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断裂型内含肽Npu DnaE的C端序列赖氨酸突变对其剪接活性的影响
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作者 张敬仪 朱建伟 张宝红 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期1719-1725,共7页
断裂型内含肽Nostoc punctiforme(Npu)DnaE作为一种为构建抗体-药物偶联物(ADC)过程中实现定点偶联的工具,其C端序列中的赖氨酸对其剪接活性有较大影响。该研究对断裂型内含肽Npu DnaE C端序列中的赖氨酸进行定点突变,得到了5种氨基酸(... 断裂型内含肽Nostoc punctiforme(Npu)DnaE作为一种为构建抗体-药物偶联物(ADC)过程中实现定点偶联的工具,其C端序列中的赖氨酸对其剪接活性有较大影响。该研究对断裂型内含肽Npu DnaE C端序列中的赖氨酸进行定点突变,得到了5种氨基酸(精氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、谷氨酸和甲硫氨酸)取代的多肽序列,以探究不同氨基酸取代对其剪接活性的影响。结果显示分别由精氨酸、谷氨酰胺和甲硫氨酸3种氨基酸取代赖氨酸的内含肽C端序列保持了剪接活性,其中精氨酸取代的内含肽C端序列剪接效率较高。采用精氨酸取代的内含肽C端序列制备了ADC HER2-Lc-SMCCDM1,经检测其保有抗原亲和力和抗肿瘤活性。该研究结果为ADC的定点偶联和基于内含肽设计、改造蛋白质或多肽连接合成相关研究提供了技术支撑。 展开更多
关键词 Npu DnaE 断裂型内含肽 赖氨酸突变 剪接活性 抗体-药物偶联物
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组蛋白变体H3.3 L27M突变与胶质瘤发生 被引量:4
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作者 隋爱霞 王泽阳 郭晓强 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期635-640,共6页
组蛋白变体在基因表达等基本细胞过程中发挥重要调节功能。人类有5种H3变体,分别为H3.1、H3.2、H3.3、着丝粒特异性CENP-A和睾丸特异性H3t。人H3.3由H3F3A和H3F3B两个基因编码。采用DNA全基因组测序法在儿童高级别胶质瘤如恶性胶质瘤(G... 组蛋白变体在基因表达等基本细胞过程中发挥重要调节功能。人类有5种H3变体,分别为H3.1、H3.2、H3.3、着丝粒特异性CENP-A和睾丸特异性H3t。人H3.3由H3F3A和H3F3B两个基因编码。采用DNA全基因组测序法在儿童高级别胶质瘤如恶性胶质瘤(GBM)和弥漫性内在脑桥胶质瘤(DIPG)鉴定出高频的H3F3A突变。超过70%DIPG和30%GBM携带H3.3 K27M氨基酸错义突变(27位赖氨酸被甲硫氨酸代替)。H3.3 K27M通过与组蛋白H3K27甲基转移酶EZH2亚基相互作用而抑制多梳抑制复合物2(PRC2)活性并全面减少H3K27me3含量。因此,H3.3 K27M突变重塑了表观修饰状态和基因表达模式,从而驱动肿瘤发生。K27M突变可作为分子标志物以更好区分儿童胶质瘤亚型,还可作为特异、敏感的预后标志物。通过抑制组蛋白去甲基化酶如JMJD3活性而增加H3K27甲基化可作为K27M突变胶质瘤治疗的有效策略。本文综述了组蛋白变体H3.3 K27M在胶质瘤中的突变模式、分子机制和临床应用。 展开更多
关键词 组蛋白变体H3.3 -27-甲硫突变 H3K27甲基化 胶质瘤
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儿童H3K27M突变型胶质瘤病理分子机制及靶向药物研究进展
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作者 邓后亮 李亚冰 +3 位作者 杨金连 魏媛怡 梁倩莹 何艳玲 《医学综述》 CAS 2022年第10期1917-1922,共6页
胶质瘤是儿童最常见的颅内肿瘤,与成人胶质瘤相比有其独特的发病机制。儿童组蛋白H3第27位赖氨酸(H3K27M)突变型胶质瘤恶性程度极高,目前尚无有效的治疗手段,手术切除联合常规放化疗难以改善其预后。儿童H3K27M突变型胶质瘤的发生发展... 胶质瘤是儿童最常见的颅内肿瘤,与成人胶质瘤相比有其独特的发病机制。儿童组蛋白H3第27位赖氨酸(H3K27M)突变型胶质瘤恶性程度极高,目前尚无有效的治疗手段,手术切除联合常规放化疗难以改善其预后。儿童H3K27M突变型胶质瘤的发生发展与肿瘤细胞表观遗传调控紊乱导致的基因表达谱改变密切相关。H3K27M突变对细胞基因表达谱具有全局性的影响,然而其影响胶质瘤发生发展的分子机制尚未完全阐明。此外,表观遗传药物、细胞周期抑制剂等靶向药物对H3K27M突变型胶质瘤具有潜在的治疗效果,但目前均尚未应用于临床。因此,需进一步深入研究H3K27M突变型胶质瘤的病理机制和靶向药物,以为有效治疗该疾病提供理论基础。 展开更多
关键词 儿童胶质瘤 组蛋白H3第27位赖氨酸突变 表观遗传调控 靶向治疗
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玉米o16基因回交渗入o2系的分子标记辅助选择 被引量:12
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作者 张文龙 杨文鹏 +3 位作者 陈志伟 王明春 杨留启 蔡一林 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1302-1309,共8页
在高赖氨酸玉米育种中,主要是以玉米opaque-2(o2)突变体作供体回交转育培育亲本材料,再行培育高赖氨酸杂交种。但是,迄今培育的o2玉米系及其杂交种的籽粒赖氨酸含量约为0.4%,不能满足食用和饲用的需求。为了提高o2玉米的赖氨酸含量,本... 在高赖氨酸玉米育种中,主要是以玉米opaque-2(o2)突变体作供体回交转育培育亲本材料,再行培育高赖氨酸杂交种。但是,迄今培育的o2玉米系及其杂交种的籽粒赖氨酸含量约为0.4%,不能满足食用和饲用的需求。为了提高o2玉米的赖氨酸含量,本研究利用一个新的高赖氨酸突变基因opaque-16(o16)的载体QCL3021作供体,o2玉米系太系19为受体,将o16基因回交渗入o2玉米系。在回交的每一世代及随后的自交世代,用o2基因内的SSR标记umc1066和o16基因的连锁SSR标记umc1141进行前景选择,再对中选单株进行全基因组SSR标记的背景选择,最后用染料结合赖氨酸法测定籽粒赖氨酸含量,以便保证筛选出遗传背景恢复率和赖氨酸含量均高的目标单株。在BC2F4代,获得携带o2和o16基因的家系17个,其遗传背景与o2玉米系相当(恢复率为92%~95%),赖氨酸含量为0.469%~0.599%。其赖氨酸含量比普通玉米平均提高约122.63%;比高值亲本太系19(o2o2)平均提高22.33%,增幅为6.11%~35.52%;比低值亲本QCL3021(o16o16)平均提高65.86%,增幅为43.87%~83.74%。表明采用标记辅助选择技术将o16基因回交导入o2玉米,能有效提高玉米籽粒的赖氨酸含量,对高赖氨酸玉米的遗传改良和育种具有重要意义。 展开更多
关键词 分子标记辅助选择 回交 赖氨酸突变 o16 O2 玉米
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Nutritional Quality of the Maize Combinations with Mutant Gene opaque-2 (o2)
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作者 宋丽雅 陈亮 +4 位作者 何聪芬 赵刚 白鹏飞 陈岩 常驰 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2012年第6期1179-1183,1202,共6页
[Objective] This study aimed to investigate the action of mutant gene o2 and its effect on nutritional quality of different maize combinations. [Method] A total of 33 normal maize combinations from 18 inbred lines wer... [Objective] This study aimed to investigate the action of mutant gene o2 and its effect on nutritional quality of different maize combinations. [Method] A total of 33 normal maize combinations from 18 inbred lines were compared with 33 combinations including gene o2 from the corresponding o2 near-isogenic lines (o2-NILs), to study the effect of o2 gene introduction on maize grain quality. [Result] The contents of lysine, protein and oil in o2-NILs were greatly more than that of normal maize combinations. Except for lysine, contents of other 14 amino acids changed when o2 gene was introduced. Contents of aspartic acid, threonine, glycine, isoleucine, histidine, arginine and proline were improved; while contents of serine, glutamic acid, alanine, valine, leucine, tyrosine and phenylalanine were decreased. Correlation analysis showed that contents of aspartic acid, arginine and threonine had the highest correlation with lysine content. Protein and oil contents had higher correlation with lysine content (0.48 and 0.38). Analysis of 33 o2-NILs revealed that the o2 combinations CAL58×Ji477and CA156×196 showed high comprehensive quality and high yield with greater development potential. [Conclusion] This study will provide theoretical and material basis for improving the quality of temperate maize germplasm by introducing o2 gene. 展开更多
关键词 Corn Opaque-2 homozygous recessive mutant gene (o2) LYSINE Amino acids Protein
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弗氏志贺菌ΔlysA突变株的构建及SILAC技术的应用尝试
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作者 李月玥 刘先凯 +3 位作者 冯尔玲 王恒樑 陈福生 朱力 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期345-350,共6页
目的构建弗氏2a志贺菌301株赖氨酸营养缺陷型突变株,为将细胞培养条件下稳定同位素标记(SILAC)技术应用于志贺菌蛋白质组学研究奠定基础。方法采用λ-Red重组系统对弗氏2a志贺菌301株lysA基因进行缺失,对野生株和突变株进行基本的表型... 目的构建弗氏2a志贺菌301株赖氨酸营养缺陷型突变株,为将细胞培养条件下稳定同位素标记(SILAC)技术应用于志贺菌蛋白质组学研究奠定基础。方法采用λ-Red重组系统对弗氏2a志贺菌301株lysA基因进行缺失,对野生株和突变株进行基本的表型测评和毒力评价,并利用双向电泳技术比较二者在全菌蛋白表达谱上的差异,最后将突变株分别在含有12C6-赖氨酸和13C6-赖氨酸的培养基中培养,根据双向电泳胶图取对应蛋白点进行胶内酶切及MALDI-TOF/TOF分析。结果成功构建了301 lysA基因缺失突变株,蛋白鉴定结果显示所取对应蛋白点为同一蛋白,在质谱图上轻重同位素峰位移为6 amu。结论本研究所构建的赖氨酸营养缺陷型突变株适合进行SILAC分析。 展开更多
关键词 志贺菌 弗氏 营养缺陷型突变 基因缺失 λ-Red重组系统 双向电泳 SILAC
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