赖型钩体弱毒株外膜蛋白基因的序列分析

目的 :探讨赖型钩体弱毒株外膜蛋白基因的特点及其与强毒株的差别。方法 :对问号钩体赖型 5 660 1株的外膜蛋白基因进行PCR扩增得到外膜蛋白基因并进行了全基因序列测定 ,并与我国特有的强毒株 0 17株进行了Omp11基因核苷酸序列、推导的氨基酸序列以及亲水性和疏水性和二级结构的比较。结果 :赖型钩体 5 660 1株和 0 17株Ompl1基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列同源性均为 99%。结论 :赖型钩体 5 660 1株和 0 17株Ompl1基因核苷酸序列存在较小差别 ,可能与毒力强弱有关。另外 ,两株钩体Ompl1基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列同源性很高 。

赖型钩体601株和017株基因文库的构建

黄疸出血群赖型钩体601株、017株DNA经EcoRI酶切消化，与EcoRI酶切消化和去磷酸化的pUC18连接后，转化大肠杆菌JM103，建成重组率为85％以上，分别含重组子8700个（601株）和12，000个（017株）的基因文库。随机选择的白色菌落的质位经酶切鉴定表明均含有大小不等的插入DNA片段。

问号赖型钩体与七日热型钩体内鞭毛蛋白基因的克隆及序列分析

目的 筛选钩体核酸疫苗的候选株 ,并从基因水平解释钩体血清型的特异性。方法 通过 PCR方法扩增赖型 0 17株及七日热型 5 6 6 10株钩体的内鞭毛蛋白 (fla B)基因 ;经 T/A快速克隆法将 PCR产物连接于PGEM- T Easy Vector载体。用 α-互补法、PCR法及酶切分析鉴定重组质粒 ,获得了重组质粒 p DHTF0 17和p DHTF6 10 ;双脱氧终止法对两个重组质粒中的克隆化 fla B基因进行测序。结果 两型 fla B基因长 85 2 bp,编码2 83个氨基酸。两个基因的限制性内切酶位点相似 ,含多个常见酶切位点。基因编码的蛋白质预测相对分子质量为31.3× 10 3。结论 几个血清型的 fla B基因同源性达 90 %～ 99%。