资冲颗粒体外上调人脐带静脉内皮细胞的VEGFR-2等8种基因转录水平的研究

目的研究一种中药专利药方资冲颗粒促进更年期妇女血管生成的机制。方法选用HUVEC细胞作为体外模型;制备资冲颗粒的大鼠含药血清:使用含药血清干预HUVEC;对干预后的细胞进行以下两方面检测:使用含药血清连续干预HUVEC 5 d,期间每天检测细胞形态、培养上清液中雌二醇(E2)水平变化和被干预的HUVEC的生长速率;使用含药血清干预3 d,而后用实时荧光定量PCR(Qpcr)检测8个血管生成相关基因的转录表达水平。结果资冲颗粒含药血清不明显改变HUVEC的细胞形态、培养上清液中的E2水平变化和HUVEC的生长速率;资冲颗粒含药血清明显上调了VEGFR-2、VEGFR-1、ANGPT-1、TIE-2和ER-1等基因的转录表达水平,同时明显下调VEGF-A基因的转录表达水平,而ER-2和ANGPT-2基因的转录表达水平无明显改变。结论研究初步阐明了资冲颗粒促进人血管生成的机制。

应用红外热成像系统评价资冲颗粒药物靶向性的研究

目的：应用红外热成像系统对资冲颗粒药物靶向性进行动态评价研究。方法：募集6名受试者,分别在其服药前0 min及服药后的30、70、100、130、160 min,采用红外热成像系统对每位受试者采集全身10~11幅热像图,完成共计36例次的扫描后,对双肾区、双侧卵巢区、下腹区、子宫膀胱区、督脉区、神阙区、足部区、心脏区、大脑区、眼底区共13个区位的热值进行数据分析。结果：（1）服用资冲颗粒后第30~70 min及第130~160 min,与生殖相关区位（双肾区、双卵巢区、下腹区、子宫膀胱区）热值及与阳气相关区位（督脉区、神阙区、足部区）热值均上升;（2）第100 min时心脏区、眼底区双侧热值差异值最低,第160 min时大脑区双侧热值差异值最低。结论：资冲颗粒除提高生殖相关区位代谢及提升全身阳气外,还可明显缓解心脏、大脑、眼底血供,提示资冲颗粒具有多系统、多环节、多靶点整体调节作用。

资冲颗粒对大鼠间充质干细胞生殖分化相关标记基因表达的影响

目的探讨资冲颗粒(熟地、菟丝子等)诱导大鼠间充质干细胞向生殖细胞分化相关基因表达的影响。方法制备大鼠含资冲颗粒血清及大鼠空白血清对大鼠间充质干细胞进行干预。显微镜观察细胞形态变化情况;实时荧光定量PCR测定干预后细胞内生殖分化相关Oct4、Stra8、Itga6、Itgb1、Scp3、Gdf9、Zp1、Zp3基因的表达;MTT法检测细胞增殖情况;运用统计软件分析两组数据。结果镜下观察72 h干预未发现含药血清和空白血清对细胞形态有明显影响;实时荧光定量PCR测定表明含药血清对Stra8、Scp3、Gdf9基因表达有显著影响(P<0.05),对其它基因表达的影响则不显著(P>0.05);MTT法显示5 d干预两组细胞增殖无差别(P>0.05)。结论资冲颗粒大鼠含药血清具有诱导大鼠间充质干细胞向生殖细胞方向分化的潜力。

接绪资冲颗粒对实验性自身免疫性甲状腺炎致卵巢储备功能下降小鼠肠道菌群的影响

目的:探讨接绪资冲颗粒对实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)导致的卵巢储备功能下降小鼠肠道菌群的影响。方法:30只性成熟昆明雌鼠随机分为对照组、模型组和接绪资冲颗粒组(ZCWS组),各10只。抗原免疫诱导配合高碘水喂养13周建立EAT导致的卵巢储备功能下降小鼠模型,对照组采用PBS皮下多点注射。于造模的7周开始,对照组与模型组予以0.9%氯化钠溶液灌胃(0.3 mL/d),ZCWS组采用0.64 g/mL的中药混悬液灌胃(0.3 mL/d),连续7周。采用HE染色进行甲状腺病理评分和各级卵泡计数,ELISA检测甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb),16S rDNA测序技术分析3组肠道菌群变化。结果:接绪资冲颗粒可改善甲状腺病理评分和卵巢储备(P<0.01),调节模型小鼠肠道菌群相对丰度:显著升高杆菌纲、乳杆菌(科、目、属)、Christensenellaceae_R-7_group、uncultured_bacterium_g_Christensenellaceae_R-7_group菌种相对丰度(P<0.05,P<0.01);显著降低厚壁菌纲、γ-变形菌纲、肠杆菌科、肠杆菌目、埃希氏杆菌属、escherichia_coli菌种、芽胞杆菌目、Prevotellaceae_NK3B31_group、Prevotellaceae UCG-001、bacteroides xylanisolvens菌种、Veillonella_parvula菌种相对丰度(P<0.05,P<0.01)。结论:接绪资冲颗粒可能通过调节肠道菌群改善EAT小鼠的卵巢储备功能。

资冲颗粒灌肠和灌胃对去势小鼠雌激素水平的影响

目的探讨资冲颗粒灌肠和灌胃对去势小鼠雌激素水平及其效应的影响。方法对去势小鼠采用灌肠和灌胃两种方法给予资冲颗粒,并与己烯雌酚、女金丹进行对照。对小鼠阴道细胞角化指数、子宫指数进行计算;对子宫组织形态学进行观察;采用酶免疫分析法测定血清雌二醇(E2)水平。结果资冲颗粒灌肠组、资冲颗粒灌胃组、己烯雌酚组、女金丹组作用相似,均可增加去势小鼠阴道细胞角化指数(P<0.01)、子宫指数(P<0.01),提高小鼠血清E2水平(P<0.05),增加小鼠子宫内膜厚度(P<0.05)。结论资冲颗粒直肠给药和灌胃给药均可提高去势小鼠雌激素水平和产生雌激素样效应。提示资冲颗粒促卵泡发育的作用可能与提高雌激素水平有关。

资冲颗粒含药血清对ανβ3、HLA-G、HOXA10、Fas/FasL、IDO在人早孕绒毛膜组织中表达的影响

目的:探讨资冲颗粒对体外人早孕绒毛膜组织ανβ3、HLA-G、HOXA10、Fas/Fas L和IDO基因表达的影响。方法:对体外培养的人早孕绒毛膜组织加入2%、5%、10%的鼠资冲颗粒含药血清培养24-72h。同时,在组织培养中加入孕酮作为阳性对照组而仅有基础培养基为空白组。采用Q-PCR技术检测ανβ3、HLA-G、HOXA10、Fas/Fas L和IDO m RNA的表达。采用特异ELISA试剂盒定量检测ανβ3和HLA-G的蛋白表达。结果:10%含药血清处理的绒毛膜组织的ανβ3、HLA-G、HOXA10、Fas/Fas L、IDO基因表达均显著高于阳性对照组及空白组(P<0.05)。10%含药血清处理的绒毛膜组织的ανβ3和HLA-G蛋白表达显著高于阳性对照组及空白组(P<0.05)。结论:资冲颗粒具有增加ανβ3、HLA-G、HOXA10、Fas/Fas L和IDO基因表达的作用,可能是该中药复方治疗不孕症分子生物学机制之一。

资冲颗粒大鼠含药血清诱导小鼠胚胎干细胞向生殖细胞分化相关基因的表达

目的:研究资冲颗粒含药血清诱导小鼠胚胎干细胞(m ESC)生殖分化相关基因的表达。方法:以终浓度5%资冲颗粒含药血清干预m ESC,以5%人卵泡液及小鼠卵巢组织共培养作为对照。培养21d后利用实时荧光定量PCR测定干预后细胞内基因Oct4、Stra8、Tp2、Zp3、Itgb1、Gdf9的表达。结果:与m ESC未干预状态相比较,3组干预后生殖分化相关基因表达均有明显变化;同人卵泡液组比较,含药血清组细胞内基因Tp2、Gdf9表达量显著上调(P=0.00、P=0.04);同卵巢组织组比较,含药血清组多数基因上调幅度较大,但两组间无统计学意义。结论:3种诱导方法均促使了m ESC向生殖细胞方向分化;资冲颗粒含药血清或能加速m ESC向生殖细胞方向定向分化的进程。

补肾中药复方灌肠和灌胃对大鼠卵泡发育的影响

目的探讨补肾中药复方资冲颗粒灌肠和灌胃对大鼠卵泡发育的影响。方法对幼龄大鼠（160～170g）采用灌肠和灌胃两种方法给予资冲颗粒，并与己烯雌酚、女金丹进行对照。对幼龄大鼠卵巢各级卵泡及黄体进行计数；对子宫、卵巢指数进行计算；对子宫组织形态学进行观察。结果资冲颗粒灌肠组、资冲颗粒灌胃组、己烯雌酚组、女金丹组作用相似，均可增加幼龄大鼠卵巢窦前卵泡数和卵泡总数（P〈0．01）。资冲颗粒灌肠和灌胃均可增加幼龄大鼠子宫指数（P〈0．05或P〈0．01），子宫内膜厚度（P〈0．05）。结论资冲颗粒直肠给药和灌胃给药均具有促进幼龄大鼠卵泡发育的作用和增加雌激素样效应。提示直肠给药可能是促卵泡发育的有效途经之一。

补肾中药复方对不同发育阶段大鼠卵泡发育的影响

目的:比较补肾中药复方资冲颗粒对两个不同发育阶段大鼠卵泡发育的影响并探讨其作用环节。方法:分别给予早幼大鼠、晚幼大鼠资冲颗粒,并与己烯雌酚、女金丹进行对照。计数大鼠卵巢各级卵泡及黄体;计算子宫、卵巢指数。结果:资冲颗粒、己烯雌酚、女金丹作用相似,均可增加晚幼大鼠卵巢窦前卵泡数和卵泡总数(P<0.01或P<0.05);资冲颗粒可增加晚幼大鼠子宫指数(P<0.05或P<0.01);对早幼大鼠卵泡发育无明显影响(P>0.05)。结论:资冲颗粒具有促进晚幼大鼠卵泡发育的作用。提示晚幼大鼠较早幼大鼠更适合用于促卵泡发育药物的药效研究。

Basic Investigation Effects of Zi Chong Granules on Estradiol Synthesis in the Cultured Ovarian Granular Cells of Mice

To investigate the effect of Zi Chong Granules (资冲颗粒) on estradiol (E2) synthesis in the cultured ovarian granular cells of the mice, so as to probe into the mechanism of the drug in promoting follicular development. Methods: Testosterone (T) with different concentration were added to the cultured ovarian granular cells, and 24 and 48 hours later the enzyme immunoassay (EIA) was used to determine the required concentration of T and time for E2 synthesis; Zi Chong Granules, its active components for tonifying the kidney and removing blood stasis, and the mouse serum containing Zi Chong Granules were respectively added to the medium of the cultured mouse ovarian granular cells and the mixtures were cultured for 48 hours to determine the E2 concentration in various cultures, with insulin growth factor-1(IGF-1), follicle-stimulating hormone (FSH) and Nü Jin Dan (女金丹丸 Golden Pill for Women) as positive control drugs. Results: Zi Chong Granules and Nü Jin Dan (were found to be able to increase the E2 level in the medium of the cultured ovarian granular cells to a certain extent, and the active components for tonifying the kidney or those for removing the blood stasis did not increase the E2 level, but the mouse serum containing Zi Chong Granules could significantly increase the level of·E2. Conclusion: To promote the E2 synthesis in the ovarian granular cells is one of mechanisms of Zi Chong Granules in stimulating follicular development.