乳腺癌患者不同病理特征中H3K9ac、PD-L1、VISTA表达及其联合检测对乳腺癌不良预后的预测价值

目的探讨乳腺癌患者不同病理特征中组蛋白H3第9位赖氨酸残基乙酰化(H3K9ac)、程序性死亡因子配体1(PD-L1)、T细胞激活抑制物免疫球蛋白的可变区结构域(VISTA)及其联合检测对乳腺癌不良预后的预测价值。方法选取2018年5月至2020年7月平顶山市第一人民医院收治的130例乳腺癌患者,免疫组化检测乳腺癌组织及癌旁组织中H3K9ac、PD-L1及VISTA表达情况。比较乳腺癌组织、癌旁组织中H3K9ac、PD-L1及VISTA表达情况;比较乳腺癌不同病理特征中H3K9ac、PD-L1及VISTA表达情况;随访3 a,根据是否发生转移、复发、死亡分为预后不良和预后良好;比较预后不良和预后良好乳腺癌患者H3K9ac、PD-L1及VISTA表达情况;分析H3K9ac、PD-L1、VISTA表达联合检测对乳腺癌不良预后的预测价值。结果乳腺癌组织中H3K9ac、PD-L1、VISTA高表达率均高于癌旁组织(P<0.05);不同组织分化程度、T分期、N分期、阳性淋巴细胞数目中H3K9ac、PD-L1、VISTA高表达率比较,差异有统计学意义(P<0.05);随访3 a,130例乳腺癌患者失访7例(5.38%),预后不良22例,预后良好101例。预后不良患者H3K9ac、PD-L1、VISTA高表达率高于预后良好患者(P<0.05);H3K9ac、PD-L1、VISTA联合检测预测乳腺癌患者不良预后的AUC为0.902,大于各指标单独预测的0.714、0.866、0.781(P<0.05)。结论乳腺癌患者癌组织中H3K9ac、PD-L1及VISTA均呈高表达,其高表达与分化程度、分期、淋巴细胞数目等病理特征相关,H3K9ac、PD-L1、VISTA联合检测对乳腺癌患者不良预后具有较高的预测价值。

小檗碱靶向HDAC/H3K9ac/KLF4抑制棕榈酸诱导的HepG2脂肪变性体外实验研究

目的探讨小檗碱(BBR)调控HDAC/H3K9ac/KLF4对棕榈酸(PA)诱导的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)细胞模型的保护作用及其可能的机制。方法应用PA诱导HepG2细胞构建NAFLD细胞模型,采用油红O染色法测定细胞脂肪变,采用Western blot法检测细胞HDAC1、H3K9ac、KLF4、SREBP-1c和PPARγ表达,使用染色质免疫沉淀技术(ChIP)测定KLF4启动子区H3K9ac水平,采用ELISA检测细胞培养上清细胞因子,采用SiRNA技术沉默KLF4基因验证BBR靶向HDAC/H3K9ac/KLF4对PA诱导的HepG2细胞脂肪变的保护作用。结果与模型组比,BBR处理使PA诱导的HepG2细胞脂质沉积显著改善,培养上清TNF-α、IL-1β和IL-6水平分别为(514.7±46.4)pg/ml、(241.5±37.7)pg/ml和(362.7±19.9)pg/ml,均显著低于模型组【分别为(1162.0±110.8)pg/ml、(635.8±73.4)pg/ml和(1110.0±85.1)pg/ml,P<0.001】;与模型组比,BBR干预组HDAC1蛋白表达降低了19.0%,而H3K9ac和KLF4蛋白表达增加了1.53倍和1.52倍,KLF4启动子区H3K9ac水平增加了3.97倍,脂质合成相关基因SREBP-1c蛋白表达降低了49.1%,脂质分解相关基因PPARγ蛋白表达增加了1.84倍;与空质粒转染组比,转染真核表达质粒细胞HDAC1蛋白表达水平增加了2.02倍,而H3K9ac蛋白表达水平降低了57.1%;与SiRNA-NC转染组比,转染SiRNA-KLF4的HepG2细胞KLF4蛋白表达水平显著下降(P<0.01),而细胞脂质沉积显著增加,培养上清TNF-α、IL-1β和IL-6水平分别为(887.9±89.9)pg/ml、(471.9±38.4)pg/ml和(793.1±59.3)pg/ml,均显著高于SiRNA-NC转染组【分别为(534.2±46.1)pg/ml、(260.3±26.9)pg/ml和(372.0±30.6)pg/ml,P<0.01】,脂质合成相关基因SREBP-1c蛋白表达增加了1.77倍,而脂质分解相关基因PPARγ蛋白表达降低了41.6%。结论本研究结果提示BBR可能通过调节PA诱导的HepG2细胞HDAC/H3K9AC表达,激活了KLF4,抑制了细胞内炎症反应和脂质沉积,为临床干预NAFLD提供了新的思路。

三阴性乳腺癌组织H3K4me3、H3K9ac表达与临床病理特征和预后的关系

目的探讨三阴性乳腺癌(TNBC)组织组蛋白H3第4位赖氨酸三甲基化(H3K4me3)、组蛋白H3第9位赖氨酸残基乙酰化(H3K9ac)表达与临床病理特征和预后的关系。方法选择TNBC患者145例,收集术中切除的TNBC组织,采用免疫组化法检测H3K4me3、H3K9ac和Ki-67表达,分析TNBC组织H3K4me3、H3K9ac表达与临床病理特征、Ki-67表达强度以及预后的关系。结果145例份TNBC组织中,H3K4me3高表达84例份、低表达61例份,H3K9ac高表达78例份、低表达67例份。TNBC组织H3K4me3、H3K9ac表达均与T分期、N分期和组织分化程度有关(P均<0.05),而与年龄、绝经状态、肿瘤直径、病理类型无关(P均>0.05)。随着Ki-67表达强度增加,TNBC组织H3K4me3、H3K9ac阳性表达逐渐增多(P均<0.05)。TNBC组织H3K4me3高表达者与低表达者3年累积生存率分别为60.7%、78.7%,H3K9ac高表达者与低表达者3年累积生存率分别为58.3%、82.0%,TNBC组织H3K4me3、H3K9ac高表达者3年累积生存率均显著低于其低表达者(P均<0.05)。结论TNBC组织H3K4me3、H3K9ac高表达,其高表达与肿瘤侵袭、转移以及患者预后不良密切相关。

乌司他丁对50％总体表面积烫伤大鼠心肌保护作用的研究

目的：研究乌司他丁（ ulinastatin， UTI）对50％总体表面积烫伤大鼠心肌的保护作用及其与保护性蛋白表达的关系。方法40只雄性SD大鼠随机分为烫伤组（ n＝20）和乌司他丁组（ n＝20），两组动物均造成50％总体表面积Ⅲ度烫伤，烫伤后即刻静脉分别注射生理盐水和乌司他丁40000 U／kg。于烫伤后6 h和24 h取大鼠腹主动脉血，测定血浆肌酸激酶同工酶（ CK－MB）活性，采用干／湿质量法测定心肌组织含水量，用酶联免疫吸附法（ ELISA）检测心肌组织热休克蛋白70（HSP70）的含量，用蛋白质免疫印迹法（Western blot）测定心肌细胞中乙酰化组蛋白H3赖氨酸9（Ac－H3K9）表达。结果烫伤后6 h乌司他丁组CK－MB和心肌组织含水量分别为[（1638．3＆#177;339．2）U／L和（68．14＆#177;1．93）％]，显著低于烫伤组[（2271．8＆#177;350．9）U／L和（83．02＆#177;2．12）％]（P＜0．05）；伤后24 h上述指标两组比较差异无统计学意义（P＞0．05）。伤后6 h乌司他丁组心肌HSP70和Ac－H3K9表达水平均显著高于烫伤组（P＜0．05或P＜0．01）。伤后24 h上述指标两组比较差异无统计学意义（P＞0．05）。结论乌司他丁能减轻致死性烫伤大鼠早期的心肌损害，减轻组织水肿，其机制可能与乌司他丁能增加大鼠心肌保护性蛋白表达，提高对烧伤的耐受力有关。

H3K9me2调控核苷酸切除修复相关基因转录在亚砷酸钠致L-02细胞DNA损伤中的作用

目的了解不同剂量亚砷酸钠(NaAsO2)对正常人肝细胞(L-02细胞)核苷酸切除修复(NER)相关基因mRNA转录水平及其启动子区组蛋白H3第9位赖氨酸二甲基化(H3K9me2)修饰水平的影响。方法以0(对照)、5、10、20μmol/L的NaAsO2处理L-02细胞24 h(n=3),采用单细胞凝胶电泳法(SCGE)检测L-02细胞DNA损伤情况[Olive尾距(OTM)、尾部DNA百分含量(Tail DNA%)];实时荧光定量PCR法检测NER相关基因着色性干皮病(XP)基因A(XPA)、XP基因D(XPD)、XP基因F(XPF)mRNA表达水平;定量染色质免疫沉淀(CHIP)技术检测XPA、XPD、XPF启动子区(CHIP1、CHIP2)H3K9me2修饰水平。结果OTM、Tail DNA%水平与染砷剂量均呈正相关(对照和5、10、20μmol/L染砷组分别为0.35±0.09、0.56±0.18、3.18±0.31、4.52±0.55,0.72±0.05、1.34±0.26、3.93±0.43、5.47±0.65,r=0.927、0.948,P均<0.05)。与对照组比较,10、20μmol/L染砷组L-02细胞XPA、XPD、XPF mRNA表达水平均较低(P均<0.05)。与对照组比较,20μmol/L染砷组L-02细胞XPA、XPD、XPF启动子区(CHIP1、CHIP2)H3K9me2富集水平均较高(P均<0.05)。结论砷通过增加NER相关基因启动子区(CHIP1、CHIP2)H3K9me2富集水平,抑制NER相关基因转录,进而降低L-02细胞DNA损伤修复能力,导致DNA损伤加重。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸钠对致死性烫伤大鼠脑损伤保护作用的研究

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸钠对50%总体表面积(TBSA)Ⅲ度烫伤大鼠脑损伤的保护作用。方法采用随机数字表法将80只清洁级雄性SD大鼠随机分为4组:假伤对照组,单纯烫伤组,2-甲基-2-戊烯酸(2M2P)组和丙戊酸钠(VPA)组,每组20只。假伤对照组大鼠浸入37℃水浴中制备假伤模型,单纯烫伤组、2M2P组和VPA组采用96℃水浴浸泡大鼠背部15 s、双下肢15 s、腹部8 s,制作50%TBSAⅢ度烫伤模型。烫伤后即刻,2M2P组和VPA组分别腹腔注射300 mg/kg 2M2P和VPA,假伤对照组和单纯烫伤组分别腹腔注射3 mL/kg 0.9%氯化钠溶液。各组大鼠分别于烫伤后4、8 h 2个时间点以腹主动脉采血法被处死,断脑取脑组织,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测脑组织S-100β蛋白表达水平,干/湿重法测定大鼠脑组织含水率,采用蛋白质印迹法检测脑组织中热休克蛋白(HSP)70、组蛋白H3赖氨酸9位乙酰化(H3K9ac)及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的蛋白表达水平。另取80只大鼠用于观察各组烫伤后4、24 h生存率(大鼠分组、烫伤模型制备以及治疗方案同上)。数据比较采用单因素方差分析、t检验和χ2检验。结果烫伤后4、8 h,4组大鼠脑组织S-100β蛋白水平和含水率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。烫伤后4、8 h,单纯烫伤组、2M2P组和VPA组大鼠脑组织S-100β蛋白表达水平和含水率与假伤对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);烫伤后4、8 h,2M2P组和VPA组大鼠S-100β蛋白表达水平和含水率与单纯烫伤组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);烫伤后4、8 h,VPA组脑组织S-100β蛋白表达水平分别为(0.54±0.05)、(0.79±0.05)μg/L,与2M2P组[(1.02±0.07)、(1.41±0.08)μg/L]比较均显著降低,差异均有统计学意义(t=2.369、2.251,P<0.05)。烫伤后4、8 h,VPA组脑组织含水率分别为(78.62±0.58)%、(81.25±0.57)%,与2M2P组[(80.15±0.64)%、(83.15±0.61)%]比较均显著降低,差异均有统计学意义(t=2.054、2.191,P<0.05)。烫伤后4、8 h,4组大鼠脑组织HSP70、H3K9ac、HIF-1α蛋白表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。烫伤后4、8 h,单纯烫伤组、2M2P组和VPA组大鼠脑组织HSP70、H3K9ac、HIF-1α蛋白表达水平与假伤对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。烫伤后4、8 h,2M2P组和VPA组大鼠脑组织HSP70、H3K9ac、HIF-1α蛋白水平与单纯烫伤组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);烫伤后4、8 h,VPA组大鼠脑组织HSP70蛋白水平分别为0.63±0.05、0.81±0.04,与2M2P组(0.41±0.03、0.59±0.04)比较,VPA组大鼠脑组织HSP70蛋白水平升高更显著,差异均有统计学意义(t=2.413、2.152,P<0.05);烫伤后4、8 h,VPA组大鼠脑组织H3K9ac蛋白水平分别为1.26±0.09、1.58±0.07,与2M2P组(1.06±0.06、1.24±0.07)比较升高更显著,差异均有统计学意义(t=2.031、2.167,P<0.05);烫伤后4、8 h,VPA组HIF-1α蛋白表达水平分别为2.23±0.21、1.86±0.23,与2M2P组(3.01±0.24、2.74±0.21)比较均显著降低,差异均有统计学意义(t=2.157、2.425,P<0.05)。烫伤后4、24 h,单纯烫伤组大鼠的存活率为80.0%(16/20)和0(0/20);2M2P组为90%(18/20)和20%(4/20);VPA组为100%(20/20)和40%(8/20)。烫伤后4、24 h,VPA组和2M2P组大鼠存活率均显著高于单纯烫伤组,差异均有统计学意义(χ2=11.31、11.96,P<0.05)。烫伤后4、24 h,VPA组大鼠存活率均高于2M2P组,差异均有统计学意义(χ2=11.32、12.05,P<0.05)。结论VPA能减轻50%TBSAⅢ度烫伤大鼠的脑损伤并提高生存率,其机制可能与VPA降低脑组织S-100β的蛋白表达水平和脑组织含水率,促进脑组织HSP70和H3K9ac蛋白表达和抑制HIF-1α的活性有关。

乌司他丁对致死性烫伤大鼠心肌Ac-H3K9表达的影响及意义

目的研究乌司他丁对致死性烫伤大鼠心肌乙酰化组蛋白H3赖氨酸9(Ac-H3K9)表达水平的影响及意义。方法 80只雄性SD大鼠按随机数字表法分为烫伤组和乌司他丁组(n=40),采用80℃水浴浸泡背部15 s、双下肢15 s、腹部8 s,两组动物均造成50%总体表面积Ⅲ度烫伤大鼠模型。烫伤后即刻静脉分别注射生理盐水和乌司他丁40 000 U/kg。各组分别于烫伤后4 h取大鼠腹主动脉血,测定血浆肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平;然后处死动物取心肌组织,用光学显微镜观察大鼠心肌组织的病理改变;用蛋白质免疫印迹法(Western blot)测定心肌细胞中Ac-H3K9的表达。结果与单纯烫伤组伤后4 h CK-MB[(1 571.8±251.4)U/L]相比,烫伤后4 h乌司他丁组为(938.3±140.7)U/L,显著降低(P<0.05);伤后4 h乌司他丁组Ac-H3K9表达水平均显著高于烫伤组(P<0.05)。结论乌司他丁能对致死性烫伤大鼠早期的心肌损害早期有保护作用,其机制可能与乌司他丁能增加心肌保护性蛋白Ac-H3K9的表达有关。

乌司他丁对烫伤大鼠脑组织的保护作用及其可能机制

目的 探讨乌司他丁对烫伤大鼠脑组织的保护作用及其可能机制.方法 40只雄性SD大鼠按随机数字表法随机分为单纯烫伤组和乌司他丁组各20只,均造成50％总体表面积Ⅲ度烫伤,烫伤后即刻分别静脉注射生理盐水和乌司他丁4万U/kg.于烫伤后6h和24h断脑取材,用酶联免疫吸附（ELISA）法检测脑组织神经元特异性烯醇化酶（NSE）和热休克蛋白70（HSP70）的含量,Western印迹法测定脑组织中乙酰化组蛋白H3赖氨酸9（Ac-H3K9）表达,干／湿重法测定脑组织含水率.结果 伤后6h乌司他丁组脑组织匀浆中NSE含量和脑组织含水率均显著低于单纯烫伤组[（146＆#177;11）比（156＆#177;13） pg/ml和（77.3＆#177;1.9）％比（79.0 ＆#177;2.2）％],HSP70含量和Ac-H3K9相对表达量均显著高于单纯烫伤组[（99士19）比（92＆#177;13） pg/ml和（1.26＆#177;0.37）比（0.57＆#177;0.23）]（均P＜0.05）.伤后24 h乌司他丁组NSE含量显著低于单纯烫伤组[（141＆#177;14）比（159＆#177;10） pg/ml,P＜0.05],而含水率、HSP70含量、Ac-H3K9表达水平差异均无统计学意义[（75.9＆#177;1.2）％比（76.5＆#177;1.4）％、（118＆#177;17）比（102＆#177;16） pg/ml、（2.31＆#177;0.27）比（1.87＆#177;0.31）,均P＞0.05].结论 乌司他丁能减轻致死性烫伤大鼠早期的脑组织损害,可能与其能增加脑组织保护性蛋白表达有关.