长链非编码RNA赖氨酰氧化酶样蛋白1反义RNA在结直肠癌中的表达及对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)赖氨酰氧化酶样蛋白1反义RNA(LOXL1-AS1)在结直肠癌中的表达及对结直肠癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响和可能的作用机制。方法 选取2016年1月至2018年12月在河南省人民医院行结直肠癌根治术的56例病人新鲜癌组织,采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测结直肠癌组织样本及结直肠癌细胞系SW480、SW620、HCT116和Lovo细胞中lncRNA LOXL1-AS1的表达水平,以配对癌旁组织及人正常结直肠黏膜细胞FHC作正常对照;构建靶向LOXL1-AS1序列的小干扰RNA(si-LOXL1-AS1)并转染SW480和Lovo细胞,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、平板克隆实验、划痕实验和Transwell小室法检测沉默lncRNA LOXL1-AS1表达对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。采用蛋白质印迹法(Western blotting)检测沉默LOXL1-AS1表达后磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路相关蛋白及上皮-间质转化(EMT)相关蛋白的表达情况。结果 LOXL1-AS1在结直肠癌组织中的相对表达水平显著高于癌旁组织(1.37±0.05比0.87±0.05,P<0.05),其表达水平与肿瘤分化程度、TNM分期、肝转移和MSI状态显著相关(均P<0.05);LOXL1-AS1在结直肠癌细胞系(SW480、SW620、HCT116、Lovo)中的表达水平显著高于FHC细胞(1.93±0.10、1.32±0.04、1.50±0.07、1.78±0.09比1.10±0.07,P<0.05),沉默lncRNA LOXL1-AS1表达可抑制SW480细胞和Lovo细胞的增殖、侵袭及迁移能力,E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达含量升高,N-钙黏蛋白(N-cadherin)、磷酸化脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)表达含量降低(均P<0.05)。结论 LOXL1-AS1在结直肠癌组织中高表达并与临床病理特征相关,沉默LOXL1-AS1可显著降低结直肠癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力,该机制可能与PI3K/Akt信号通路及EMT途径有关。

赖氨酰氧化酶样蛋白1在日本血吸虫感染小鼠肝脏中的动态表达

目的观察赖氨酰氧化酶(LOX)家族中的赖氨酰氧化酶样蛋白1(LOXL1)及相关胶原蛋白在日本血吸虫感染小鼠肝脏中的动态表达,探讨其在日本血吸虫肝纤维化形成中的作用。方法采用日本血吸虫感染的小鼠肝纤维化模型,于感染后第6、9、12周剖杀小鼠,收集其血清和肝脏标本;以HE和天狼星红两种染色方法分别观察并评价小鼠肝脏纤维化的进展程度;同时检测小鼠血清转氨酶水平。以免疫印迹(Western blot)和荧光定量PCR(qPCR)方法分别检测肝组织LOXL1、Ⅰ型胶原蛋白(Col1)及α-肌动蛋白(α-SMA)的表达并分析其含量的变化;并对血清中的可溶性和不可溶性胶原进行测定,以判断胶原交联情况。结果HE和天狼星红染色结果显示,随感染时间延长,小鼠肝纤维化也随之进展,在感染第9周肝纤维化程度最为严重,随后进入慢性肝纤维化期,纤维化程度减轻。Western blot和qPCR结果显示,LOXL1和其他纤维化指标表达情况类似,均在感染第9周时表达量明显上调;可溶性胶原含量在感染第9周时达峰值后下降,而不可溶性胶原含量则持续上升。结论LOXL1与血吸虫肝脏纤维化过程中纤维交联存在相关关系,可能在肝纤维化进程中起到促进作用。

下调赖氨酰氧化酶样蛋白1(LOXL1)表达抑制乳腺癌细胞的增殖与迁移

目的探究赖氨酰氧化酶样蛋白1(LOXL1)基因对乳腺癌细胞的增殖及迁移能力的影响。方法利用基因表达谱交互分析(GEPIA)与Kaplan-Meier分析确定乳腺癌组织LOXL1的表达以及与乳腺癌患者预后的关系。通过慢病毒稳定转染技术,稳定敲低MDA-MB-231细胞和MCF7细胞的LOXL1。采用集落形成实验、CCK-8法、5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色实验检测敲低LOXL1对乳腺癌细胞增殖能力的影响,划痕实验以及Transwell^(TM)实验检测敲低LOXL1对乳腺癌细胞迁移能力的影响。结果与正常组织相比,LOXL1在乳腺癌组织高表达,且与不良预后相关;敲低MDA-MB-231、MCF7乳腺癌细胞LOXL1后,细胞增殖和迁移能力明显降低。结论敲低LOXL1降低乳腺癌细胞的增殖及迁移能力。

赖氨酰氧化酶样蛋白1在癌症中作用机制的研究进展

癌症是导致人类死亡的主要原因之一,也是提高人类预期寿命的重要障碍。癌症的有效筛查、早期诊断、早期治疗一直以来是临床的难点,鉴定新的生物标志物或分子靶标以改善癌症患者的诊断和治疗情况刻不容缓。赖氨酰氧化酶样蛋白1(lysyl oxidase like 1,LOXL1)作为一种分泌型的铜依赖性胺氧化酶,在多种类型细胞中广泛存在。LOXL1可以维持弹性蛋白的稳态,参与细胞外基质的重塑,在机体发育、组织损伤、纤维化疾病和癌症的发展过程中发挥重要作用。LOXL1生物学功能广泛,其功能异常是许多临床疾病发生的基础。研究表明,LOXL1蛋白在人类肾细胞癌、膀胱癌和结直肠癌中表达下调并抑制肿瘤的生长,而在人类涎腺腺样囊性癌、肾细胞癌、肺腺癌、胸膜间皮瘤、脑胶质瘤和胃癌中表达上调,提示LOXL1蛋白在不同类型的癌症中具有抑癌或促癌的双向作用。本文主要综述LOXL1蛋白的结构、功能及其与癌症发生发展的关系,进一步探讨LOXL1蛋白在癌症研究中的应用前景,为癌症的临床诊断与治疗提供理论基础和参考依据。

赖氨酰氧化酶样蛋白4在肾间质纤维化中的表达及意义

目的赖氨酰氧化酶样蛋白4(lysyl oxidase-like protein 4, LOXL4)是赖氨酰氧化酶(lysyloxidase, LOX)家族的最新成员,本研究旨在观察LOXL4在肾脏纤维化形成中的表达及意义。方法收集慢性肾脏病患者的肾活检标本,单侧输尿管结扎(unilateral ureteral ligation, UUO)大鼠;TGF-β1刺激大鼠肾成纤维细胞(NRK-49F)。通过q-PCR,Western印迹法和/或免疫组化等方法检测LOXL4的表达及作用。结果患者肾脏纤维化组织中LOXL4沉积显著高于正常肾组织(P<0.01);与Sham组相比,UUO组大鼠肾脏LOXL4、Col1(collgen 1)表达水平明显升高(P<0.01);TGF-β1显著促进LOXL4、Col1的表达(P<0.01);转染LOXL4过表达质粒后,NRK-49F胶原表达水平明显增多(P<0.01);下调LOXL4后,胶原表达水平明显下降(P<0.01)。结论在肾间质纤维化中LOXL4表达明显增加,其通过调控胶原纤维的表达而参与肾脏纤维化。

血清lncRNA LOXL1-AS1、miR-3614-5p水平对急性心肌梗死后心律失常的预测价值

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)赖氨酰氧化酶样1-反义RNA1(LOXL1-AS1)、微小RNA(miR)-3614-5p在急性心肌梗死患者血清中的表达水平,以及对心律失常的预测价值。方法选择2021年1月—2023年1月西安交通大学第一附属医院心内科住院治疗急性心肌梗死患者148例作为研究对象(急性心肌梗死组),根据患者是否发生心律失常,分为非心律失常亚组(n=96)和心律失常亚组(n=52),另选取同期与急性心肌梗死患者一般资料相匹配的健康体检者148例为健康对照组。比较各组血清lncRNA LOXL1-AS1、miR-3614-5p水平;多因素Logistic回归分析急性心肌梗死后心律失常的影响因素;绘制受试者工作特征曲线(ROC)并计算曲线下面积(AUC)分析血清lncRNA LOXL1-AS1、miR-3614-5p水平对急性心肌梗死后心律失常的预测价值。结果与健康对照组比较,急性心肌梗死组lncRNA LOXL1-AS1水平升高,miR-3614-5p水平降低(t/P=16.248/<0.001、8.397/<0.001);心律失常亚组病变血管支数、lncRNA LOXL1-AS1水平高于非心律失常亚组,左心室射血分数(LVEF)、miR-3614-5p水平低于非心律失常亚组[χ^(2)(t)/P=14.315/<0.001、7.312/<0.001、3.706/<0.001、7.656/<0.001];Target Scan Human网站预测结果显示,lncRNA LOXL1-AS1与miR-3614-5p有结合位点,可能存在靶向关系;多因素Logistic回归分析结果显示,lncRNA LOXL1-AS1高、病变血管支数多是急性心肌梗死后心律失常的危险因素,miR-3614-5p、LVEF高是保护因素[OR(95%CI)=3.542(1.589~7.896)、1.527(1.081~2.156)、0.721(0.601~0.865)、0.789(0.664~0.938)];lncRNA LOXL1-AS1、miR-3614-5p及二者联合预测急性心肌梗死后心律失常的AUC为0.820、0.890、0.932,二者联合优于各自单独预测(Z/P=3.470/0.001、2.293/0.022)。结论急性心肌梗死后心律失常患者血清lncRNA LOXL1-AS1水平显著升高,miR-3614-5p水平显著降低,两者联合对急性心肌梗死后心律失常有较好的预测价值。

骨肉瘤患者癌组织中AHA1 mRNA和LOXL2 mRNA表达与侵袭转移基因mRNA表达的相关性及临床意义

目的研究骨肉瘤(osteosarcoma)患者癌组织中热休克蛋白90 ATP酶激活因子1(the activator of HSP90 ATPase-1,AHA1)和赖氨酰氧化酶样蛋白2(lysyl oxidase like-2 protein,LOXL2)表达与侵袭转移基因mRNA表达的相关性及临床意义。方法选取2016年2月~2017年3月华北医疗健康集团峰峰总医院诊治的90例骨肉瘤患者为研究对象。应用实时荧光定量PCR检测组织中AHA1 mRNA,LOXL2 mRNA及侵袭转移基因Wnt家族成员9A(Wnt9a)mRNA,锌指E盒结合同源盒1(Zinc finger E-box binding homeobox 1,ZEB1)mRNA,锌指E盒结合同源盒2(ZEB2)mRNA,N-钙黏素(N-cad)mRNA和波形蛋白(Vim)mRNA表达。采用Pearson相关分析,比较不同临床特征骨肉瘤患者AHA1 mRNA,LOXL2 mRNA表达差异。Kaplan-Meier生存分析影响AHA1 mRNA,LOXL2 mRNA表达对骨肉瘤患者预后的影响。单因素及多因素COX回归分析影响骨肉瘤患者预后的因素。结果骨肉瘤组织中AHA1 mRNA(3.16±0.59),LOXL2 mRNA(2.84±0.44)及侵袭转移基因Wnt9a mRNA(3.23±0.42),ZEB1 mRNA(2.73±0.39),ZEB2 mRNA(2.52±0.56),N-cad mRNA(2.71±0.65),Vim mRNA(2.81±0.73)表达均高于癌旁组织(1.10±0.21,0.95±0.18,0.79±0.15,0.64±0.11,0.98±0.19,0.68±0.14,0.72±0.15),差异具有统计学意义(t=31.206,37.716,51.903,48.931,24.706,28.964,26.605,均P<0.05)。骨肉瘤组织中AHA1 mRNA与LOXL2 mRNA表达呈显著正相关(r=0.712,P<0.05)。骨肉瘤组织中AHA1 mRNA,LOXL2 mRNA与侵袭转移基因Wnt9a mRNA,ZEB1 mRNA,ZEB2 mRNA,N-cad mRNA,Vim mRNA表达呈显著正相关(r=0.504~0.720,均P<0.05)。Eneeking分期Ⅲ期、有软组织浸润和有肺转移骨肉瘤组织中AHA1 mRNA,LOXL2 mRNA表达高于Eneeking分期Ⅰ~Ⅱ期、无软组织浸润和无肺转移患者,差异具有统计学意义(t=14.122~171.054,均P<0.05)。AHA1 mRNA高表达组和低表达组患者五年生存率分别为36.36%(16/44),78.26%(36/46)。AHA1 mRNA高表达组患者五年累积生存率明显低于低表达组,差异有统计学意义(Log-rankχ^(2)=16.081,P<0.05)。LOXL2 mRNA高表达组和低表达组患者五年生存率分别为34.88%(15/43),78.72%(37/47)。LOXL2 mRNA高表达组患者五年累积生存率明显低于低表达组,差异有统计学意义(Log-rankχ^(2)=15.880,P<0.05)。肺转移(OR=1.921,P<0.05),Eneeking分期Ⅲ期(OR=1.906,P<0.05),AHA1 mRNA高表达(OR=1.405,P<0.05),LOXL2 mRNA高表达(OR=1.733,P<0.05)是影响骨肉瘤患者不良生存预后的独立危险因素。结论骨肉瘤组织中AHA1 mRNA,LOXL2 mRNA表达升高,两者表达与侵袭转移基因表达有关,是影响骨肉瘤患者不良生存预后的独立危险因素。

赖氨酰氧化酶、赖氨酰氧化酶样蛋白-2与转化生长因子β_1在宫腔粘连子宫内膜中的表达及其相关性分析

目的研究宫腔粘连(intrauterine adhesions,IUA)患者子宫内膜中赖氨酰氧化酶(lysyl oxidase,LOX)、赖氨酰氧化酶样蛋白-2(lysyl oxidase like 2,LOXL 2)、转化生长因子β_1(transforming growth factor-β_1,TGF-β_1)的表达,并分析上述因子的表达与IUA发生发展的关系。方法选择2016年1月至11月于首都医科大学附属北京妇产医院妇科微创中心收治的中、重度IUA患者20例为研究对象,宫腔镜宫腔粘连分离术中获取IUA周围子宫内膜组织作为研究组(增殖期9例,分泌期11例);选择同期因输卵管性不孕、子宫纵隔的患者20例,宫腔镜术中获取子宫内膜组织作为对照组(增殖期和分泌期各10例)。采用免疫组织化学法检测两组子宫内膜组织中LOX、LOXL 2及TGF-β_1的表达情况。结果 (1)研究组LOX的表达(7.00±3.15)低于对照组(10.20±2.42),而LOXL 2、TGF-β_1的表达(9.80±2.75、8.80±2.46)均高于对照组(6.60±2.68、5.00±1.77)(P<0.05);(2)LOXL 2与TGF-β_1呈显著正相关(r=0.418,P<0.05);(3)研究组患者临床特征与LOX、LOXL 2及TGF-β_1表达的相关性:残留内膜面积<50%的患者子宫内膜中LOX的表达降低、LOXL 2和TGF-β_1的表达升高(P<0.05);既往流产次数≥3次的患者子宫内膜中LOXL 2的表达升高(P<0.05);年龄≥32岁、重度IUA患者子宫内膜中TGF-β_1的表达升高(P<0.05)。结论 IUA子宫内膜中LOX、LOXL 2及TGF-β_1的异常表达与残留内膜面积、AFS评分严重程度、既往流产次数及年龄相关,可能在IUA发生发展过程起到重要作用。

食管鳞癌组织中LOXL2和COL1A1的表达与临床病理特征的关系

目的研究赖氨酰氧化酶样蛋白2(LOXL2)和I型胶原蛋白ɑ1链(COL1A1)在食管鳞癌中的表达,探索两者蛋白表达与患者临床病理特征的相关性。方法以2019年9月-12月新疆医科大学附属肿瘤医院收治的45例食管鳞癌患者为研究组,以同期3例健康体检者为对照组。采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测LOXL2和COL1A1在食管鳞癌组织及癌旁组织中的表达水平;采用外泌体试剂盒提取血浆外泌体,免疫印迹试验(Western Blot)检测血浆外泌体LOXL2的表达。结果与癌旁组织相比,食管鳞癌组织中LOXL2 mRNA和COL1A1 mRNA相对表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05)。LOXL2高表达与肿瘤分化程度(χ^(2)=8.879,P<0.05)、淋巴结转移(χ^(2)=4.549,P<0.05)、TNM分期(χ^(2)=7.123,P<0.05)具有相关性;COL1A1高表达与淋巴结转移(χ^(2)=4.874,P<0.05)、TNM分期(χ^(2)=8.186,P<0.05)有关。食管鳞癌组织中LOXL2和COL1A1表达呈正相关(r=0.7289,P<0.05)。与健康体检者比较,食管鳞癌患者的血浆外泌体LOXL2蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(t=3.005,P<0.05)。结论LOXL2和COL1A1在食管鳞癌组织中高表达,并与区域淋巴结转移、临床分期相关,两者异常高表达与食管鳞癌的发生发展密切相关。

LOXL1和LOXL2基因在恶性胸膜间皮瘤中的表达及临床意义

目的 赖氨酰氧化酶样蛋白1(LOXL1)和赖氨酰氧化酶样蛋白2(LOXL2)在恶性胸膜间皮瘤(MPM)的表达差异及其预后价值尚不明确。文中旨在探讨LOXL1和LOXL2基因mRNA在MPM组织中的表达及其临床意义。方法 回顾性收集2017年6月至2019年12月大理大学第一附属医院胸外科12例MPM患者的癌组织和配对相邻正常胸膜组织。采用RT-qPCR检测MPM组织及配对正常胸膜组织中LOXL1和LOXL2基因mRNA表达量。通过Oncomine数据库对非瘤组织与MPM组织中LOXL1和LOXL2基因的表达差异进行分析。通过R4.0.2软件对TCGA数据库中LOXL1和LOXL2基因mRNA表达量与MPM临床病理特征的相关性进行分析。构建Kaplan-Meier模型分别探讨LOXL1和LOXL2基因mRNA表达量对MPM患者预后的影响。采用基因表达谱动态分析(GEPIA)分别对LOXL1和LOXL2与MPM肿瘤标志物基因和LOX家族其他成员基因表达的相关性进行分析。结果 RT-qPCR检测显示,与正常胸膜组织比较,MPM组织中LOXL1和LOXL2基因mRNA的表达量显著增加(P<0.01)。LOXL1基因和LOXL2基因的高表达是导致MPM患者预后不良的影响因素,上皮样型MPM预示着MPM患者预后良好(P<0.05)。LOXL1基因表达与EFEMP1(r=-0.25,P=0.021)、MSLN(r=-0.35,P<0.001)、CALB2(r=-0.36,P<0.001)、THBS2(r=0.32,P=0.003)和CDH11基因(r=0.25,P=0.018)表达具有显著相关性。LOXL1基因表达与LOXL2(r=0.22,P=0.041)、LOXL4(r=0.3,P=0.004)基因具有显著正相关;LOXL2基因表达与LOX(r=0.65,P<0.001)、LOXL1(r=0.22,P=0.041)和LOXL4(r=0.37,P<0.001)基因表达具有显著正相关。结论 LOXL1和LOXL2基因在MPM组织中均呈现显著高表达,其基因表达量是评估MPM患者预后的有效指标。

宫腔粘连患者子宫内膜组织ArhGAP29、LOXL 2及TGF-β1的表达及临床意义

目的探讨宫腔粘连患者子宫内膜组织中RhoGTP酶激活蛋白29(ArhGAP29)、赖氨酰氧化酶样蛋白-2(LOXL2)及转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达情况,并分析3个指标在宫腔粘连发病中的作用机制。方法选取2016年3月到2017年10月该院收集的76例宫腔粘连患者粘连周围的子宫内膜组织作为观察组标本,另选取该院同期收集的30例输卵管性不孕患者的正常子宫内膜组织标本作为对照组标本。采用免疫组化法检测子宫内膜组织中ArhGAP29、LOXL2及TGF-β1的表达,并分析3个指标的表达与宫腔粘连患者临床病理特征的关系以及3个指标之间的相关性。结果观察组患者子宫内膜组织中ArhGAP29的免疫组化反应评分(IRS)低于对照组,LOXL2及TGF-β1的IRS得分高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);宫腔粘连患者子宫内膜组织ArhGAP29表达与美国生育学会(AFS)分级、闭经有关(P<0.05);TGF-β1表达与AFS分级有关(P<0.05);LOXL2表达与刮宫次数有关(P<0.05)。ArhGAP29表达分别与LOXL2、TGF-β1表达呈负相关(P<0.05),LOXL2表达与TGF-β1表达呈正相关(P<0.05)。结论宫腔粘连患者子宫内膜组织中的ArhGAP29呈低表达,LOXL2及TGF-β1呈高表达,三者之间存在相关性,其均可能是通过影响子宫内膜纤维化进程来影响宫腔粘连的进展。

LOXL2基因沉默对人胃癌细胞株BGC823增殖的影响及其机制

目的观察赖氨酰氧化酶样蛋白2(LOXL2)基因沉默后人胃癌细胞株BGC823增殖情况变化,并探讨其相关机制。方法培养并收集人胃癌细胞株BGC823、正常胃上皮细胞株GES-1,采用real-time PCR检测LOXL2 mRNA,Western blotting法检测LOXL2蛋白。将BGC823细胞分为实验组、阴性组、对照组,其中实验组、阴性组分别转染LOXL2 siRNA、NS siRNA,对照组仅加入Lipofectamine2000试剂。继续培养48 h后,采用MTT实验观察细胞增殖抑制情况,流式细胞术观察细胞周期分布,采用real-time PCR检测增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期素D1(Cyclin D1)mRNA,采用Western blotting法检测PCNA、Cyclin D1蛋白。结果 BGC823细胞中LOXL2 mRNA及蛋白相对表达量均高于GES-1细胞(P均<0.05)。与对照组相比,实验组、阴性组细胞增殖抑制率分别为48.32%±3.91%、8.86%±2.98%。实验组G0/G1期细胞百分比高于阴性组与对照组,S期细胞百分比低于阴性组与对照组(P均<0.05)。实验组细胞中PCNA、Cyclin D1 mRNA及蛋白相对表达量均低于阴性组和对照组(P均<0.05)。结论 LOXL2基因沉默后,BGC823细胞增殖受到抑制,其机制可能与下调PCNA、Cyclin D1 mRNA及蛋白表达有关。