贵州马场东晋南朝墓出土簪钗探讨

本文对贵州平坝县马场镇16座东晋南朝墓出土的簪钗进行了分型研究,对M37、M50出土簪钗的组合进行了分析,推测其用于固定假发、辅助高髻造型。东晋南朝时期,簪钗的形制和使用在马场周边区域相对稳定并流行,体现了贵州本土文化的复兴,为研究东南地区文化与贵州本土文化的融合交流提供了难得的素材。

贵州马4个微卫星位点遗传多态性研究

用4个微卫星标记对20匹贵州马进行遗传多样性分析。结果表明在4个微卫星位点上存在遗传多态性,各位点平均有效等位基因数5.20、平均多态信息含量为0.745,平均杂合度0.825。表明贵州马保持了较为纯净的原始基因库。

紫云县贵州马传染性胸膜肺炎的流行与治疗

马传染性胸膜肺炎是高度传染、高死亡率的呼吸道疾病,但国内外缺乏相应的疫苗。2012—2013年间,贵州紫云县发生马传染性胸膜肺炎的爆发性流行,全县贵州马的发病率为1.12%,病死率为69.72%;死亡最多的是贵州紫云县懂桑村养殖的贵州矮马,发病率70.1%,死亡率59.8%,病死率85.3%,部分农户家的马匹全部死亡,属于急性传染性疫病。2014年懂桑村采用伊维菌素对全部贵州矮马进行整体预防,发病贵州矮马采用"血虫迪"和"附红二合一"进行治疗,发病率和死亡率分别降至22.2%和9.1%,有效地控制住了当地马传染性胸膜肺炎的持续蔓延。

贵州矮马血清蛋白的多态性研究

以西南马为对照,采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对31匹贵州矮马的转铁蛋白(TF)、白蛋白(Alb)、α1-B糖蛋白(AlB)3种血清蛋白进行了多态性研究。结果表明,AlB位点呈现单态,TF、Alb蛋白位点均表现出不同程度的多态性。Alb位点共发现6种蛋白型,对应3个等位基因,贵州矮马Alb位点的基因频率分别为A(0.2097)、B(0.5645)、C(0.2258);TF位点共发现8种蛋白型对应5个等位基因,贵州矮马TF位点的基因频率分别为A(0.0484)、B(0.5806)、C(0.1129)、D(0.1452)、E(0.1129)。Alb、TF位点的多态信息含量(PIC)和遗传杂合度均较大,说明贵州矮马的遗传多样性较高,具有较大的选育空间。但是贵州矮马在白蛋白及转铁蛋白位点的杂合度均低于西南马,说明在相对闭锁的环境中生存的贵州矮马,保持了较为纯净的原始基因库。贵州矮马的Alb和TF的个体识别率及累积非父排除率均较高,提示这两个蛋白的多态性可应用于贵州矮马的谱系鉴定和个体鉴别。

贵州矮马(Equus caballus)生长激素受体基因5个单核苷酸位点的多态性研究

旨在探究贵州矮马生长慢的根本原因,本研究采用PCR和基因克隆技术测定贵州矮马生长激素受体基因(GHR)外显子10的核苷酸序列;以伊犁马为对照,通过AS-PCR和SSCP方法研究贵州矮马群体中SNP位点的分布频率,应用群体遗传学和生物信息学方法分析基因型与体尺指标间的相关性。结果,从贵州矮马GHR外显子10中得到10个单倍型,包括10个SNPs位点,其中的5个引起氨基酸改变。与伊犁马相比,贵州矮马GHR基因1028位点的A等位基因占优势,对应较低的尻高和较粗的管围;1471位点的E等位基因在贵州矮马群体中分布较多,与胸围率较高相关;1697和1732两个位点的杂合型存在于最矮的雄性矮马(6岁)GHR基因中。1028位点引起的V343A位于UbE结构域中,1471、1697和1732位点引起的S491G、Y566C和R578G改变与GHR蛋白的磷酸化有关。这4个位点可能影响GHR的内化作用或通过磷酸化途径影响细胞内的信号传导效率。研究结果提示,贵州矮马GHR基因外显子10中的多态性变化可能影响贵州矮马的生长发育。

贵州矮马、西南马和伊犁马刺豚鼠信号蛋白基因的多态性

为了探索贵州矮马、西南马、伊犁马刺豚鼠信号蛋白(Agouti signaling protein,ASIP)基因与马品种毛色之间的关系,采用缺口PCR技术分析了141份贵州矮马、西南马、伊犁马的ASIP基因型,并进行克隆测序。结果表明,扩增出的793 bp和385 bp 2个片段为ASIP基因,793 bp片段中缺失一段11 bp的核苷酸,定义为a基因型,385 bp片段结构完整,定义为A基因型;3个马群体中A等位基因在骝毛中占优势;但aa基因型对应的毛色只有小部分为黑毛,绝大部分为栗毛、骝毛和复色毛,与已知的aa基因型决定黑毛的规律不相符,说明aa基因型可能不是中国马品种黑毛的决定基因型。

贵州矮马与伊犁马基因组的RAPD分析

应用RAPD技术对贵州矮马的遗传多样性进行研究,并与伊犁马进行比较。以120条RAPD引物对两个马品种的混合基因组DNA进行筛选,发现6条引物可产生多态性,并用其对84份样品进行扩增,共获得123条带,其中101条为多态性条带。研究结果表明,贵州矮马与伊犁马的Nei指数分别为0.3136和0.3098,两个品种间遗传分化系数为4.74%,说明贵州矮马的遗传变异较伊犁马小,贵州矮马与伊犁马品种间的基因交流很少;计算个体的遗传相似系数并建立了系统发育树,获得9个分支,其中3个分支中两种马的分布比例相近,其他分支由1个马品种独享占主导,第4、5、6支中两种马所占的比例相近,说明两个马品种拥有共同的祖先,在较早的时间分离后单独进化。

贵州矮马与伊犁马生长激素基因5’侧翼区的结构特征

为了摸索贵州矮马生长发育的调控机制,探明贵州矮马与伊犁马生长激素基因5’侧翼区的结构特征,以4～5龄的贵州矮马和7～8龄的新疆伊犁马为研究对象,采用直接测序法从两种马基因组中克隆了生长激素(GH)基因5’侧翼区的DNA序列,并进行生物信息学分析。结果表明:1)从基因组中克隆的711bp片段为GH基因5’侧翼区序列;2)两个马品种的GH基因5’侧翼区中都存在TATA box、CAATbox、GC box和Octamer位点等真核生物启动子结构;3)从伊犁马GH基因5’侧翼区中检测到1个位于30bp处的突变位点发生了G→C颠换,由此新增了1个转录因子upstream stimulatory factor(USF)结合位点;4)从贵州矮马和伊犁马GH基因的5’侧翼区序列中发现了MZF1、CdxA、Nkx-2、AML-1a和c-Myc等19种共58个转录因子的结合位点。结论:克隆的711bp基因序列中存在大量的转录调控元件。

紫云县贵州矮马资源评价

对贵州省紫云县境内现存的贵州矮马数量及分布进行了调查。全县12个乡镇中,贵州矮马存栏1 421匹,其中公马611匹,母马810匹;其毛色以骝毛和栗毛为主。雌雄矮马的体高、体长、胸围、头长和颈长没有明显差异,但雄性个体的管围明显较粗。雄性矮马的红细胞数量较多但体积较小,血小板和中间细胞数量较高,血清总胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇水平较雌性的低;雌性矮马妊娠时血小板数量和低密度脂蛋白水平代偿性下降,但中性粒细胞数量和CO2结合能力升高。雄性矮马与雌性矮马的使役能力没有明显差别。目前贵州矮马混养、无序买卖及疾病预防不足是其死亡率高、体高上升的重要原因。

贵州矮马鼠伤寒沙门氏菌的分离鉴定及其致病力研究

为了探究贵州矮马的腹泻病原,试验以腹泻粪样为材料进行病原菌的分离鉴定。经SS和XLD培养基筛选,得到1株菌株S6,经革兰氏染色、生理生化检验以及16SrRNA基因序列比对分析,S6菌株可在SS和XLD琼脂培养基表面生长,革兰氏染色呈阴性;生理生化检验结果与沙门氏菌的生化特性相符;16SrRNA基因序列与已知的鼠伤寒沙门氏菌ATCC 13311（登录号：NR_119108）的亲缘关系最近,序列同源性为99%。形态学和分子系统学分析表明,该菌株为鼠伤寒沙门氏菌。采用PCR方法从S6菌株基因组中得到侵袭蛋白A（invasion protein A,invA）基因,与已知基因序列有6～8bp不一致,编码的氨基酸发生了一个替换。通过改良寇氏法测定S6菌株对小鼠的半数致死量（LD50）为4.71×102 CFU,属于强致病力菌株。推测S6 invA基因的变异可能与菌株的毒力强弱有关。贵州矮马群体中沙门氏菌的检出率为57%。本研究提示贵州矮马的腹泻病原之一可能是强毒力的鼠伤寒沙门氏菌。

贵州矮马IGF-I启动子-529 CpG甲基化及个别核苷酸变异与贵州矮马矮小表型有关

胰岛素样生长因子(insulin-like growth factors,IGFs)和生长(激)素(growth hormone,GH)是动物机体主要的促生长因子,它们的表达水平直接决定成熟个体的高度。贵州矮马的体高明显低于伊犁马等大型马,但其原因尚不清楚。本研究从贵州矮马基因组DNA中克隆了GH和IGF-I基因5'-侧翼序列,分别为239 bp和817 bp,包括部分启动子结构;进而采用生物信息学、比较基因组学方法对比分析了贵州矮马与伊犁马两个基因5'-侧翼序列/启动子的转录因子结合位点及潜在甲基化位点(Cp G岛)分布。亚硫酸氢盐PCR测序法(bisulfite sequencing PCR,BSP)显示,两个马群的GH基因5'-侧翼区域(239 bp)内的6个Cp G位点均发生了甲基化,甲基化频率无明显差异。然而,在IGF-I基因5'-侧翼区的148 bp片段内含有4个Cp G位点中,贵州矮马的-529 bp处Cp G位点的甲基化程度明显高于伊犁马(P<0.01),且该甲基化位点处于基本启动子邻近3'端;此外,两个马群IGF-I基因5'-侧翼区的-561 bp处检测到T、C碱基改变,导致贵州矮马的顺式调控元件/转录因子结合位点较伊犁马少1个,有可能影响IGF-I基因的转录效率。血清IGF-I浓度测定揭示,贵州矮马血清IGF-I含量极显著低于伊犁马(P<0.01)。Spearman相关性结果显示,贵州矮马及伊犁马的IGF-Ⅰ基因甲基化频率与血清IGF-I浓度呈中度负相关(r=-0.468),提示IGF-Ⅰ基因甲基化抑制其编码蛋白质的表达。结果证明,IGF-I启动子高甲基化及某些核苷酸(碱基)序列变异可能是贵州矮马个体矮小的部分原因。

贵州矮马和西南马3种病毒性疫病的血清学分析

为探明2012—2013年贵州省紫云县马匹大量死亡的病因,为其科学防治提供参考,采用酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）方法对当地养殖的贵州矮马、西南马进行马传染性贫血病毒（Equine Infectious Anemia virus,EIAV）、马动脉炎病毒（Equine arteritis virus,EAV）和马疱疹病毒I型（Equine herpesvirus type-1,EHV-1）3种病毒的抗体水平检测,并与伊犁马进行比较。结果表明：3个马群中均未检测到EIAV抗体,EHV-1抗体阳性率达98.15%~100%;与伊犁马相比,贵州矮马和西南马EAV抗体的阳性率较高,分别为48.15%和19.35%,并与2个马群的血液理化指标存在一定相关性。紫云县贵州矮马和西南马存在较高比例的EAV感染,马驹和虚弱马匹感染EAV后死亡率较高,因此推测EAV可能是导致马匹死亡的原因之一。

贵州矮马SHOX基因的鉴定及其多态性研究

矮小同源盒基因(SHOX)突变是儿童身材矮小的重要原因。贵州矮马的体高和前膊长较小,但不清楚马基因组中是否有SHOX基因。本研究采用PCR和RT-PCR方法 ,从贵州矮马血液和心脏中克隆SHOX基因F1和F2片段;经测序研究贵州矮马SHOX基因的多态性。结果表明:从贵州矮马基因组中克隆到F1片段279 bp,从心脏总RNA逆转录得到F2片段216 bp,分别对应于人SHOX基因外显子2和外显子3区域;片段F2编码72个氨基酸,其中Ser16为磷酸化位点,且含有DNA结合结构域N端的45个氨基酸;片段F1对应于马参考基因组未定位的Scaffold 118中,推测马SHOX基因可能位于X染色体的短臂末端;从SHOX基因2个片段的序列中找到6个变异位点,但贵州矮马群体中各SNP位点的分布频率与伊犁马之间没有明显差异;矮马个体中存在SHOX基因的单核苷酸变异,可能参与骨的发育调节。本研究结果表明,马基因组中存在SHOX基因,且有转录活性,SHOX基因外显子2和3的序列保守,基因的变异可能参与个体的骨发育调节。

利用微卫星标记研究贵州矮马和伊犁马的遗传多样性

试验通过9个微卫星座位对贵州矮马和伊犁马2个品种共84匹马进行了遗传多样性检测,以8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离PCR扩增产物,并用银染法显色,计算各微卫星位点的等位基因频率、有效等位基因数(Ne)、杂合度(H)和多态信息含量(PIC)。结果表明,9个微卫星座位中COR059检出的变异最大,AHT040的变异最小;伊犁马的Ne、H和PIC的平均值高于贵州矮马;2个群体的平均遗传分化系数为0.041。说明2个品种都有丰富的遗传多样性,贵州矮马的基因较伊犁马更为纯合。

贵州瓮马铁路信号集成技术模式的探讨

铁路信号系统集成是目前我国铁路建设采用的通用建设管理模式。本文以贵州瓮马铁路为例,详细地论述了信号系统设备的集成思路,实现了各子系统、设备的技术接口完整、技术性能匹配、配置合理,达到整个系统能够在规定的条件下实现整体功能最优,发挥最佳的整体效益,为地方铁路实施集成化管理提供了很好的指导作用。

两个西南马种GHR基因第10外显子SSCP分析

通过PCR-SSCP检测10匹宁强矮马和12匹贵州马GHR基因第10外显子的多态性分析,结果表明,宁强矮马和贵州马GHR基因外显子10的第2和第4区域的保守性较高,基因多样性相对较低,第1和第3区的遗传变异较大,基因多样性水平较高。分析比较发现宁强矮马GHR基因外显子10的多态性比贵州马稍高,首次表明宁强矮马在GHR10上存在较大的遗传多态性。

3个马群感染马泰勒虫的分子病原学调查

试验采用显微镜观察、PCR和竞争性酶联免疫吸附试验（competitive enzyme-linked immunosorbentassay,cELISA）等方法对贵州矮马、西南马和伊犁马的马泰勒虫病的感染状况进行研究。结果显示,从32份新鲜的血液涂片中,观察到形态完整的马泰勒虫（Theileria equi）虫体,检出率12.5%。从贵州矮马、西南马及伊犁马3个马群血液总DNA中都检测到马泰勒虫的18SrRNA基因片段,与已知序列的同源性为97%～100%;相比之下,贵州矮马与伊犁马的阳性率相近,分别为76.62%和73.81%,西南马较低,仅为33.33%。另外,经cELISA检测,与伊犁马（31.71%）相比,贵州矮马和西南马血液中抗马泰勒虫抗体的阳性率较低,分别为24.68%和12.12%,并与两个马群的血液理化指标存在一定的联系：与中性细胞数量、γ-谷氨酰转移酶和肌酸激酶的含量呈弱正相关;与红细胞、白细胞、血小板、淋巴细胞数量及血红蛋白含量呈弱负相关。这些研究结果提示3个马群中均存在较高比例的马泰勒虫感染。

黑色素皮质激素受体1基因248位点多态性与中国马品种毛色的相关性分析

在欧洲马品种中,黑色素皮质激素受体1(melanocortin receptor 1,MC1R)基因第248位碱基有C/T多态性,纯合的T248位点决定欧洲马的栗毛色。针对MC1R基因的248位点设计了2对特异性引物,采用等位基因特异性PCR技术,研究3个中国马品种MC1R基因型与栗色毛之间的关系。经扩增获得两种DNA片段,克隆测序后证明,扩增片段确为MC1R基因,两种DNA片段序列在基因的248位点的确呈现C/T多态性,但检测126份贵州矮马、西南马和新疆伊犁马血液样本,全部为杂合基因型(Ee),其中包括栗毛、黑毛、骝毛3种单毛色及3种复毛色。这些研究结果提示,MC1R基因中248位点的多态性与国内3个马品种的栗色毛之间没有直接的相关性。

我国的优良马种

(1)蒙古马原产于蒙古草原,是一个古老的品种。数量很大,约占我国马匹总数的1/3以上,分布广。我国现有的马匹大部分多属于蒙古马系统。分布在华北、东北和西北各地。蒙古马体质粗壮结实,皮厚毛粗,鬃毛、尾毛密而长。体高125-135厘米,体重260-370公斤,平均经济换力为35-45公斤,两马拉1.5吨,日行40公里,为力、速兼备品种,毛色以骝毛、青色为主,褐色毛次之。在商品经济中,蒙古马占有重要地位。内蒙古自治区每年都有相当数量的耕马调出,也有一定数量的菜马调入市场。近年来马肉的产量逐年增加,有较大的发展潜力。(2)哈萨克马新疆维吾尔自治区是我国第二大产马区。哈萨克马主要分布在新疆北部伊犁哈萨克自治州境内。据史载。

贵州矮马体尺性状及血液理化指标分析

贵州矮马是贵州特有的珍贵遗传资源。本文主要以贵州省紫云县境内的贵州矮马为研究对象,测定贵州矮马的体尺和血液生理生化指标,结果表明,与当地的西南马相比,成年贵州矮马的体高、体长、胸围、头宽、背高、尻高、尻长、尻宽、前肢长、前膊长、前系长、体重等12项指标明显较低,体长率、胸围率、管围率明显较高,但管围、头长、颈长、前胸宽等指标差异不显著,说明贵州矮马体格较小,但颈部长,胸部和管部发育良好。血液理化指标中,贵州矮马的红细胞比容和血钙浓度明显高于西南马(P<0.05),低密度脂蛋白水平较低。说明贵州矮马血液的运氧能力和肌肉的收缩力较强。贵州矮马修长的颈部、较低的重心、有力的管部、发育良好的心肺功能及其运氧能力是其体态匀称、爬坡性能优良、驮载能力强的主要原因。