培养基对MDCK细胞贴壁率的影响

为确定培养基种类对犬肾细胞(MDCK)贴壁率的影响,用DMEM、MEM、M199和RPMI1640四种培养基加10%新生牛血清后分别以10个/cm2的密度接种培养MDCK细胞,培养14 d计数每种培养基培养后形成的细胞集落数,并计算贴壁率。结果表明,四种培养基对MDCK细胞均能形成明显的细胞集落,贴壁率分别为78.56%、60.23%、41.13%和39.61%,以DMEM培养基培养MDCK的贴壁率最高。

不同浓度奶牛乳腺上皮细胞和奶牛脐带间充质干细胞共培养对细胞贴壁率的影响

为了研究在不同浓度下奶牛脐带间充质干细胞(UC-MSCs)和奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)共培养对细胞贴壁率的影响。本试验将P3代UC-MSCs与P3代BMECs按照浓度比例为1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、1∶10、1∶50、1∶100、1∶1 000、2∶1等不同比例随机混合培养,同时设立UC-MSCs与BMECs单纯培养组为对照组,并分别于0、24、48、72、96、120、144 h时观察各组细胞的形态变化,测定细胞贴壁率。结果表明:将UC-MSCs和BMECs按照不同浓度比混合共培养后,细胞生长状态良好,无抑制作用;共培养后细胞贴壁率与时间呈正比,其中1∶2浓度组细胞贴壁率最高,在72 h时贴壁率为93.8%,而UC-MSCs单纯培养组和BMECs单纯培养组在72 h时的贴壁率分别为78.1%和79.6%。通过试验得出结论,UC-MSCs和BMECs混合共培养能够提高细胞贴壁率。

正常肝上皮样细胞的体外培养与组织块贴壁率

采用组织块培养法培养的人胚胎肝上皮细胞,于培养后第3～9天即在贴壁组织块周围长出,并可在体外较长期进行培养;传至第8代时仍能分泌甲胎蛋白(AFP),含量为15～40ng/ml。组织块培养法不失为一种较为简单、实用、经济和有效的方法,为探索胚胎细胞体外培养方法提供了可供参考、借鉴的途径、本文还认为肝上皮样新生细胞长出与组织块贴壁率密切相关,并对影响组织块贴壁率的有关因素进行了讨论。

纤维蛋白粘合胶对人牙周膜细胞贴壁率的影响初探

目的：通过检测PDLCs在FG表面的贴壁率,间接的了解FG的生物相容性及其对PDLCs贴壁作用,为牙周治疗的应用提供依据。方法：通过对PDLC的原代培养,取第4-8代细胞用于实验,设立阴性对照组、对照组（e-PTFE膜）和实验组（FG组）,分别对3组进行细胞计数,记录下各时间段下的贴壁率。结果：FG组的PDLCs在4h就已达到最大贴壁率,而ePTFE膜组、阴性对照组则分别在10、12h才达到最大贴壁率。16~24h内,FG组的贴壁率均显著高于其它2组（P〈0.01）。结论：实验结果显示,FG是一种生物相容性良好、安全可靠的组织粘合剂,具有显著的促进PDLCs贴附的作用,并可能成为细胞支架,在牙周治疗中具备广阔的应用前景。

不同消化液对鸡胚成纤维细胞贴壁率的影响

细胞是培养和研究病毒及制造病毒疫苗的有效工具,细胞培养还广泛地应用于病毒的分离、鉴定,人工感染制成的弱毒疫苗和灭活疫苗以及筛选异源和同源的弱毒株都离不开细胞的培养工作。利用细胞培养技术已经生产出多种生物制品,随着病毒学等研究工作的发展，鸡胚成纤维细胞培养工作越来越受到重视，采用不同的消化液对长成单层的成纤维细胞进行消化，通过消化后细胞的贴壁率比较其优缺点，

微载体预处理方式对其灭菌温度及Vero细胞贴壁率的影响

目前,商品化的微载体多以干粉状态储存和销售,在细胞培养前需要先进行预处理,即用无Ca2+、Mg2+的磷酸盐缓冲液(phosphate-buffered saline,PBS)溶液对干粉微载体进行水合吸胀和洗涤,然后将水合吸胀后的微载体进行高压蒸汽灭菌处理,之后才能够用于细胞的培养.在这个过程中,可能会对微载体产生影响,从而影响细胞的贴壁和生长.作者将Cytodex1微载体用无Ca2+、Mg2+的PBS以50、25、16.7 g·L-13种水合吸胀质量浓度,每种浓度以720、2 400、6 000 mL 3种装量进行预处理.然后置于高压灭菌器中进行121℃高压蒸汽灭菌,观察其水合吸胀浓度及装量差异对灭菌温度造成的影响.灭菌完成后取样对微载体进行显微镜观察,然后将各组微载体样品用于Vero细胞的7 L生物反应器培养,12 h后记录各组的贴壁率.实验证明,对微载体进行预处理时,不同水合吸胀质量浓度和装量会对其灭菌时的升温速率造成影响.预处理时水合吸胀质量浓度不超过50 g·L-1,121℃以上灭菌时间不超过212 min,对Cytodex1微载体物理特性和Vero细胞的贴壁率没有影响(P>0.05).同时,在利用生物反应器培养Vero细胞时,除了考虑微载体的水合吸胀浓度和灭菌温度差异对细胞贴壁率的影响外,更重要的是预处理时不同水合吸胀浓度和装量所造成的灭菌温度差异是否能够满足无菌控制的要求.

纳米金/壳聚糖仿生功能支架对角质形成细胞贴壁及增殖的影响

背景:许多研究发现三维结构的纳米材料能促进细胞增殖。目的:构建一种新型纳米金/壳聚糖仿生功能支架,观察角质形成细胞在支架上的贴壁、增殖情况。设计、时间及地点:细胞观察性实验,于2006-05/2007-04在南通大学公共卫生学院进行。材料:1.0～2.0d龄SD大鼠由南通大学实验动物中心提供,壳聚糖(脱乙酰度>90%)由浙江省玉环县化工厂提供,氯金酸由上海试剂一厂提供。方法:用化学还原法制备纳米金胶,通过自组装技术将纳米金胶组装到壳聚糖膜表面,得到纳米金/壳聚糖膜仿生功能支架。将SD大鼠皮肤用2.5g/L胰酶消化得到角质形成细胞。将角质形成细胞分别接种在纳米金/壳聚糖仿生功能支架、壳聚糖膜、空白培养板上,计算培养6,12,24h后的贴壁率,用免疫组织化学和透射电子显微镜等手段对培养的角质形成细胞进行鉴定。主要观察指标:角质形成细胞在纳米金/壳聚糖膜上的的贴壁率;纳米金/壳聚糖膜上的角质形成细胞形态。结果:①6,12,24h角质形成细胞在纳米金/壳聚糖仿生功能支架上的贴壁率分别为25.52%,40.34%,58.72%,12,24h贴壁率明显高于其他两组。②免疫组织化学检测结果显示培养的细胞绝大部分为角质形成细胞。③透射电子显微镜观察可以看到角质形成细胞呈圆形,核大,异染色质较多,胞浆内富含线粒体,细胞活力强。结论:纳米金/壳聚糖仿生功能支架能显著提高角质形成细胞的贴壁、生长。

不同冷冻速率对鸡囊胚细胞冷冻效果的影响

为探究不同冷冻速率对鸡囊胚细胞冷冻效果的影响，使用胚胎冷冻仪分步冷冻，比较不同步骤中不同冷冻速率冷冻后，细胞二乙酸荧光素（FDA）染色活率（简称活率）和培养24h后细胞贴壁率（简称贴壁率）。结果表明：第1步冷冻，-0．7℃／rain组活率最高（0．846），但与-0．5℃和-1℃／min组差异不显著（P〉0．05）．-l℃／min组贴壁率最高（59．1％），且与各组间差异均极显著（P〈0．01）。第2步冷冻，投入液氮前不同温度，-75℃组活率最高（0．530），但与-35℃、-55℃组差异不显著（P〉0．05）；-35℃组贴壁率最高（36．6％），且与各组间差异极显著（P〈0．01）。因此，鸡BCs使用胚胎冷冻仪进行分步冷冻，以-1℃／min的速率降温至-7℃保持10min，继续以同样速率降温至一35℃投入液氮保存，解冻后不仅可以获得较好的活率，而且培养后可以获得较高的贴壁率。

提高猪囊胚后期贴壁能力的优化培养体系

为了提高猪孤雌囊胚贴壁率,试验从饲养层及培养液两方面研究猪孤雌囊胚贴壁能力;用小鼠、猪和牛的胎儿成纤维细胞制作饲养层,分别添加DMEM、NCSU-23、DMEM/NCSU-23培养液,探讨猪孤雌囊胚在3种饲养层上的发育效果。结果表明,BEF饲养层能更好地促进猪孤雌囊胚贴壁生长,其囊胚贴壁率为33.67%,与MEF饲养层组的囊胚贴壁率(19.08%)之间差异显著(P<0.05),与PEF饲养层组之间囊胚贴壁率差异不显著(P>0.05),MEF饲养层组和PEF饲养层组之间囊胚贴壁率差异不显著(P>0.05);在BEF牛胎儿成纤维细胞饲养层组,用猪胚胎培养液NCSU-23培养猪孤雌囊胚后,囊胚贴壁率(22.53%)显著高于DMEM培养液组(10.41%)和DMEM/NCSU-23培养液半量混合组(12.05%)(P<0.05),DMEM培养液组和DMEM/NCSU-23培养液半量混合组之间差异不显著(P>0.05)。牛胎儿成纤维细胞饲养层和猪胚胎培养液NCSU-23能更好地促进猪孤雌囊胚后期贴壁。

鼠胚胎成纤维细胞饲养层及与鼠尾胶联合促日本血吸虫培养细胞贴壁作用的研究

目的观察鼠胚胎成纤维细胞(MEF)与鼠尾胶及联合对日本血吸虫培养细胞的促贴壁作用。方法灌注法获取21 d虫龄的日本血吸虫虫体,冷消化法制备细胞悬液,调细胞数为1×109／L,并将细胞分别接种于预先铺敷鼠尾胶(鼠尾胶组)、MEF(MEF组)、铺敷鼠尾胶后接种MEF(联合组)和既不铺敷鼠尾胶也不接种MEF(对照组) 的4组培养瓶中培养,培养基为RPMI-1640含20％小牛血清附加常量抗生素。定时计数贴壁细胞数,计算贴壁率。结果随着培养时间从24-48 h,各组日本血吸虫细胞的贴壁率逐渐增高,48 h以后贴壁率开始下降;方差分析显示,同组内不同培养时间细胞贴壁率比较,差异有统计学意义(F=149．22、81．97、232．86、63．05,P<0．01);q检验发现,同组内不同培养时间两两比较差异有统计学意义(P<0．01)。相同培养时间,各组间培养细胞的贴壁率不都相同 (F24=44．65,P<0．01;F48=1 071．489,P<0．01;F72=4 208．35,P<0．01);q检验分析显示,除培养24 h的MEF组与鼠尾胶组细胞的贴壁率差异无统计学意义外(q=0．792,P>0．05),其余两两比较均有统计学意义(P<0．01)。结论 MEF对日本血吸虫培养细胞的贴壁具有促进作用,MEF与鼠尾胶联合对培养细胞的贴壁具有协同作用。

胰酶对皮肤角质细胞分离和传代的影响

考察不同的胰酶浓度及其作用时间对角质细胞分离和传代的影响。实验发现在胰酶浓度 0 2 5 %时作用5min可获得的总活细胞量和有克隆形成能力的细胞量均优于其它培养条件 ;而在胰酶浓度 0 0 5 %时作用 5min可获得最大的原代角质细胞贴壁率。随着胰酶浓度的提高 ,传代角质细胞的贴壁率和贴壁速率常数以及克隆形成率均随之增加 ,因此在传代培养时使用 0 2 5

人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞系的建立及其生物学特性

舌癌高发于东南亚,尤其是印度。在我国,据上海市区1963～1977年恶性肿瘤死亡统计,舌癌占口腔癌肿死亡率的26.4％;上海第二医学院附属第九人民医院口腔颌面外科,1957～1976年舌癌占口腔鳞癌住院病人的37.2％。口腔癌组织体外培养的研究,国外开展较早,Hela细胞株建立后1954年就有口底癌的KB细胞株和颊粘膜癌的HEp-3细胞株的建立;

毛脚鵟细胞体外培养体系建立及三种组织来源细胞特性分析

用组织块培养法对毛脚鵟不同组织进行原代培养,获得了3种不同组织来源的细胞,并成功对细胞进行了冷冻保存和复苏。在传代培养过程中,对比分析了3种组织来源细胞的形态学、生长曲线、贴壁率、核型等生物学特性。形态学方面,3种来源细胞均为成纤维样细胞。对于3种组织来源细胞的贴壁能力分析显示,输卵管源细胞最强,肺源细胞和气管源细胞次之。3种不同组织来源细胞的倍增时间分别为(29.91±0.39)、(33.18±0.21)和(30.67±0.28)h,群体倍增次数分别为3.54±0.01、4.52±0.02和4.38±0.03。毛脚鵟细胞的染色体数目为2n=68,性染色体为典型的ZW型。本实验为今后毛脚鵟细胞利用、遗传信息的保存及生物学特性的深入研究提供实验材料和依据。

荷斯坦奶牛耳组织成纤维细胞分离培养及冷冻保存方法研究

试验对荷斯坦奶牛耳组织成纤雏细胞的分离、体外培养及5种冷冻保存方法进行了研究。结果表明：用DMEM／F12＋20％胎牛血清＋100IU／mL双抗的完全培养液进行组织块培养，能获得良好的荷斯坦奶牛耳组织成纤维细胞原代培养物；成纤维细胞混合培养物经Trypsin-EDTA（0．25％Trypsin，1mmol／LEDTA．4Na）消化所收集到的细胞主要为成纤维细胞，经2—3代传代，可得到纯化的荷斯坦奶牛耳组织成纤维细胞。纯化培养的成纤维细胞在冷冻保护剂和血清成分相同的每件下，选用5种不同的冷冻保存方法进行冷冻保存，其中使用70％细胞悬液＋20％胎牛血清＋10％DMSO的冷冻保存悬液，先在4℃预冷平衡0.5h，接着在液氮罐口的气态氮中悬挂4h，然后沉入液氮的方法冻存的细胞，解冻后，经台盼蓝染色后进行细胞活力分析，活细胞率为86．68％；培养48h后细胞贴壁率为86．40％，明显高于其他几种方法。

Ⅰ型胶原修饰纯钛片促进人脂肪间充质干细胞增殖

背景:钛及钛合金在人工关节、骨折固定、口腔种植等临床领域应用最多,但在这些领域都存在骨量不足的复杂病例,干细胞研究的深入为骨缺损提供了促进新骨生成的解决方案,钛和干细胞的生物相容性以及钛表面改性优化等问题已引起重视。目的:观察Ⅰ型胶原修饰纯钛片后能否改善其与人脂肪间充质干细胞的生物相容性。方法:实验分为2组,修饰组用Ⅰ型胶原修饰纯钛片,未修饰组为未用Ⅰ型胶原修饰的纯钛片,分别将第6代人脂肪间充质干细胞种植于两组钛片上。分别计算细胞种植于两组钛片上1,2,4 h贴壁细胞的数量,比较两组细胞的黏附率。MTT比色法比较细胞种植于两组钛片上2,4,6,8 d细胞在钛片上的增殖情况。比较细胞种植于两组钛片上3,6,9 d细胞的DNA和蛋白含量。将人脂肪间充质干细胞分别接种于修饰组和未修饰组钛片,细胞种植于两组钛片上6 d时,电镜扫描观察细胞在两组钛片上的生长情况。结果与结论:修饰组的细胞黏附率在培养1,2 h时高于未修饰组(P<0.05)。MTT比色法显示,修饰组和未修饰组细胞的吸光度值均随培养时间延长而增高,培养第4,6,8天修饰组吸光度值较未修饰组明显升高(P<0.05)。培养第6,9天,修饰组的DNA和蛋白含量均高于未修饰组(P<0.05)。电镜扫描观察显示,培养第6天,修饰组在细胞贴壁数量、贴壁细胞基质分泌情况明显好于未修饰组。结果证实,Ⅰ型胶原修饰纯钛片的表面活性及生物相容性较好,可促进人脂肪间充质干细胞增殖。

兔骨髓间充质干细胞分离培养后的活力检测

背景:目前分离纯化骨髓间充质干细胞多采用单一的方法,对扩增培养过程中细胞活力的变化没有较为系统而全面的评估。目的:探索体外分离培养和纯化兔骨髓间充质干细胞的方法,并对细胞的活力进行检测。方法:采用密度梯度离心联合贴壁筛选的方法分离纯化兔骨髓间充质干细胞,从形态学、细胞表型和成骨成脂能力方面进行鉴定;并从细胞生长曲线、贴壁率和克隆形成率3个方面评估细胞活力。结果与结论:原代细胞多呈梭形和圆形,48h后大部分细胞贴壁,8-10d细胞融合达80%-90%,传代周期为3-5d;流式检测显示CD14、CD34和CD45表达阴性,CD29、CD44和CD90表达阳性;成骨诱导茜素红染色可见明显的钙结节,成脂诱导油红O染色可见大量脂肪细胞;细胞生长曲线、贴壁率及克隆形成率的结果表明第1代和第3代细胞的活力优于第5代细胞。结果说明密度梯度离心联合贴壁筛选的方法能够有效的分离纯化骨髓间充质干细胞,并能较好的保持其生物功能,在扩增传代过程中,细胞活力会有不同程度的下降。

骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性

背景:随着近年来对骨质疏松机制研究的深入,研究者逐渐把研究重点放在了成骨细胞的来源骨髓间充质干细胞上。目的:对骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞进行分离和体外培养,观察骨质疏松模型大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性,分析骨质疏松的细胞病理学机制,以期为骨质疏松的防治提供一个有意义的药物靶标。方法:选用10月龄SD雌性大鼠去卵巢增龄3个月来复制骨质疏松模型,设假手术对照组。运用密度梯度离心法对两组大鼠骨髓间充质干细胞进行分离和体外培养,运用扫描电镜对培养的骨髓间充质干细胞进行形态学观察,并行生长曲线及贴壁率检测。结果与结论:骨质疏松大鼠的骨髓间充质干细胞增殖能力明显下降,与对照大鼠相比存在许多结构特征的差异。体外实验结果表明,骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞的体外增殖能力下降可能是骨质疏松的细胞病理学机制。

兔骨髓基质干细胞的分离生长及冻存技术研究

目的:建立兔骨髓基质干细胞(MSC)体外分离、培养、增殖、冻存的方法,以及探讨其生物学特性。方法:抽取兔髂骨及胫骨的骨髓液,采用密度梯度离心法结合贴壁培养法分离纯化出MSC,并增殖。观察MSC的生长特性,测定其贴壁率及第3、8、13、18代的生长曲线,并评价其生物学特性。MSC在12.5%DMSO条件下经液氮或-60℃冻存复苏,测其成活率。结果:MSC为贴壁生长,以均一的梭形的成纤维细胞样生长,贴壁及增殖能力强,所测各代的生长曲线呈相似的S型,倍增时间约为35h。MSC需液氮保存,短期也可-60℃冰箱保存。结论:获得的兔MSC生长旺盛、增殖能力强,其分离、培养、纯化、增殖、冻存方法是可行的,可较长时间稳定地培养增殖、冻存,传代的MSC可保持其原代的生物学特性。MSC将是组织工程理想的种子细胞。

聚羟基丁酸/戊酸酯共聚物膜与人骨髓间充质干细胞的体外生物相容性

背景:聚羟基丁酸/戊酸酯共聚物是近年来受到重视的聚羟基脂肪酸族组织工程支架材料,具有免疫排斥反应低、生物相容性好和降解产物无毒副作用的优点。目的:观察聚羟基丁酸/戊酸酯共聚物膜材料与人骨髓间充质干细胞的体外生物相容性。方法:将第3代人骨髓间充质干细胞种植于聚羟基丁酸/戊酸酯共聚物膜上作为实验组,培养板单纯培养细胞作为对照组,计算1,2,4 h两组贴壁细胞的数量,得出细胞贴壁率。MTT比色法观察2,4,6,8 d两组细胞的增殖情况。采用Hoechst33258荧光法,检测3,6,9,12 d两组细胞内的DNA含量。将人骨髓间充质干细胞接种聚羟基丁酸/戊酸酯共聚物膜材料上5 d后,电镜扫描观察细胞在材料上的生长情况。结果与结论:共培养1 h时,实验组的细胞贴壁率低于对照组;其他时间段两组之间细胞贴壁率差异无显著意义。两组各时点间的细胞增殖差异无显著意义。两组各时间点细胞内DNA含量差异无显著意义。扫描电镜观察人骨髓间充质干细胞在聚羟基丁酸/戊酸酯共聚物膜上生长良好,形态呈梭形,细胞间连接紧密,分泌较多细胞基质。证明聚羟基丁酸/戊酸酯共聚物膜材料与人骨髓间充质干细胞有良好的生物相容性。

预衬物对人脐带静脉内皮细胞在涤纶血管增生性改善的体外研究

实验采用体外细胞分离、培养、^3H-胸腺嘧啶核苷(^3H-TdR)掺入法、免疫组化、电子显徽镜等技术，研究以明胶、纤维结合素(FN)、血浆、白蛋白、止血灵为预衬物，对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)在涤纶(Dacron)人工血管腔面的增生性改善。提出在预衬物的筛选中，除细胞贴壁率指标外，对内皮细胞增生性的评估是另一重要指标。这直接反映了预衬物对贴壁细胞增生形成内皮细胞层的影响。结果显示预衬物对HUVEC的增生性和贴壁率改善并不平行。明胶、FN、血浆和止血灵对HUVEC的增生和贴壁均有明显的改善，白蛋白只能改善HUVEC的增生能力，而不能改善贴壁率。预衬物的联合应用对HUVEC的贴壁和增生也均有影响。以FN分别与明胶、止血灵、白蛋白、血浆及血浆和止血灵联合使用，均有改善细胞增生能力和提高细胞贴壁率的作用，但作用差别较大，以前四组最佳。