液分离出骨髓单个核细胞,同法进行骨髓基质细胞的培养。分别将两种细胞于37℃、体积分数为0.05的CO2条件下培养3周后,各自加入到24孔板,2×106L-1/孔,同时每孔再加入1×106L-1脐血单个核细胞,培养7d。以未添加脐血贴壁层细胞及骨髓基质细胞的脐血单个核细胞作为空白对照。③实验评估:倒置显微镜下观察脐血贴壁层细胞与骨髓基质细胞的生长状态。采用流式细胞仪测定脐血单个核细胞周期分布。甲基纤维素半固体培养法测定脐血单个核细胞混合集落形成单位情况。结果:①脐血贴壁层细胞与骨髓基质细胞的形态:培养2周时,多数脐血贴壁层细胞呈大小不等的圆形、椭圆形,少部分呈不规则形;骨髓基质细胞主要为梭形,细胞排列成漩涡状、辐射状或相互缠绕成束状。②细胞周期:与空白对照相比,经脐血贴壁层细胞、骨髓基质细胞干预的脐血单个核细胞S+G2+M期所占比例均显著升高(P<0.05)。③混合集落形成单位:经脐血贴壁层细胞、骨髓基质细胞干预后的脐血单个核细胞,其混合集落形成单位的数量显著高于空白对照(P<0.05)。结论:①脐血贴壁层细胞与骨髓基质细胞在形态上具有一定差异,但均能提高脐血单个核细胞体外增殖能力。②脐血贴壁层细胞可替代骨髓基质细胞作为脐血造血细胞体外扩增的辅助条件。

不同照射剂量对脐血贴壁层细胞功能的影响

目的了解不同剂量照射后,脐血贴壁层细胞的吞噬功能及肿瘤坏死因子(TNF)表达水平的变化。方法不同剂量60Co照射脐血贴壁层细胞,采用酶联法测定其吞噬功能及肿瘤坏死因子(TNF)表达。结果脐血贴壁层细胞在接受7.5 Gy 60Co照射后其吞噬功能最强,而肿瘤坏死因子(TNF)表达水平则在接受2.5 Gy^5.0 Gy 60Co照射时达高峰。结论脐血贴壁层细胞对照射抵抗力较强,可促进放疗患者机能恢复。

培养板单层贴壁细胞的原位计数方法

本文报道一种使用网格对培养板单层贴壁细胞进行原位计数的方法。自行设计和制作了培养板底贴膜网格和4单元方格目镜网格。培养板底贴膜网格用于细胞计数区的定位,用目镜网格计数细胞。目镜网格单元方格的平均细胞计数除以方格的面积,再乘培养孔底面积,计算出一个孔的细胞总数。比较实验和统计学分析证明了这一方法的准确度、精密度和线性范围,而且本方法简便易行、低耗实用。数码显微照相技术的结合应用进一步增强了本计数方法的适用性。

胎儿骨髓细胞长期培养贴壁细胞层凝集素受体的分布及变化

利用ABC法对胎儿骨髓细胞长期培养贴壁细胞层的6种凝集素受体的分布及动态变化进行定性分析。结果表明ConA和RCA受体分布于细胞外间质和全部贴壁细胞上。WGA可帮助识别巨噬细胞。UEA和PNA对某些原始造血细胞的识别值得进一步探讨。