人赖氨酸乙酰基转移酶7结构域蛋白的原核表达及纯化

目的:克隆人赖氨酸乙酰基转移酶7(KAT7)的2个功能结构域基因,获得其原核表达产物,并纯化蛋白。方法:采用PCR技术从人乳腺文库中扩增人KAT7基因的2个功能结构域(1-330aa)和(331-611aa)编码片段,将其克隆到p ET28a载体中,在大肠杆菌Rossate中表达后,对原核表达产物进行纯化,以SDS-PAGE和Western印迹鉴定表达与纯化产物。结果:从人乳腺文库中分别扩增获得约990和840 bp的DNA片段,并克隆至p ET28a载体,测序结果表明与目的序列完全一致;在大肠杆菌Rossate中诱导表达出相对分子质量分别约为42 000和36 000的目的蛋白,经纯化后获得了纯度较高的重组蛋白KAT7(1-330aa)和(331-611aa)。结论:获得了重组蛋白KAT7(1-330aa)和(331-611aa),为后续研究KAT7与肿瘤调控奠定了实验基础。

精氨酸甲基转移酶(PRMT)7通过IGF-1信号通路调控人骨髓间充质干细胞成脂分化的研究

目的本研究旨在明确精氨酸甲基转移酶(PRMT)7在人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)成脂分化过程中的变化以及是否调控hBMSCs成脂分化,进而探索相应的调控机制。方法通过定量反转录PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)检测hBMSCs成脂分化过程中PRMT7的变化;通过qRT-PCR和Western blot实验证明PRMT7稳定敲低细胞系构建成功。进行油红O染色和定量分析,以及qRT-PCR和Western blot实验检测PRMT7稳定敲低细胞系成脂分化水平的变化;通过裸鼠体内异位成脂实验,油红O染色检测PRMT7稳定敲低细胞系体内异位成脂的效果;通过qRT-PCR和Western blot证明PRMT7稳定过表达细胞系构建成功。进行油红O染色和定量分析以及qRT-PCR和Western blot实验检测PRMT7稳定过表达细胞系成脂分化水平的变化;通过q RT-PCR和Western blot实验检测敲低PRMT7和过表达PRMT7的细胞中IGF-1表达水平的变化。在PRMT7稳定敲低细胞系中转染siIGF-1并通过qRT-PCR和Western blot检测IGF-1的表达水平验证敲低效率。通过油红O染色和定量分析,qRT-PCR实验检测转染siIGF-1的敲低组hBMSCs成脂分化水平的变化。结果本文发现:在hBMSCs成脂过程中,PRMT7表达水平明显降低(P<0.01);敲低PRMT7后hBMSCs的成脂分化能力增强(P<0.001);敲低PRMT7后hBMSCs的体内异位成脂分化能力增强;过表达PRMT7后hBMSCs的成脂分化能力减弱(P<0.01);PRMT7敲低后IGF-1表达水平增加(P<0.0001);PRMT7过表达后IGF-1表达水平降低(P<0.0001);转染siIGF-1后,各细胞系IGF-1表达水平明显降低(P<0.001);敲低组转染siIGF-1后成脂分化能力明显降低(P<0.01)。结论本研究通过细胞水平和裸鼠皮下移植实验发现PRMT7显著抑制hBMSCs成脂分化,机制研究发现PRMT7对hBMSCs成脂分化的调控作用依赖IGF-1信号通路。上述研究表明,PRMT7可能是治疗相关疾病的潜在分子靶点,为PRMT7和hBMSCs应用于相关疾病治疗提供了新思路。

甲硫腺苷磷酸化酶、组蛋白赖氨酸三甲基转移酶蛋白在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的探讨甲硫腺苷磷酸化酶(MTAP)、组蛋白赖氨酸三甲基转移酶(SETD2)蛋白在结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法将2018年11月至2019年11月在苏州市中西医结合医院进行手术治疗并经术后病理学检查证实的86例结直肠癌病人作为研究对象,并收集齐其癌组织标本以及对应的癌旁组织标本。采用免疫组织化学染色法检测所有标本MTAP、SETD2蛋白表达水平。采用χ^(2)检验和多因素Cox回归法探讨MTAP、SETD2蛋白表达与结直肠癌病人临床病理特征、预后的关系。结果结直肠癌组织中MTAP、SETD2阳性表达率(30.23%、27.91%)分别低于癌旁组织(58.14%、62.79%)(P<0.05)。MTAP、SETD2阳性表达水平随着TNM分期越晚、分化程度越低、伴有淋巴结转移而降低(P<0.05)。MTAP阳性3年生存率(73.08%)明显高于阴性(43.33%)(P=0.011);SETD2阳性3年生存率(70.83%)高于阴性(45.16%)(P=0.011)。单因素、多因素分析得出,TNMⅢ~Ⅳ期、伴淋巴结转移、低分化、MTAP阴性、SETD2阴性表达均为影响结直肠癌预后的危险因素(P<0.05)。结论直肠癌组织中MTAP、SETD2蛋白均呈低表达,其表达水平可能参与疾病发展,可成为评估病人预后不良的有效生物学指标。

组蛋白赖氨酸甲基转移酶在急性髓系白血病中的研究进展

急性髓系白血病(AML)是一种源于造血干细胞的血液恶性肿瘤,具有治疗难度大、预后差等特点。表观遗传学在白血病的发生、发展中起着重要作用。组蛋白甲基化修饰相关基因和酶作为AML治疗靶点的研究取得了较大进展。该文就组蛋白H3赖氨酸甲基转移酶在AML中的研究进展进行综述。

赖氨酸乙酰转移酶7的冷冻电镜全长结构分析

目的·利用冷冻电镜技术分析人源性赖氨酸乙酰转移酶7(lysine acetyltransferase 7,KAT7)的全长蛋白结构,获得人源KAT7的轮廓信息。方法·使用pGEX-4T1载体和人源KAT7全长基因构建重组蛋白表达质粒pGEX-4T1-GST-KAT7,在原核蛋白表达体系BL21(DE3)中表达KAT7蛋白,使用GST亲和层析获得GST-KAT7重组蛋白;在利用TEV蛋白酶去除GST蛋白标签后,通过HiLoad 16/600 Superdex 75 pg体积排阻色谱进一步分离纯化KAT7蛋白。将获取的蛋白样品利用蛋白质印迹法(Western blotting)对KAT7进行鉴定,使用负染电镜筛选样品并初步观察蛋白形貌;使用冷冻电镜收集数据,利用冷冻电镜数据分析软件CryoSparc挑选蛋白颗粒并分析KAT7全长蛋白的空间结构;通过UCSF Chimera软件将蛋白质数据库(Protein Data Bank,PDB)中KAT7的MYST结构域模型(5GK9)、AlphaFold预测模型与生成的结构模型进行匹配分析。结果·利用亲和层析成功纯化人源性KAT7的全长蛋白,并通过体积排阻色谱获得高纯度的KAT7蛋白;在通过Western blotting鉴定KAT7后,利用负染电镜、冷冻电镜及单颗粒重构技术初步解析了KAT7全长蛋白的空间结构,并通过三维优化处理获得了分辨率约为10Å的初步三维结构模型;KAT7全长蛋白空间结构呈不规则的半环状,已有的MYST结构域模型(PDB:5GK9)可匹配入KAT7全长模型的C端部分,调整后的AlphaFold预测模型也可匹配KAT7全长结构模型。结论·利用冷冻电镜技术初步分析了人源性KAT7的全长蛋白空间结构模型。

沉默赖氨酸乙酰基转移酶基因对人甲状腺乳头状癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨赖氨酸乙酰基转移酶(Kat5)对甲状腺乳头状癌细胞增殖和凋亡的影响及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)信号通路的作用,阐明Kat5在甲状腺乳头状癌细胞增殖和凋亡中的可能作用机制。方法:RT-PCR和Western blotting法检测甲状腺乳头状癌BHP10-3、TPC-1、K1细胞和甲状腺上皮Nthy-ori3-1细胞中Kat5 mRNA和蛋白表达水平。将对数生长期甲状腺乳头状癌TPC-1细胞分为空白对照组、阴性对照组和沉默Kat5组(si-Kat5组)。空白对照组甲状腺乳头状癌TPC-1细胞不转染,阴性对照组甲状腺乳头状癌TPC-1细胞转染阴性对照siRNA,si-Kat5组甲状腺乳头状癌TPC-1细胞转染Kat5 siRNA。RT-PCR和Western blotting法检测各组甲状腺乳头状癌TPC-1细胞中Kat5 mRNA和蛋白表达水平,CCK-8法检测各组TPC-1细胞增殖活性,克隆形成实验检测各组TPC-1细胞克隆形成率,流式细胞术检测各组TPC-1细胞凋亡率,Western blotting法检测各组TPC-1细胞中周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、P21、P53、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、AKT和磷酸化AKT(p-AKT)蛋白水平。结果:甲状腺乳头状癌BHP10-3、TPC-1和K1细胞中Kat5 mRNA和蛋白表达水平均高于甲状腺上皮Nthy-ori3-1细胞(P<0.05)。各组TPC-1细胞中Kat5 mRNA和蛋白水平、细胞增殖活性、细胞克隆形成率、细胞凋亡率以及细胞中CDK2、P21、P53、cleaved caspase-3、PI3K、p-PI3K、AKT及p-AKT蛋白表达水平比较差异均有统计学意义(P<0.05);与空白对照组和阴性对照组比较,si-Kat5组TPC-1细胞中Kat5 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05),细胞增殖活性降低(P<0.05),细胞克隆形成率降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞中CDK2、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平降低(P<0.05),P21、P53和cleaved caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:甲状腺乳头状癌细胞中Kat5 mRNA和蛋白表达水平升高,沉默Kat5基因可抑制甲状腺乳头状癌细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与其抑制PI3K/AKT信号通路有关。

肺腺癌组织中赖氨酸乙酰转移酶5、鼠双微体2表达观察

目的 观察肺腺癌组织中赖氨酸乙酰转移酶5[K(lysine) acetyltransferase,KAT5]和鼠双微体2(Murine double minute2,MDM2)的表达变化,探讨其临床意义。方法 60例通过手术切除且经过病理学确诊肺腺癌患者,留取癌组织和癌旁肺组织。采用荧光免疫组织化学法对肺腺癌组织及癌旁组织KAT5、MDM2进行定位检测,采用免疫组织化学法对肺腺癌组织及癌旁组织KAT5、MDM2进行半定量检测,分析KAT5、MDM2阳性表达与肺腺癌患者临床病理参数的关系,采用Spearman相关检验法分析肺腺癌组织KAT5、MDM2表达的相关性。结果 相比于癌旁组织,肺腺癌组织中KAT5、MDM2高表达。肺腺癌组织及癌旁组织KAT5阳性表达率分别为65.00%(39/60)、45.00%(27/60),二者比较,P<0.05;MDM2阳性表达率分别为78.33%(47/60)、40.00%(24/60),二者比较,P<0.05。KAT5、MDM2阳性表达与肺腺癌患者的TNM分期、肿瘤分化程度和淋巴结转移密切相关(P均<0.05)。肺腺癌组织中KAT5、MDM2的表达呈正相关(r=0.632,P<0.05)。结论 肺腺癌组织中KAT5、MDM2呈高表达。KAT5、MDM2阳性表达与肺腺癌患者的TNM分期和淋巴结转移相关。KAT5、MDM2可能协同促进肺腺癌的发生发展。

组蛋白赖氨酸甲基转移酶2D在前列腺癌中的研究进展

代谢重编程和表观遗传在前列腺癌(Prostate Cancer,PCa)的发生发展中十分重要。组蛋白赖氨酸甲基转移酶2D(KMT2D)是一种重要的表观遗传因子,它可以通过甲基化组蛋白H3赖氨酸4(H3K4)促进全基因组的可及性和转录。外显子组测序表明,KMT2D是许多类型癌症中最常见的突变基因之一。KMT2D在不同类型癌症中的作用不同,既可作为抑癌基因也可作为癌基因,KMT2D在中国PCa患者中高突变和过表达。对KMT2D在PCa中作用的相关研究进行回顾,可以熟悉KMT2D在PCa中的调控过程,对PCa的精准靶向治疗和获得更好的疾病预后具有重要意义。

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸调节α-微管蛋白乙酰转移酶1抑制矽肺纤维化

目的探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)能否通过对α-微管蛋白乙酰转移酶1(α-TAT1)调节而发挥抗矽肺纤维化作用。方法Wistar大鼠随机分为3组:对照组、矽肺模型组、Ac-SDKP处理组,每组6只。原代培养大鼠的肺成纤维细胞分为5组:对照组、转化生长因子(TGF-β1)诱导组、Ac-SDKP预处理组(TGF-β1+Ac-SDKP)、α-TAT1沉默组(α-TAT1-siRNA+TGF-β1+Ac-SDKP)、α-TAT1过表达组(α-TAT1-cpDNA+TGF-β1+Ac-SDKP)。免疫组化检测大鼠肺组织中α-TAT1的表达与分布,Western blot检测大鼠肺组织及大鼠肺成纤维细胞中I型胶原(Col I)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、乙酰化微管蛋白-α(Ac-Tubα)、α-TAT1蛋白的表达水平。结果矽肺模型组大鼠的肺组织中出现矽结节,α-TAT1在矽结节中表达缺失,Western blot结果显示,矽肺模型组和TGF-β1诱导的肺成纤维细胞中Col I和α-SMA蛋白表达上调,Ac-Tubα和α-TAT1蛋白表达下调。Ac-SDKP治疗可抑制该变化。Ac-SDKP对Col I、α-SMA表达抑制效应可被α-TAT1-siRNA阻断,而α-TAT1过表达可加强Ac-SDKP对Col I、α-SMA表达的抑制作用。结论Ac-SDKP通过调节α-TAT1的表达抑制肌成纤维细胞分化,发挥抑制矽肺大鼠肺纤维化的作用。

高同型半胱氨酸血症对大鼠学习记忆能力和海马胆碱乙酰基转移酶表达的影响及叶酸的干预作用

目的探讨高同型半胱氨酸血症(HHcy)对大鼠学习记忆能力和海马胆碱乙酰基转移酶(ChAT)表达的影响及叶酸的干预作用。方法将30只Wistar大鼠随机分为正常对照组、HHcy组和叶酸干预组,每组10只。在大鼠饮水中添加蛋氨酸[1.0g/(kg·d)]制作HHcy模型,叶酸干预组大鼠同时给予叶酸[0.4mg/(kg·d)]灌胃,共持续8周。在实验前后测定各组血浆同型半胱氨酸(Hcy)、叶酸的浓度,给各组大鼠进行Morris水迷宫试验检查学习记忆能力,实验8周后用免疫组化染色观察大鼠海马区ChAT的表达水平。结果与正常对照组和叶酸干预组比较,HHcy组水迷宫试验的逃避潜伏期明显延长,穿过平台次数明显减少,停留时间明显缩短(P<0.05～0.01);HHcy组大鼠海马CA3区ChAT阳性细胞平均灰度值明显降低(P<0.01)。叶酸干预组与正常对照组以上各项检查结果比较,差异无统计学意义。结论 HHcy导致大鼠学习记忆能力下降以及海马CA3区ChAT表达水平降低。补充叶酸能够起到很好的干预作用。

蛋白质赖氨酸甲基转移酶在甲状腺癌中的研究进展

蛋白质赖氨酸甲基转移酶(protein lysine methyltransferase,PKMT)能催化组蛋白尾部和非组蛋白靶标上的赖氨酸残基甲基化。这类重要的翻译后修饰,可影响染色质的结构和紧密程度,进而影响基因表达。越来越多证据表明,PKMT的遗传改变会影响PKMT在组织中的正常表达从而发挥致癌或抑癌功能。在多种实体瘤中发现PKMT的表达与肿瘤病人的预后有关。本综述总结Zeste增强子同源物2(enhancer of zeste homologue 2,EZH2)、组蛋白-赖氨酸N-甲基转移酶2(histone-lysine N-methyltransferase 2,KMT2)家族和含有SET结构域及MYND结构域蛋白(SET and MYND domain-containing protein,SMYD)家族三类主要PKMT的功能及其在甲状腺癌中的作用。

赖氨酸甲基转移酶SET8结构和功能及其与肿瘤关系的研究进展

SET8(又称SETD8、PR-SET7、KMT5a)是现今发现唯一能够特异性单甲基化H4K20的赖氨酸甲基转移酶。SET8及其催化形成的H4K20me1共同参与了细胞周期调控、染色质结构及基因转录的调节。近年来研究发现SET8在多种肿瘤组织中高表达,参与调控体内细胞的细胞周期、增殖及凋亡等过程,涉及肿瘤的发生、生长、转移等多个环节,有望成为肿瘤治疗的新靶点。本文主要从SET8的结构、功能及其在肿瘤发生中的作用等方面综述了SET8的研究进展。

FAM135B与赖氨酸乙酰转移酶在维吾尔族食管鳞状细胞癌中的表达

目的探讨序列相似家族135成员B(FAM135B)与赖氨酸乙酰转移酶(KAT5)在维吾尔族食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达规律。方法使用罗氏全自动免疫组化仪检测40对维吾尔族ESCC及其癌旁组织中FAM135B与KAT5的表达情况,分析两种蛋白间表达的相关性及与临床特征的相关性。结果维吾尔族ESCC标本中FAM135B、KAT5表达分别占92.50%(37/40)、15.00%(6/40);癌组织中FAM135B表达强阳性者所占比例高于癌旁组织[45.00%(18/40)vs 22.50%(9/40),χ~2=4.528,P=0.033];癌组织中KAT5表达阴性者所占比例与癌旁组织差异无统计学意义[85.00%(34/40)vs 87.50%(35/40),χ~2=0.105,P=0.745];ESCC与其配对癌旁组织FAM135B强阳性表达具有良好正相关性(Kendall相关系数=0.707,P<0.001);癌组织的FAM135B强阳性表达与其KAT5表达具有显著负相关性(Kendall相关系数=-0.946,P<0.001);FAM135B与KAT5表达与ESCC患者性别、年龄、肿瘤部位、分化程度、浸润深度、淋巴结转移及临床分期均无明显相关性(P>0.05)。结论 FAM135B强阳性表达可能是维吾尔族ESCC发生的重要分子基础,且该分子可能通过KAT5的负性表达发挥作用。

组蛋白赖氨酸甲基转移酶与肿瘤

组蛋白甲基化是继乙酰化研究之后的又一热点。核小体组蛋白尾部赖氨酸残基的甲基化反应是由一类具有SET结构域的蛋白酶催化的,新近研究发现该结构域有一个新的蛋白质折叠和支架,与这类酶结合底物及其催化活性密切相关。这类酶与肿瘤的发生密切相关。深入研究其结构与功能的关系有助于最终解开基因精细调控的奥秘。

赖氨酸甲基转移酶SET8介导损伤调节自噬基因调控血管平滑肌细胞凋亡的研究

目的探讨赖氨酸甲基转移酶SET8(lysine methyltransferase SET8)介导损伤调节自噬基因(damage-regulated autophagy modulator 1,DRAM1)调控血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)凋亡的作用及机制。方法体外原代培养VSMCs,采用脂质体转染法处理细胞,将细胞分为3组,正常组,SET8-NC组(转染对照NS-shRNA质粒),SET8-shRNA组(转染SET8-shRNA质粒)。采用MTT比色法检测各组细胞增殖情况;原位末端标记法TUNEL染色检测细胞凋亡情况;Western blot检测各组细胞SET8、DRAM1、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcelllymphoma2,Bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bcl-2 assaciated X protein,Bax)的表达情况。为验证DRAM1对VSMCs凋亡的影响,转染DRAM1高表达,将细胞分为3组,正常组,DRAM1-NC组,DRAM1组。检测各组细胞增殖凋亡情况及DRAM1、Bax和Bcl-2的蛋白表达情况。结果①与正常组和SET8-NC组比较,MTT结果显示SET8-shRNA组细胞于12h、24h、36h、48h增殖降低(F=267.649,P<0.001;F=477.534,P<0.001;F=28.938,P=0.001;F=145.849,P<0.001),TUNEL染色结果显示SET8-shRNA组绿色荧光颗粒显著增多。Western blot结果显示,与正常组和SET8-NC组比较,SET8-shRNA组SET8、Bcl-2表达降低(F=34.247,P=0.001;F=39.218,P<0.001),DRAM1、Bax表达升高(F=84.517,P<0.001;F=15.570,P=0.004)。②与正常组和DRAM1-NC组比较,MTT结果显示DRAM1组细胞于12h、24h、36h、48h增殖降低(F=347.170,P<0.001;F=74.621,P<0.001;F=56.427,P<0.001;F=393.547,P<0.001),TUNEL染色结果显示DRAM1组绿色荧光颗粒显著增多。Western blot结果显示,与正常组和DRAM1-NC组比较,DRAM1组DRAM1和Bax表达升高(F=26.456,P=0.001;F=25.217,P=0.001),Bcl-2表达降低(F=626.70,P<0.001)。结论SET8低表达可促进血管平滑肌细胞发生凋亡,可能机制是通过上调DRAM1表达,促进凋亡蛋白Bax表达,进而引起血管平滑肌细胞发生凋亡。

赖氨酸6-氨基转移酶产生菌株的筛选鉴定

以赖氨酸为唯一氮源,从土壤中分离到36株能够利用赖氨酸的菌株,从中筛选到2株具有赖氨酸6-氨基转移酶活力的菌株。并对酶活较高的菌株进行形态以及ITS序列鉴定,菌株2-14鉴定为轮枝霉菌(Ver-ticilliumsp.)。该菌株能将L-赖氨酸代谢转化为L-哌可酸,并且其中几乎不含有D-哌可酸。该研究为国内L-哌可酸生物合成提供了有价值的资料。

组蛋白赖氨酸甲基转移酶在糖尿病中的研究进展

糖尿病是一组由多病因引起的以慢性高血糖为特征的终身性代谢性疾病。长期血糖增高导致大血管、微血管受损并危及心、脑、肾、周围神经、眼、足等。表观遗传学中许多组蛋白修饰酶在糖尿病中发挥重要作用。越来越多的研究证实组蛋白赖氨酸甲基转移酶与糖尿病及其并发症的发生发展存在联系。组蛋白赖氨酸甲基转移酶不仅通过与一些转录因子的相互作用而影响胰岛素基因的表达,还可通过促进功能性β样细胞的转化来影响糖尿病的发生发展。组蛋白赖氨酸甲基转移酶还通过影响一些炎症因子,活性氧等参与到糖尿病并发症中。本文是对组蛋白赖氨酸甲基转移酶在糖尿病中研究进展的简要综述。

赖氨酸甲基转移酶2D在膀胱癌中的表达水平及对细胞增殖和侵袭的影响

目的:检测赖氨酸甲基转移酶2D(KMT2D)在膀胱癌中的表达水平与临床病理特征的关系及KMT2D对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响。方法:免疫组化实验和qRT-PCR实验分别检测膀胱癌组织和癌旁组织中KMT2D蛋白和mRNA表达水平。根据免疫组化评分将患者分为KMT2D低表达组和KMT2D高表达组,比较两组患者的临床病理特征。蛋白免疫印迹实验检测SV-HUC-1、5637、T24和TCCSUP细胞中KMT2D蛋白表达水平。将miR-NC质粒和miR-KMT2D质粒转染至5637、T24和TCCSUP细胞中,蛋白免疫印记实验检测转染效率。MTT实验和Transwell实验检测细胞的增殖和侵袭情况。结果:膀胱癌组织中KMT2D蛋白免疫组化评分低于癌旁组织(t=17.371,P<0.001)。膀胱癌组织中KMT2D mRNA相对表达水平为(0.8±0.2)低于癌旁组织(2.6±0.4),t=7.606,P=0.002;KMT2D低表达组与高表达组的年龄、肿瘤分化程度、淋巴结转移和浸润深度之间差异有统计学意义(P<0.05);KMT2D蛋白在膀胱癌细胞5637、T24和TCCSUP中的表达水平分别为(0.38±0.03)、(0.42±0.03)、(0.36±0.05)均低于SV-HUC-1的表达水平(0.92±0.06),q=21.131、19.584、21.647,均P<0.001;miR-KMT2D质粒转染至5637、T24和TCCSUP细胞后,KMT2D蛋白水平明显增加;细胞培养72 h时,5637-KMT2D组细胞OD值(0.73±0.05)低于5637-NC组(1.34±0.07)(t=8.241,P<0.001),T24-KMT2D组细胞OD值(0.67±0.06)低于T24-NC组(1.12±0.06)(t=9.524,P<0.001),TCCSUP-KMT2D组细胞OD值(0.62±0.07)低于TCCSUP-NC组(1.32±0.06)(t=8.941,P<0.001);5637-KMT2D组细胞发生侵袭细胞数(34.5±4.7)低于5637-NC组(56.0±5.2)(t=3.524,P=0.008),T24-KMT2D组细胞发生侵袭细胞数(36.4±4.5)低于T24-NC组(68.5±6.7)(t=7.302,P<0.001),TCCSUP-KMT2D组细胞发生侵袭细胞数(30.1±3.4)低于TCCSUP-NC组(74.2±6.5)(t=8.206,P<0.001)。结论:KMT2D在膀胱癌组织中表达水平降低与患者的年龄、肿瘤分化程度、淋巴结转移和浸润深度有关,增加KMT2D的表达水平后可减弱细胞增殖和侵袭能力,KMT2D有望成为治疗膀胱癌的有效靶点。

赖氨酸6-氨基转移酶合成条件的优化

以一株从土壤中分离、筛选到轮枝霉菌(Verticillium sp.)2-14为起始菌株,在摇瓶发酵水平上对其产赖氨酸6-氨基转移酶的条件,包括不同碳源、氮源、磷酸盐、表面活性剂等进行了优化,并对基本无机盐离子进行了正交实验分析.结果表明,该菌株产LAT最佳液体发酵培养基为:0·2%L-赖氨酸,3%可溶性淀粉,0·5%KH2PO4,0·1%MgSO4·7H2O.通过考察菌株生长与产酶进程发现,培养52h时酶活达到峰值1217U·L-1,与优化前相比,酶活力提高一倍.

赖氨酸甲基转移酶抑制剂研究进展

目的对赖氨酸甲基转移酶抑制剂的研究进展进行综述。方法通过系统的文献调研,以近年来的外文文献为依据描述了赖氨酸甲基转移酶与肿瘤的关系,以及小分子赖氨酸甲基转移酶抑制剂的研究进展。结果与结论目前已经涌现出大量的小分子化合物作为赖氨酸甲基转移酶抑制剂,部分已经进入临床前研究或作为抗肿瘤药物进入临床研究。