‘赞皇枣’黑腐病菌拮抗芽胞杆菌的筛选及发酵条件优化

以‘赞皇枣,黑腐病主要病原菌链格孢菌[Alternaria alternata （Fries） Keissler]为靶标,对具有较强抗真菌活性的10株芽胞杆菌进行室内多重筛选,并采用二次回归正交旋转设计和单因素试验对筛选获得的目标菌分别进行发酵培养基优化和最佳发酵条件确立.结果表明：芽胞杆菌B07对靶标菌拮抗作用良好,活体拮抗抑菌带宽度达（8.00±0.50）mm,无菌发酵滤液抑菌圈直径为（24.44±1.37）mm,且有良好的持久性,具有开发应用价值;B07发酵的最优培养基为：红薯粉2 g/L,牛肉膏10 g/L,NaCl 10 g/L,MnSO40.02 g/L;最佳发酵条件为：种子液浓度1.5×107～2.0×108cfu/mL时,接种量5％（V/V）,装液量40 mL/250 mL,原始pH7.0,发酵温度32℃,时间72h.

赞皇枣黑腐病菌拮抗链霉菌的室内多重筛选及发酵条件优化

【目的】本研究旨在获得对赞皇枣黑腐病菌具有良好抑制作用的拮抗链霉菌,并对其发酵培养基配方和条件进行优化,以期为进行田间试验和开发生防制剂奠定基础。【方法】以赞皇枣黑腐病优势病原真菌—细极链格孢菌为靶标采用琼脂块法、牛津杯法和含药平板法对从特殊生境分离获得的10株抗真菌链霉菌进行室内多重筛选并采用二次回归正交旋转设计和单因素试验对筛选获得的拮抗链霉菌分别进行发酵培养基优化和最佳发酵条件确立【结果】活体筛选试验中菌株AC03,AC04和AC07表现出了明显的拮抗效果,抑菌圈直径分别为(32.09±1.45),(15.75±1.34),(18.33±0.78)mm;上述3株菌的无菌发酵滤液活性测定表明:菌株ACO3、ACO7的抑菌圈直径分别为(20.94±0.92)和(23.44±1.63)mm,而菌株ACO4仅为(14.5±0.71)mm;对菌株ACO3和ACO7进行无菌发酵滤液的菌丝生长抑制试验结果表明:菌株ACO7代谢产生的拮抗物质抑菌效果、持效性均优于ACO3。综上可知菌株ACO7对赞皇枣黑腐病菌的抑菌效果最优。ACO7的最优发酵培养基配方为:麦芽糖5.7%,大豆粉2.7%,(NH4)2SO40.17%,CaCO30.22%NaCl0.17%,酵母粉0.2%;最佳发酵条件为:种子液浓度1.5×10~7~2×10~8 cfu·mL^(-1)时,接种量2%(V/V)液量40 mL/250 mL三角瓶,原始pH7.0发酵温度28℃发酵时间108 h。【结论】筛选获得的目标拮抗菌ACO7可为开发针对赞皇枣黑腐病的生物农药提供新的原材料,且发酵培养基和条件的优化提高了目标代谢物的产量,为后续的研究和开发奠定基础。

赞皇枣黑腐病菌的生物学特性研究

细极链格孢菌(Alternaria tenuissima)是引起山西石楼赞皇枣黑腐病的主要病原菌之一,对该病原菌的主要生物学特性进行了研究。采用菌丝生长速率法、血球计数板观察法和凹玻片悬滴法,研究不同培养基、碳源、氮源、温度、pH和光照对该病原菌菌丝生长、分生孢子产量以及孢子萌发的影响。Alternaria tenuissima的菌丝适宜在PDA、SCS和CZA培养基上生长,其中PDA是最佳的产孢培养基。以CZA为基础培养基时,葡萄糖和甘油为菌丝生长的最佳碳源,而无碳培养基上产孢量最大;硝酸钠为氮源时最利于菌丝生长和产孢。菌丝在24~32℃生长速度最快,24~28℃时产孢量最大;在pH 6~10范围内菌丝均能良好生长,pH 10时产孢量最大;光照对菌丝生长速率影响不明显,黑暗条件下产孢量最大。分生孢子在24 h时即可达到基本萌发,黑暗条件下28℃时,pH 6~7为最佳萌发条件。Alternaria tenuissima对营养利用和环境条件的适应能力较强,给赞皇枣黑腐病的防治造成了困难。

超声波辅助提取赞皇枣环磷酸腺苷工艺研究

研究了超声波辅助萃取技术(Ultrasound-assisted extraction,UAE)提取赞皇枣中环磷酸腺苷的方法。以高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)定量测定提取的环磷酸腺苷。采用正交试验考察超声时间、超声温度、超声功率和料液比对环磷酸腺苷提取率的影响,确定最佳工艺条件为:超声功率75W,处理时间15min,超声温度40℃,料液比1:20,提取率为644.46μg/g,比普通水浴提取率高41.6%。