赖氨酸特异性脱甲基酶2B及B细胞淋巴瘤-2蛋白、Hrk蛋白在卵巢癌组织中的表达情况及其临床意义

目的 分析赖氨酸特异性脱甲基酶2B(KDM2B)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白、Hrk蛋白在卵巢癌中的表达情况及其临床意义。方法 收集20例正常卵巢组织、30例良性卵巢肿瘤组织以及50例恶性卵巢肿瘤组织。采用免疫组织化学法检测3种组织KDM2B、Bcl-2蛋白、Hrk蛋白的表达情况。比较不同临床病理特征的恶性卵巢肿瘤患者间3种蛋白表达的情况,并分析恶性卵巢肿瘤组织中3种蛋白表达的相关性。结果 恶性卵巢肿瘤组织的KDM2B、Bcl-2蛋白阳性表达率高于良性卵巢肿瘤组织及正常卵巢组织(均P<0.05),恶性卵巢肿瘤组织、良性卵巢肿瘤组织、正常卵巢组织的Hrk阳性表达率依次升高(均P<0.05)。低分化、国际妇产科联合会(FIGO)分期Ⅲ~Ⅳ期、淋巴结转移病例的KDM2B及Bcl-2蛋白阳性表达率均分别高于中-高分化、FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移病例(均P<0.05),而Hrk蛋白阳性表达率均分别低于中-高分化、FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移病例(均P<0.05)。不同年龄段病例的3种蛋白阳性表达率比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。在卵巢恶性肿瘤组织中,KDM2B、Bcl-2蛋白与Hrk蛋白的阳性表达率均呈负相关(均P<0.05)。结论 卵巢癌中KDM2B与Bcl-2蛋白的表达上调,Hrk蛋白的表达下调,三者可能通过不同的方式参与卵巢癌的发生发展。

赖氨酸特异性脱甲基酶2B与p21在卵巢癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨赖氨酸特异性脱甲基酶2B(KDM2B)与p21在卵巢癌组织中的表达及其临床意义。方法:采用回顾性研究方法,收集20例正常卵巢组织、33例良性卵巢组织和59例恶性卵巢组织。采用免疫组化和实时荧光定量PCR(qPCR)方法分别检测3种不同卵巢组织KDM2B和p21 mRNA及蛋白的表达情况,并分析两者在卵巢癌中的表达相关性及两者与卵巢癌患者临床病理特征的关系。结果:恶性卵巢组织中KDM2B mRNA及蛋白表达阳性率显著高于良性卵巢组织、正常卵巢组织(P<0.05),而p21 mRNA及蛋白表达阳性率显著低于良性卵巢组织、正常卵巢组织(P<0.05)。p21在低分化、FIGO分期Ⅲ~Ⅳ期及有淋巴结转移的卵巢癌组织中的蛋白表达阳性率低于中、高分化、FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移(P<0.05),而KDM2B蛋白表达情况相反(P<0.05)。在恶性卵巢组织中,KDM2B与p21蛋白表达呈负相关关系(r=-0.978,P=0.000)。结论:KDM2B在恶性卵巢组织中高表达,p21在恶性卵巢组织中低表达,两者均与肿瘤组织分级、FIGO分期及淋巴结转移有关。

赖氨酸特异性的去甲基化酶3A对内皮祖细胞功能的影响

目的探讨赖氨酸特异性的去甲基化酶3A(KDM3A)对内皮祖细胞(EPCs)增殖、迁移、管形成能力及分泌促血管生成细胞因子功能的影响。方法从同基因型成年雄性SD大鼠的后肢长骨中分离出骨髓单核细胞,EGM-2培养基诱导形成EPCs,将EPCs按完全随机设计的方法分为3组:空白组、Ad-GFP转染对照组和Ad-KDM3A转染处理组。分别用CCK-8、Transwell检测EPCs的增殖和迁移能力,基质胶检测EPCs的管形成能力。免疫印记法检测KDM3A蛋白的表达及EPCs分泌血管内皮生长因子(VEGF)和基质细胞衍生因子1(SDF-1)蛋白表达量,同时检测调控分泌机制相关的丝/苏氨酸蛋白激酶(Akt)、p-Akt蛋白的表达。结果与Ad-GFP转染对照组比较,Ad-KDM3A转染处理组下调KDM3A的表达可显著增强EPCs的增殖能力(1.393±0.058比1.031±0.059)、迁移能力(1.89±0.12比1.21±0.11)和管形成功能(1.552±0.109比1.027±0.038),同时EPCs合成和分泌的促血管生成细胞因子VEGF(0.738±0.029比0.153±0.003)和SDF-1(0.333±0.013比0.163±0.005)增多。与Ad-GFP转染对照组比较,Ad-KDM3A转染处理组下调KDM3A可使Akt蛋白表达增加(0.553±0.005比0.169±0.001)。结论下调KDM3A蛋白的表达可增强EPCs的增殖、迁移、管形成能力及分泌促血管生成细胞因子的功能,这可能与增加Akt蛋白表达有关。

胃癌组织赖氨酸特异性脱甲基酶2B表达与预后的相关性

目的观察胃癌组织赖氨酸特异性脱甲基酶2B(KDM2B)的表达情况及与预后的相关性。方法采用回顾性研究方法,选取2018年6月至2019年6月河北保定市解放军第八十二集团军医院收治的118例胃癌患者,采集患者的胃癌组织标本,采用免疫组织化学法对胃癌组织中的KDM2B表达情况进行检测,分析其与患者临床指标及预后的相关性。结果KDM2B在胃癌组织中表达占57.63%(68/118),与对照组胃黏膜的10.00%(5/50)比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。多因素Cox回归分析显示,患者组织学分型、淋巴结状态、TNM分期以及人表皮生长因子受体2(HER2)表达情况与KDM2B阳性表达密切相关;KDM2B阳性表达组5年生存率为22.06%(18/68),显著低于KDM2B阴性表达组的52.0%(26/50),差异具有统计学意义(P<0.05);KDM2B阳性表达组中位生存期为16个月,低于KDM2B阴性表达组的56个月,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论KDM2B在胃癌形成及发展中有着重要的参与作用,其表达与患者预后密切相关,应给予临床关注。

27位氨基酸三甲基化的组蛋白3(H3K27me3)及其修饰酶在小鼠不同组织中分布

目的研究出生后7日龄和2月龄小鼠各组织器官中27位氨基酸三甲基化的组蛋白3(H3K27me3)的水平及其修饰酶Zeste基因增强子同源物2(EZH2)、赖氨酸特异性脱甲基酶6B(Kdm6B/JMJD3)和赖氨酸特异性脱甲基酶6A(Kdm6A/UTX)的表达。方法免疫组织化学染色法检测7日龄和2月龄小鼠脑、涎腺、背部脂肪、胸腺、肺、心脏、胃、肠、肝、睾丸、皮肤组织中H3K27me3、EZH2、JMJD3和UTX表达,实时定量PCR验证,统计分析H3K27me3水平与EZH2、JMJD3和UTX表达之间的关系。结果 H3K27me3在7日龄和2月龄小鼠被检测组织中均持续存在;EZH2在7日龄和2月龄小鼠脑、心肌、肝及皮肤中表达,但仅在2月龄小鼠涎腺、肠、睾丸、肺、脂肪组织、胸腺中持续表达;JMJD3在7日龄小鼠脑、皮肤、涎腺、心肌、肠、睾丸、肺、脂肪组织、胃中表达,但在2月龄小鼠的肺、脂肪组织、胃中不再表达;UTX在7日龄小鼠的脑、皮肤、涎腺、心肌、睾丸、肺及脂肪组织中表达,但仅在2月龄小鼠睾丸中表达;大部分免疫组织化学染色阳性的H3K27甲基调节酶相应的mRNA呈中等或较高水平表达。结论 H3K27me3在小鼠不同时期各组织中均持续存在;EZH2多存在于2月龄小鼠脑、皮肤、涎腺、心肌、肠、睾丸、肺、脂肪组织、肝、胸腺;JMJD3、UTX多存在于7日龄小鼠脑、皮肤、涎腺、心肌、睾丸、肺、脂肪组织;H3K27me3分布与EZH2的表达之间无明显一致关系,与JMJD3或UTX不存在明显反向分布关系,EZH2与JMJD3或UTX的表达分布也不存在反向关系。提示EZH2、JMJD3和UTX在小鼠出生后多种组织中可能起重要作用;在体内H3K27me3水平及其修饰酶可能受多因素控制,以完成复杂的生理功能。

组蛋白赖氨酸甲基化的表观遗传图

组蛋白N末端有多种翻译后修饰,包括乙酰化,磷酸化,甲基化,泛素化和ADP-ribosylation,上述修饰酶以及选择性结合到位置特异性修饰组蛋白的染色质相关蛋白的发现揭示组蛋白末端修饰能明显扩大遗传密码的信息容量,另外它们显示还能为染色质区域充当很好的检索工具,促进表观遗传控制以及染色体的功能组织.

S期激酶相关蛋白2和赖氨酸特异性去甲基酶1双靶抑制剂的虚拟筛选

目的筛选S期激酶相关蛋白2(skp2)和赖氨酸特异性去甲基酶1(LSD1)双靶点抑制剂。方法采用计算机辅助药物设计,经过分子对接、虚拟筛选以及定量构效关系(QSAR)模型预测,从小分子数据库中筛选对两个靶点活性较好的化合物。结果与结论得到了6个对接打分较好的化合物。QSAR模型显示其对skp2和LSD1均有较理想的抑制效果,为后续skp2/LSD1双靶点抑制剂的开发提供了思路。

赖氨酸特异性脱甲基酶1在结直肠癌组织中的表达及其意义

本研究应用免疫组织化学方法检测结直肠癌组织中赖氨酸特异性脱甲基酶1（1ysine specific demet hylase1，LSDl）的蛋白表达，探讨其表达与结直肠癌的发生发展、分化程度以及转移之间的关系。

赖氨酸特异性去甲基化酶1增强胰腺癌PanC1细胞E3泛素连接酶对p16的抑制作用

目的观察胰腺癌PanC1细胞中组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1（LSD1）对E3泛素连接酶（Ring1B）抑制抑癌基因p16转录及表达作用的影响。方法通过采用短发夹RNA（shRNA）分别在PanC1细胞中敲除Ring1B（重复2组为shRing1B#1、#2）和LSD1基因（shLSD1#1、#2），未敲除组为shLuc，分别通过实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）和Western blot检测PanC1细胞LSD1、Ring1B和p16基因的表达；而后通过质粒转染过表达Ring1B，再敲除LSD1基因，检测PanC1细胞p16的表达。结果Ring1B基因敲除后RT-qPCR结果显示p16 mRNA转录增加，shRing1B#1、shRing1B#2（4.613±0.416、4.615±0.224）高于shLuc（1.010±0.032）（P＝0.000）；Western blot结果显示Ring1B基因敲除组p16蛋白表达增加；LSD1基因敲除后p16 mRNA转录和蛋白表达也增加，shLSD1#1、shLSD1#2组和shLuc组对应数值分别为4.704±0.503、3.885±0.011和1.008±0.027（P＝0.005）。Ring1B过表达的PanC1细胞中（Ring1B组），LSD1敲除组shLSD1＋vector组（5.893±0.986）高于对照组shLuc＋vector组（1.010±0.201）；shLSD1＋Ring1B组（0.695±0.031）高于shLuc＋Ring1B组（0.156±0.016）（P＝0.001）。结论LSD1与Ring1B协同作用，共同参与抑制胰腺癌p16的转录表达；LSD1能够增强Ring1B抑制p16转录的作用。

赖氨酸特异性脱甲基酶2B在胃癌组织表达及临床意义

目的探讨赖氨酸特异性脱甲基酶2B（KDM2B）在胃癌组织中表达及临床病理意义。方法选取有完整随访资料的胃癌组织标本236例，免疫组织化学法检测KDM2B在胃癌组织中的表达，并分析其与临床病理参数及预后的关系。结果KDM2B在胃癌组织中表达增高（58．9％，139／236），显著高于对照胃黏膜（11．4％，4／35）。KDM2B在胃癌组织中表达上调（χ2=25．690，P=0．000），KDM2B阳性表达与患者组织学分型、淋巴结状态、TNM分期和人表皮生长因子受体2（Her-2）表达明显相关（χ2=12．922、6．817、15．089、5．143，P=0．002、0．033、0．001、0．023），KDM2B阳性表达组胃癌患者5年生存率为22．3％，中位生存期为19个月，KDM2B阴性表达组胃癌患者5年生存率为49．5％，中位生存期为66个月[风险比（HR）=2．340，P=0．000]，Cox分析提示KDM2B是一个独立的预后参数。结论KDM2B参与冒痛发年发展．县一个神寺的予面后参斯．

赖氨酸特异性去甲基酶1反苯环丙胺类不可逆抑制剂的研究进展

组蛋白赖氨酸特异性去甲基酶1(LSD1)在调节组蛋白H3K4、H3K9的甲基化状态中起重要作用,在多种肿瘤细胞中高表达,已成为一种新型抗肿瘤靶点。目前为止,已报道的LSD1抑制剂中对反苯环丙胺(TCP)类抑制剂的研究相对更为深入。综述TCP类抑制剂的作用机制、与辅酶黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)结合模式及设计优化的研究进展。

FEN1、GTF2IP23、KDM4A在乳腺癌组织中的表达研究

目的探讨瓣状核酸内切酶-1(FEN1)、转录因子Ⅱⅰ假基因23(GTF2IP23)、赖氨酸特异性去甲基化酶4A(KDM4A)在乳腺癌组织中的表达及相关性。方法选取2020年7月至2021年8月进行手术的女性乳腺癌患者72例及同期进行手术的乳腺良性肿瘤患者70例,收集乳腺癌患者手术切除癌组织、距癌组织5 cm癌旁组织标本及乳腺良性肿瘤患者肿瘤病理组织,连续切片后做免疫组化标记、进行免疫组化染色。反转录-实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测FEN1表达,Western blot法检测GTF2IP23、KDM4A表达,分析FEN1、GTF2IP23、KDM4A在乳腺癌组织中的表达相关性及联合检测对乳腺癌患者预后的预测价值。结果与癌旁组织相比,良性肿瘤组织、乳腺癌组织中FEN1、GTF2IP23、KDM4A表达较高(P<0.05);乳腺癌组织中FEN1、GTF2IP23、KDM4A表达高于癌旁组织(P<0.05)。乳腺癌组织中FEN1、GTF2IP23、KDM4A表达与年龄、肿瘤直径、病理分期、淋巴结转移、脉管侵犯、分化情况密切相关(P<0.05)。乳腺癌组织中FEN1与GTF2IP23、KDM4A表达呈正相关(r=0.404、0.553,均P=0.001);GTF2IP23与KDM4A表达也呈正相关(r=0.582,P=0.001)。与FEN1、GTF2IP23、KDM4A单项检测相比,三项联合检测对乳腺癌患者预后预测的灵敏度提高,特异度降低;FEN1、GTF2IP23、KDM4A的曲线下面积(AUC)分别为0.691、0.659、0.708(P<0.05)。结论FEN1、GTF2IP23、KDM4A在乳腺癌组织中呈高表达,三者具有相关性,同时与乳腺癌患者病理特征密切相关,能够较好预测乳腺癌患者的预后,为临床诊断及治疗乳腺癌提供理论依据。

H3K36me3及其表观遗传修饰蛋白质SETD2和KDM4B在结直肠癌中的临床病理意义

目的:组蛋白修饰是表观遗传调控的一种重要形式。其中,组蛋白甲基化是染色质状态的关键决定因素。组蛋白H3第36位赖氨酸三甲基化产物(histone H3 trimethylation at lysine 36,H3K36me3)可以介导多种转录相关事件,有助于DNA损伤修复。组蛋白赖氨酸三甲基转移酶SET结构域2(SET domain containing 2,SETD2)、赖氨酸特异性去甲基化酶4B(lysine-specific demethylase 4B,KDM4B)分别是H3K36me3甲基转移酶及去甲基酶,SETD2失活及KDM4B活化均可下调H3K36me3水平从而促进肿瘤的发生和发展。本研究主要探讨H3K36me3、SETD2、KDM4B在结直肠癌中表达的临床病理意义。方法:收集2018年10月至2020年10月就诊于福建中医药大学附属人民医院的80例结直肠癌患者术后石蜡包埋的组织样本。采用免疫组织化学染色法检测H3K36me3、KDM4B、SETD2及4种错配修复(mismatch repair,MMR)蛋白质(MSH2、MSH6、MLH1、PMS2)在结直肠癌及正常肠黏膜中的表达水平。采用多重荧光PCR-毛细管电泳检测结直肠癌及正常肠黏膜的微卫星状态,分为微卫星高度不稳定性(microsatellite instability-high,MSI-H)组与微卫星稳定(microsatellite stable,MSS)组,检测2组结直肠癌中H3K36me3及SETD2、KDM4B、MMR蛋白质表达情况并分析其临床病理意义。结果:STED2、H3K36me3表达与结直肠癌发生呈负相关(分别为r=-0.745,P<0.001;r=-0.160,P<0.05),KDM4B表达与结直肠癌发生呈正相关(r=0.660,P<0.001)。不同的患者性别、年龄,不同的肿瘤发生部位、大体类型、肿瘤最大径、浸润深度、淋巴结转移的临床病理参数之间SETD2及H3K36me的表达差异均无统计学意义(均P>0.05),除在不同的肿瘤浸润深度KDM4B的表达差异有统计学意义(χ^(2)=0.349,P<0.05)外,在其他临床病理参数上KDM4B的表达差异均无统计学意义(均P>0.05)。结直肠癌样本中检测出14例为MSI-H结直肠癌、66例为MSS结直肠癌;SETD2及H3K36me3的表达均与结直肠癌微卫星状态相关(分别为χ^(2)=3.916,P<0.05及χ^(2)=41.608,P<0.001);KDM4B的表达与结直肠癌微卫星状态无明显相关性(χ^(2)=0.067,P>0.05)。SETD2及H3K36me3表达与MSI-H结直肠癌发生呈负相关(分别为r=-0.221,P<0.05及r=-0.721,P<0.001)。KDM4B表达与MSS结直肠癌发生呈正相关(r=0.200,P<0.05)。免疫组织化学染色结果显示13例(16.25%)为dMMR,67例(83.75%)为pMMR;PCR-毛细管电泳验证结果显示14例为MSI-H结直肠癌,其中13例为dMMR,1例为pMMR;66例为MSS结直肠癌。免疫组织化学染色与多重荧光PCR-毛细管电泳检测结果具有强一致率(Kappa=0.955)。结论:H3K36me3及其表观遗传修饰蛋白质SETD2和KDM4B蛋白质的不同表达程度与结直肠癌发生、发展具有相关性。

Wiskott-Aldrich综合征蛋白家族成员3对非小细胞肺癌侵袭转移的影响及机制研究

目的:探究Wiskott-Aldrich综合征蛋白家族成员3(WASF3-AS1)对非小细胞肺癌(NSCLC)侵袭转移的影响及机制。方法:选取26例临床不同病理分期NSCLC患者的癌组织和癌旁组织,以及NSCLC细胞系NCI-H1975细胞和正常肺支气管上皮细胞系HBE细胞为研究对象。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测上述临床组织和细胞系中WASF3-AS1、赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1(LSD1)、组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)、E-钙黏蛋白(E-ca)、N-钙黏蛋白(N-ca)的表达。采用CCK-8实验检测细胞增殖。采用划痕实验检测细胞迁移能力。采用Transwell实验检测细胞侵袭能力。采用Western blot检测LSD1、HDAC6、蛋白酪氨酸磷酸酶(PTEN)、蛋白激酶B(AKT)、E-ca和N-ca的表达。结果:与对照组比较,在NSCLC组织和细胞中,WASF3-AS1、LSD1、HDAC6、PTEN和E-ca低表达,AKT和N-ca高表达(均P<0.05);WASF3-AS1过表达能够促进LSD1和HDAC6并抑制PTEN/AKT信号,进而抑制NCI-H1975细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间充质转化(均P<0.05)。结论:ASF3-AS1可能通过招募LSD1和HDAC6到靶基因PTEN启动子区发挥抑制NSCLC细胞侵袭转移作用。

敲低KDM3A抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞的侵袭迁移并将细胞周期阻滞于G0/G1期

目的研究赖氨酸特异性去甲基化酶3A(KDM3A)对MDA-MB-231乳腺癌细胞侵袭与迁移的影响。方法采用实时定量PCR及Western blot法分别检测MDA-MB-231乳腺癌细胞与MCF-10A正常乳腺细胞KDM3A的mRNA和蛋白表达;采用KDM3A短发夹RNA(shKDM3A)慢病毒感染MDA-MB-231细胞敲低其KDM3A水平,Transwell^(TM)实验检测MDA-MB-231细胞的侵袭与迁移能力的改变,流式细胞术检测细胞周期的变化。结果与MCF-10A上皮细胞相比,乳腺癌MDA-MB-231细胞KDM3A表达明显增加;敲低KMD3A后,MDA-MB-231细胞的侵袭与迁移能力显著下降,细胞周期阻滞于G0/G1期。结论敲低KDM3A抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞的侵袭与迁移并将细胞周期阻滞于G0/G1期。

miR⁃29a⁃3p靶向KDM5B调控肾透明细胞癌增殖和侵袭

目的探究miR-29a-3p通过调控赖氨酸特异性去甲基化酶5B(lysine-specific demethylase 5B,KDM5B)的表达对肾透明细胞癌(kidney renal clear cell carcinoma,KIRC)增殖和侵袭的影响及临床意义。方法通过TCGA数据库数据分析不同分期KIRC患者中KDM5B的表达情况及对KIRC预后生存的影响;并利用TCGA数据分析不同分期KIRC患者中miR-29a-3p的表达情况及与KDM5B表达的相关性。采用脂质体转染技术分别将miR-29a-3p mimics、mimics-NC和miR-29a-3p inhibitor转染到KIRC 786-O和Caki-1细胞中,并定义为miR-29a mimic组、mimics NC组和Inhibitor组,采用RT-qPCR检测miR-29a-3p和KDM5B的表达水平,MTS检测细胞增殖能力,Transwell检测细胞侵袭能力。利用双荧光素酶报告基因实验验证miR-29a-3p和KDM5B的靶向关系。结果TCGA数据库分析结果显示,不同分期KIRC患者中KDM5B的表达差异最明显,KDM5B明显影响KIRC患者的预后(HR=2.882,P<0.001)。与KDM5B结合的miR-29a-3p在不同分期KIRC患者中表达差异最明显(P<0.001),且与KDM5B相关性最强(r=-0.283,P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-29a-3p可与KDM5B特异结合。过表达miR-29a-3p后,786-O、Caki-1细胞中KDM5B表达水平下调,细胞增殖能力下降,穿膜细胞数减少(均P<0.05);沉默miR-29a-3p后,KDM5B表达水平上调,细胞增殖能力升高,穿膜细胞数增多(均P<0.05)。结论miR-29a-3p可能通过下调H3K4去甲基化酶KDM5B的表达抑制KIRC细胞系786-O、Caki-1的增殖和侵袭。

miR-329通过负性调节KDM1A抑制胃癌细胞增殖及侵袭的机制研究

目的探讨miR-329通过负性调节KDM1A抑制胃癌细胞增殖及侵袭的机制。方法人胃腺癌细胞系(BGC-823)分为BGC-823癌细胞组、miR-329 mimics组、miR-329 inhibitor组,MTT测定BGC-823胃腺癌细胞增殖情况,结晶紫染色测定癌细胞单克隆形成数目,流式细胞仪测定胃癌细胞凋亡情况及细胞周期,Transwell细胞迁移实验测定胃癌细胞侵袭情况,RT-PCR法测定胃腺癌细胞miR-329、KDM1A mRNA水平,WEST-BLOT法测定癌细胞Caspase-3、Caspase-6、Caspase-9蛋白表达水平。结果miR-329 mimics组OD值、存活率、克隆形成数目、穿膜数低于BGC-823癌细胞组(P<0.05),miR-329 inhibitor组OD值、存活率、克隆形成数目、穿膜数高于BGC-823癌细胞组和miR-329 mimics组(P<0.05)。miR-329 mimics组细胞凋亡率、G1期、Caspase-3、Caspase-6、Caspase-9蛋白表达水平高于BGC-823癌细胞组(P<0.05),miR-329 inhibitor组细胞凋亡率、G1期、Caspase-3、Caspase-6、Caspase-9蛋白表达水平低于BGC-823癌细胞组和miR-329 mimics组(P<0.05)。miR-329 mimics组miR-329 mRNA表达水平高于BGC-823癌细胞组,KDM1A mRNA蛋白表达水平低于BGC-823癌细胞组(P<0.05),miR-329 inhibitor组miR-329 mRNA表达水平低于BGC-823癌细胞组和miR-329 mimics组,KDM1A mRNA蛋白表达水平高于BGC-823癌细胞组和miR-329 mimics组(P<0.05)。miRNA-329与KDM1A呈负相关,与Caspase-3、Caspase-6、Caspase-9呈正相关(P<0.05)。结论miR-329可抑制胃癌细胞增殖及侵袭,其机制与miR-329可能通过抑制KDM1A的表达导致Caspase-3、Caspase-6、Caspase-9高表达有关。

KDM6B通过MAPK信号通路调控肾癌细胞的增殖和迁移

目的研究赖氨酸特异性去甲基酶6B(KDM6B)表达对肾透明细胞癌增殖和迁移侵袭的影响。方法通过基因表达谱交互分析数据库分析KDM6B表达与肾透明细胞癌临床分期与预后的关系。将肾透明细胞癌患者的肿瘤组织石蜡切片进行KDM6B免疫组化染色并统计与临床病理特征的相关性,使用敲低对照小干扰RNA以及敲低KDM6B小干扰RNA对人肾透明细胞癌细胞株ACHN和Caki-1细胞分别进行转染,使用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)及Western blot验证转染效率,使用CCK8实验检测转染后肾透明细胞癌细胞增殖能力的变化,克隆形成实验检测细胞形成克隆的能力,使用Transwell实验检测细胞迁移侵袭能力的变化。使用Western blot实验检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中磷酸化的细胞外信号调节激酶蛋白(p-ERK)及细胞外信号调节激酶蛋白的表达水平。结果肾透明细胞癌组织中KDM6B的高表达与良好的疾病分期与预后密切相关。在两种细胞系中转染siKDM6B均能成功敲低KDM6B的表达。敲低KDM6B表达后肾透明细胞癌细胞ACHN和Caki-1的细胞增殖能力显著增强,细胞克隆形成能力明显增强,细胞迁移侵袭能力显著增强。敲低KDM6B表达后p-ERK表达水平显著增加。结论KDM6B抑制MAPK信号通路激活及肾透明细胞癌细胞进展,该蛋白可能成为诊断肾透明细胞癌的生物标记物以及治疗肾透明细胞癌的潜在靶点。

Ang-Ⅱ介导的铁死亡参与房颤触发及心衰进展的机制研究

目的:探讨赖氨酸脱甲基酶5B(KDM5B)/增强激活转录因子3(ATF3)信号通路在血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)诱导心脏肥大中的作用。方法:将小鼠心肌细胞HL-1分为以下处理组:对照组、Ang-Ⅱ组、Ang-Ⅱ+Lv-NC组、Ang-Ⅱ+Lv-KDM5B组和Ang-Ⅱ+Lv-KDM5B KD组。通过蛋白质印迹分析各组细胞中KDM5B、ATF3蛋白表达。通过荧光染色检测细胞内α-肌动蛋白(α-SMA)、Fe^(2+)和活性氧(ROS)水平。结果:与Ang-Ⅱ+Lv-NC组相比,Ang-Ⅱ+Lv-KDM5B组中HL-1细胞中KDM5B蛋白表达显著增加(P<0.05),和ATF3蛋白表达显著降低(P<0.05),而Ang-Ⅱ+Lv-KDM5B KD组中HL-1细胞中KDM5B蛋白表达显著降低(P<0.05),和ATF3蛋白表达显著增加(P<0.05)。与对照组相比,Ang-Ⅱ组和Ang-Ⅱ+Lv-NC组相对细胞大小、细胞内相对Fe^(2+)荧光强度、相对ROS荧光强度显著增加(P<0.05),和相对细胞活力显著降低(P<0.05)。与Ang-Ⅱ+Lv-NC组相比,Ang-Ⅱ+Lv-KDM5B组相对细胞大小、细胞内相对Fe^(2+)荧光强度、相对ROS荧光强度显著增加(P<0.05),和Ang-Ⅱ+Lv-KDM5B KD组相对细胞大小、细胞内相对Fe^(2+)荧光强度、相对ROS荧光强度显著降低(P<0.05)。结论:KDM5B/ATF3驱动Ang-Ⅱ诱导的心肌肥大的进展,并促进对肥大性应激反应相关的铁死亡。

鼻咽癌血清比较蛋白质组学研究

目的采用双向电泳-质谱技术优化肿瘤抗原筛选方法,筛选鼻咽癌肿瘤抗原。方法鼻咽癌转移组、鼻咽癌未转移组和正常对照组血清先采用高丰度蛋白去除、脱盐预处理等以优化双向电泳,图像分析3组血清图谱寻找差异蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对差异蛋白质点进行鉴定。结果通过调整、优化各个阶段的实验条件,实验结果比较稳定,重复性也比较好,分辨率得到一定的提高。图谱比较所得29个差异蛋白质点,成功鉴定了23种蛋白质。与正常组比较,转铁蛋白、锌指蛋白544、甲状腺激素结合蛋白、NM23-H1蛋白和FAD合成酶在两组鼻咽癌患者中低表达,12-脂氧合酶、血清淀粉样蛋白A1前体、细胞色素P450、sICAM-1、组织蛋白酶G和组蛋白赖氨酸特异性脱甲基酶1等在两组鼻咽癌中均高表达,其中12-脂氧合酶、sICAM-1、组织蛋白酶G和组蛋白赖氨酸特异性脱甲基酶1在鼻咽癌转移组中比未转移组中表达增高,而热休克蛋白70则只在鼻咽癌转移组表达。结论双向电泳-质谱技术可发现鼻咽癌发生发展过程中血清蛋白表达谱质或量的变化,从而为鼻咽癌的早期诊断和治疗奠定基础。