烟草赤星病拮抗菌YZ01发酵条件优化及抑菌活性物质初探

由链格孢菌Alternariaalternata引起的赤星病是烟草上的主要叶部病害之一,常常造成巨大的经济损失。对烟草赤星病菌具有显著拮抗活性的菌株YZ01进行鉴定、活性物质探究及发酵条件优化,可为烟草赤星病的防治提供菌种资源,为指导其实际生产应用奠定基础。通过形态学、生理生化特征及16S rRNA和gyrA基因序列系统发育分析,鉴定菌株YZ01为贝莱斯芽胞杆菌Bacillusvelezensis。无菌滤液抑菌试验发现贝莱斯芽胞杆菌YZ0110%无菌滤液对烟草赤星病菌Alternariaalternata的抑菌率为86.56%,对苹果腐烂病菌Valsa mali、辣椒疫霉病菌Phytophthora capsici、番茄灰霉病菌Botrytis cinerea、苹果炭疽叶枯病菌Colletotrichum fructicola的抑菌率为100.00%。进一步研究发现,贝莱斯芽胞杆菌YZ01发酵液可使烟草赤星病菌菌丝细胞结构受损,导致其原生质体外渗,从而抑制菌丝生长,其发酵液抑菌活性成分主要为脂肽及蛋白类物质。单因素试验法和正交实验优化菌株YZ01的最佳发酵培养基配方为葡萄糖0.50%、胰蛋白胨1.50%和磷酸氢二钾1.50%。发酵液稳定性测定发现,其抑菌活性受温度、pH和紫外处理的影响较小。综上所述,该结果为烟草赤星病的生物防治提供了菌种资源,也为后续田间应用奠定了基础。

湘西州烤烟花叶病、赤星病的发病阈值研究

为湘西洲烟草花叶病、赤星病的提前防控提供科学依据与指标支撑,使用正态检验及差异性分析的方法,对湘西州龙山烟草花叶病、赤星病发病前后的有效积温、累积湿度等气象因子进行分析,找出具有显著差异的气象因子,并通过正态拟合和回代检验判断最佳阈值。结果表明:烟草花叶病呈现移栽早,则发病早的特征。赤星病发病最佳气象阈值为移栽后有效积温>1 173℃·d;烟草花叶病发病最佳气象阈值为移栽后有效积温>252℃·d且累积水汽压>245 hPa,累积相对湿度>1 357%。

湘西州烤烟赤星病、花叶病发展动态预测模型

为了分析湘西土家族苗族自治州(简称湘西州)烤烟赤星病、花叶病发展与气象条件的关系,建立病情预测模型,利用湘西州气象观测资料及烤烟K326病害测报数据,通过相关分析及逐步回归法确定两种病害的主要致病气象因子,并构建了病情发展动态预测模型。结果表明,烤烟赤星病、花叶病的主要致病气象因子为温度、风速、湿度,其中温度影响最大;低温高湿有利于烤烟赤星病发展,烤烟打顶前,高温低湿有利于烤烟花叶病发展;湿度在病情指数较小时影响不明显,病情指数达10以上时影响才显现;当病情指数较低时,较大的风速有利于烤烟赤星病发展,当病情指数较高时,较大的风速对烤烟赤星病发展不利。以致病气象因子结合前期病情指数构建的烤烟赤星病、花叶病发展动态预测模型,经独立数据检验,模拟预测较好,以期为湘西州烤烟赤星病、花叶病动态预测提供科学依据。

感赤星病与健康烟叶在腈菌唑应用后的叶际微生态

为了解腈菌唑在防控赤星病时,烟叶叶际微生物菌群结构与代谢功能的差异,采用Illumina高通量测序技术分析了感病与健康烟叶真菌和细菌的菌群结构与多样性特征,采用Biolog-ECO技术分析其代谢功能。结果表明,药前感病烟叶与健康烟叶叶际真菌有链格孢属、谷菌根菌属、Boeremia、枝孢霉属等,其中链格孢属为优势菌属;叶际细菌有科萨克氏菌属、泛菌属、甲基杆菌属等,其中科萨克氏菌属为优势菌属;感病烟叶链格孢属和科萨克氏菌属相对丰度均高于健康烟叶。每667 m~2采用15%腈菌唑微乳剂60 mL处理5、10、15 d时,感病烟叶叶际真菌链格孢属和枝孢霉属相对丰度均降低,附球菌属和亚隔孢壳属相对丰度均先降低后增加;健康烟叶叶际真菌链格孢属、Symmetrospora、亚隔孢壳属的相对丰度均下降。感病烟叶叶际细菌科萨克氏菌属相对丰度在施药5 d时降低,10 d和15 d时增加,假单胞菌属与之相反;健康烟叶叶际细菌泛菌属、假单胞菌属相对丰度在施药5 d和10 d时降低,15 d时增加。感病烟叶叶际微生物代谢活性弱于健康烟叶,叶际微生物对除α-丁酮酸、L-苏氨酸和4-羟基苯甲酸外的碳源代谢均较强。腈菌唑应用后,感病与健康烟叶叶际微生物的代谢活性均下降,其代谢活性均随施药时间的延长而逐渐恢复。研究结果揭示了腈菌唑施用不同时期感病与健康烟叶组织叶际微生态变化差异,为腈菌唑防控烟草赤星病的科学应用提供了参考依据。

不同成熟度烟叶赤星病防控药剂筛选研究

为评价不同成熟度(成熟、适熟、未熟)烟叶对烟草赤星病的感病性及杀菌剂对烟草赤星病的防控效果,测定了3种成熟度烟叶对赤星病的感病性,并分别选择适熟烟叶及混合烟叶作为病情指数调查对象,评价了15种杀菌剂(12.50%腈菌唑ME、325 g/L苯甲·嘧菌酯SC、57.60%氢氧化铜WDG、40%菌核净WP、8%井冈霉素SL、80%波尔多液WP、50%醚菌酯WDG、10%苯醚甲环唑WDG、12%苯甲·氟酰胺SC、25%嘧菌酯SC、400 g/L氯氟醚·吡唑酯SC、10%多抗霉素WP、38%唑醚·啶酰菌WDG、200 g/L氟酰羟·苯甲唑SC和80%代森锰锌WP)对烟草赤星病的田间防效。结果表明,烟草上部未熟烟叶对赤星病抗性最强,其次依次为中部适熟烟叶和下部成熟烟叶。15种杀菌剂对赤星病表现出不同的防治效果,2种调查方法的防效在325 g/L苯甲·嘧菌酯SC、57.60%氢氧化铜WDG等12种药剂处理时防效均较为一致。325 g/L苯甲·嘧菌酯SC(药后5 d防效分别为100%和85.64%,10 d时分别为57.14%和64.92%)、12%苯甲·氟酰胺SC(82.81%和87.56%,50%和70.82%)、25%嘧菌酯SC(100%和81.75%,50%和53.93%)、38%唑醚·啶酰菌WDG(100%和89.18%,77.78%和58%)及200 g/L氟酰羟·苯甲唑SC(86.74%和92.84%,92.86%和81.79%)的防效均较好;在施药15 d时,25%嘧菌酯SC(56.46%和54.95%)和200 g/L氟酰羟·苯甲唑SC(60.90%和55.95%)的防效仍较好。综上,325 g/L苯甲·嘧菌酯SC、12%苯甲·氟酰胺SC、25%嘧菌酯SC、38%唑醚·啶酰菌WDG及200 g/L氟酰羟·苯甲唑SC 5种药剂对适熟及混合烟叶烟草赤星病的防治效果较好,可用于烟草赤星病的防控。

不同药剂及配施对烟草赤星病的防效

为有效控制烟草赤星病为害,降低烤后烟叶化学农药菌核净残留,通过大田试验对比生物制剂木霉菌、芽孢杆菌、多抗霉素与化学农药菌核净对赤星病的防效差异。结果表明,木霉菌对赤星病没有防效,芽孢杆菌平均防效16.97%,多抗霉素平均防效26.43%,均无法达到菌核净56.8%的平均防效水平。多抗霉素和菌核净配施防治赤星病,组合防效优于单独使用菌核净或多抗霉素,以各自推荐浓度最佳体积配比为1∶1,防效达76.91%,可实现菌核净施用量减半,对降低赤星病为害,提高烟叶产量、产值及中上等烟比例效果显著。

烟草赤星病生防菌的鉴定及其抑菌机理

由交替链格孢(Alternaria alternata)引起的烟草赤星病是烟草生长中后期重要的叶部病害,直接影响烟叶的产量和品质。为开发烟草赤星病的生防制剂,对生防菌XNB-01进行了多相分类鉴定,并通过盆栽试验、粗提物的抑菌机理等研究,进一步阐明了XNB-01的生防机理。皿内对峙结果表明,XNB-01对交替链格孢的抑菌半径达到11.0 mm。菌株XNB-01短杆状,与Paenibacillus polymyxa ATTCC 842相似性为98.63%。次生代谢产物检测结果表明,XNB-01可以分泌多种真菌细胞壁降解酶,并具有溶解有机磷、解钾的能力。盆栽试验结果表明,XNB-01在1×10^(8)CFU/mL的施用浓度下显著增加了烟草幼苗的株高、鲜质量和干质量;在1×10^(9)CFU/mL的施用浓度下显著降低了烟草赤星病的病情指数,防效为60.94%,与菌核净(65.33%)相当。此外,XNB-01的胞内粗提物可抑制交替链格孢菌丝的生长和孢子萌发,使菌丝膨大,孢子皱缩。经200μg/mL XNB-01胞内粗提物处理后,峰值处的胞外电导率、核酸和蛋白质泄漏量分别是对照组的2.97、1.83、8.28倍,丙二醛含量比对照升高1.36倍。综上所述,P.polymyxa XNB-01具有防治烟草赤星病的生防潜力。

10个烤烟品种(系)对烟草赤星病的抗性评价

【目的】探明云烟85、云烟87和云烟97等10个烤烟品种(系)对烟草赤星病的抗性水平,以期为抗病烟草品种选育及病害的科学防治提供参考。【方法】以离体叶片接菌法评价云烟85、云烟87、云烟97、贵烟5、贵烟8、红花大金元、毕纳1号、韭菜坪2号、K326和GZ36共10个烤烟品种(系)对烟草赤星病的抗性,采用喷施孢子悬浮液法评价其田间成熟、适熟和未熟烟叶对赤星病的抗性。【结果】10个烤烟品种(系)接种菌株CXB 5 d、7 d和10 d的病斑直径分别为9.25~15.13 mm、12.06~25.38 mm和13.25~28.75 mm,接种菌株P2-4 5 d、7 d和10 d的病斑直径分别为3.88~12.38 mm、4.00~19.00 mm和4.00~23.63 mm;接种菌株CXB10 d时云烟87、GZ36和红花大金元的抗性相对较强,病斑直径分别为13.25 mm、16.88 mm和17.00 mm;韭菜坪2号、云烟97和贵烟5的抗性相对较弱,病斑直径分别为28.75 mm、27.63 mm和26.75 mm;接种P2-4菌株10 d时,红花大金元、云烟97和韭菜坪2号的抗性相对较强,病斑直径分别为4.00 mm、5.38 mm和5.81 mm,云烟85、贵烟5和毕纳1号的抗性相对较弱,病斑直径分别为23.63 mm、21.00 mm和17.63 mm。10个烤烟品种(系)喷施赤星病病原菌孢子混合悬浮液21 d时,均以成熟烟叶病情指数最大,为56.67~97.78;未熟烟叶病情指数最小,为21.11~65.56;不同成熟度烟叶间均差异显著,成熟烟叶较适熟和未熟烟叶发病重。【结论】不同烤烟品种(系)对烟草赤星病的抗性不同,云烟87、GZ36和红花大金元的抗性相对较强;同一烤烟品种不同成熟度烟叶对烟草赤星病抗性存在显著差异,其中,未熟烟叶的抗病性最强,成熟烟叶最弱。

苯醚甲环唑对烟草赤星病菌的抑菌活性及烟叶叶际微生物的影响

为了解苯醚甲环唑防控烟草赤星病的微观效果,采用菌丝生长速率法测定了苯醚甲环唑对烟草赤星病菌的毒力,并采用Illumina高通量测序与Biolog代谢表型技术分别测定了药剂应用后感病与健康烟叶组织叶际微生物群落结构和代谢功能。结果表明,苯醚甲环唑对烟草赤星病菌菌丝生长具有较强的抑制作用,其半数最大效应质量浓度(EC50)均值为0.17 mg/L。病害发生初期,感病与健康烟叶叶际真菌的优势菌门是子囊菌门和担子菌门,优势菌属为链格孢属、枝孢霉属、Symmetrospora;细菌优势菌门是变形菌门和厚壁菌门,优势菌属为泛菌属、假单胞菌属。施用苯醚甲环唑水分散粒剂900 g/hm2后,感病烟叶叶际真菌链格孢属相对丰度在施药后5、15 d降低,施药后10 d增加,枝孢霉属相对丰度在施药后持续降低,感病和健康烟叶叶际亚隔孢壳属相对丰度在施药后5、10 d降低,施药后15 d增加,其余菌群的相对丰度也呈现不规律的增减。感病烟叶叶际细菌泛菌属、马赛菌属、鞘脂单胞菌属相对丰度在施药后5、10 d降低,施药后15 d均上升,假单胞菌属相对丰度在施药后一直保持上升状态。感赤星病烟叶叶际微生物代谢活性弱于健康烟叶,感病烟叶叶际微生物对L-苏氨酸、D,L-α-甘油、α-丁酮酸、α-环式糊精碳源代谢较弱;健康烟叶对除α-丁酮酸和2-羟基苯甲酸碳源外的所有供试碳源代谢活性均较强。苯醚甲环唑处理降低了感病与健康烟叶叶际微生物的代谢活性,其代谢活性随着施药时间的延长均逐渐恢复。综上,施用苯醚甲环唑能抑制烟草赤星病的病原菌生长,改变感赤星病烟叶叶际微生物的群落结构,快速降低叶际微生物的代谢活性。

烟草赤星病生防菌的分离与鉴定

从连作障碍较严重的烟草根际土壤中分离出49株细菌活体纯培养物,依次编号为HHHB1~HHHB49,并筛选出对烟草赤星病病原菌(Alternaria alternate)具有拮抗活性的菌株HHHB7和HHHB19,二者抑菌圈直径分别为5、23 mm。二者初步定性为具有生防活性。多相鉴定结果表明,活性最强的菌株HHHB19隶属于假单胞菌属(Pseudomonas),暂定名Pseudomonas sp. HHHB19。盆栽试验证实,HHHB19菌株悬液叶面喷雾混合处理对烟草赤星病不同发病阶段均表现出一定的防治效果,其中喷施14 d后防治效果达61.83%。菌株HHHB19可作为良好的生防菌备用资源。

不同抗性烟草品系Rubisco及其活化酶对赤星病胁迫的响应

本研究以抗、感烟草品系JYH、CBH为试验材料,分析赤星病胁迫对光合作用和核酮糖-1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)、核酮糖-1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶活化酶(RCA)活性及基因表达的影响。结果表明,胁迫9 d,JYH的光合作用及Rubisco、RCA活性、基因表达水平和蛋白含量受到明显抑制。赤星病胁迫显著降低CBH的光合作用及Rubisco、RCA活性和蛋白含量,Rubisco大、小亚基基因(rbcL、rbcS)、RCA基因(rca)的相对表达量也持续下降。JYH的Rubisco、RCA活性、基因表达水平和蛋白含量均显著高于CBH。相关性分析结果显示,Pn与Rubisco、RCA活性及基因表达量呈显著、极显著正相关。在赤星病胁迫下,JYH可维持较高的Pn与Rubisco、RCA活性,从而具有较强抗性。

枯草芽孢杆菌可分散油悬浮剂对烟草赤星病的田间防效试验

为准确评价200亿芽孢·mL^(-1)枯草芽孢杆菌可分散油悬浮剂对烟草赤星病的防治效果,采用DPS与GGE双标图对不同浓度200亿芽孢·mL^(-1)枯草芽孢杆菌可分散油悬浮剂对烟草赤星病的防治效果进行分析。结果表明:200亿芽孢·mL^(-1)枯草芽孢杆菌可分散油悬浮剂对烟草赤星病的防治效果较好,其中60 mL/667 m^(2)剂量防治效果最好,且用药后持效期较长。该结果对200亿芽孢·mL^(-1)枯草芽孢杆菌可分散油悬浮剂的田间实际应用具有重要的指导意义。

不同药剂防治烟草赤星病药效对比试验

【目的】为有效控制烟草赤星病的发生和蔓延,筛选出适宜丽江烟区推广应用防治烟草赤星病的化学药剂。【方法】研究小组在丽江市古城区大东乡进行了不同药剂防治赤星病的田间药效比较试验,研究施药后烟草赤星病的平均病情指数、发病率,并分析不同药剂对赤星病的防治效果。【结果】不同药剂对烟草赤星病具有不同的防治效果,本次试验的5种药剂:30%吡唑醚菌酯悬浮液、38%戊唑醇悬浮液、52%氯尿·硫酸铜可溶性粉剂、80%乙蒜素乳油、30%王铜悬浮剂,均能降低赤星病的发病率和病情指数,对烟草赤星病均具有一定的防控作用。其中,30%吡唑醚菌酯悬浮液能有效地防治烟草赤星病,且效果优于其他参试药剂。【结论】不同药剂对烟草赤星病的防效试验为丽江烤烟生产提供了更高效、可供替代的化学药剂品种。

烟草赤星病菌超微结构研究

烟草赤星病菌超微结构研究陈惠明１张仲凯２方琦２（１云南省烟草科学研究所，玉溪６５３１００）（２云南省农科院生物技术研究所，昆明６５０２２３）烟草赤星病菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａａｌｔｅｒｎａｔａ（Ｆｒｅｉｓ）ｋｅｉｓｓｌｅｒ）在烟草上造成严重危害，导致...

烟草赤星病菌拮抗放线菌的筛选及其对病原菌的抑制作用

烟草赤星病是成熟期危害烟叶的主要病害之一,直接影响烟叶的产量和品质,造成巨大的经济损失。近十年来,随感病烟草品种的大面积种植, 施肥量(特别是施氮量)的增加,以及其它生产技术的改进等因素的影响,赤星病的发生日趋严重。分离、筛选出对赤星病菌具有良好抑制作用和防治效果的拮抗菌是实施生物防治的一项重要工作。近年来一些学者对此病害进行了生物防治研究。本课题组于2004年8-12月开展了从根际土壤中分离筛选拮抗菌的研究工作,现将结果报道如下。

烟草赤星病监测预警及绿色防控技术研究与应用初报——以铜仁市沿河县为例

为探究防治烟草赤星病的有效药剂,采用田间对比试验,开展烟草赤星病监测预警及绿色防控技术研究与应用研究。结果表明,80%波尔多液+200 g/L氟唑菌酰羟胺·苯醚甲环唑(美甜)SC对烟草赤星病的防效为80.50%,防控效果优于40%菌核净。在绿色防控要求下,建议在烟叶生产中使用80%波尔多液+200g/L氟唑菌酰羟胺·苯醚甲环唑(美甜)SC药剂,提高防治效果,保障烟叶生产安全。

不同药剂对烟草赤星病的防治效果

为有效防控烟草赤星病,提升烟叶质量,采用随机区组试验方法进行5种药剂的田间对比试验。结果表明,5种供试药剂中45%菌核净可湿性粉剂防治效果最好,能有效控制烟草赤星病的发生和流行;52%氯尿硫酸铜可溶性粉剂、25%吡唑醚菌酯悬浮剂、50%氯溴异氢尿酸可溶性粉剂、15%三唑酮可湿性粉剂在发病初期有一定的防治效果,随着病害的发生发展防效降低。

烟草赤星病菌GL-6产毒条件研究初报

为确定烟草赤星病菌GL-6最佳产毒培养条件,作者就菌株的培养方式、培养液类型与产毒时期进行了研究,通过多因素试验方差分析,结果表明GL-6的最佳产毒培养条件为PD培养液静止培养或振荡培养14d.

赤星病胁迫对不同抗性烟草品种光合作用和叶绿素荧光特性的影响

以不同烟草赤星病抗性品种JYH(抗病品种)和CBH(感病品种)为材料,在盆栽试验条件下,调查不同烟草赤星病胁迫程度(轻度胁迫、中度胁迫和重度胁迫)对光合色素含量、光合作用参数和叶绿素荧光动力学特征的影响。结果显示:1)烟草赤星病胁迫导致2个品种的叶绿素a、叶绿素b、总叶绿素和类胡萝卜素含量均呈下降趋势,且JYH的降幅小于CBH。2)除JYH的净光合速率在轻度胁迫下有所增加外,JYH、CBH的净光合速率、气孔导度因烟草赤星病胁迫而降低。2个品种的胞间CO2浓度、气孔限制值变化具有明显差异,烟草赤星病胁迫导致CBH的胞间CO2浓度上升,气孔限制值则明显下降,这与JYH在重度胁迫下的变化趋势一致。而JYH的胞间CO2浓度在轻度、中度胁迫降低,气孔限制值则呈上升趋势。3)烟草赤星病胁迫下,2个品种的初始荧光(F0)、非光化学猝灭系数(NPQ)均有所增加。重度胁迫下,JYH、CBH的F0分别比对照增加16.5%、34.48%,NPQ分别上升95.54%、137.45%,差异均达到显著水平。而各品种的最大荧光(Fm)、可变荧光(Fv)、PSⅡ最大光化学效率(Fv/Fm)、PSⅡ潜在活性(Fv/F0)、光化学淬灭系数(qp)、PSⅡ实际光化学效率(ΦPSⅡ)在烟草赤星病胁迫下均呈下降趋势,降幅表现为JYH<CBH。研究结果表明,JYH的光合色素、光合作用和叶绿素荧光特性受烟草赤星病胁迫影响小于CBH,维持较高的光合性能是对烟草赤星病具有较强抗性的生理基础。

河南省烟草赤星病病原鉴定

为明确河南省烟草赤星病病原菌的种类,从河南省不同烟区采集烟草赤星病典型病斑,分离病原菌并且做致病性测定,对确定为病原菌的菌种按国际标准方法进一步做形态和分子鉴定。结果显示分离到的85株菌株中60株被证明是烟草赤星病病原菌,从形态学上鉴定为三个种,分别是链格孢Alternaria alternata、长柄链格孢Alternaria longipes和鸭梨链格孢Alternaria yaliinficiens。其中鸭梨链格孢Alternaria yaliinficiens引起烟草赤星病属首次报道。三个种的代表菌株的5.8S rDNA ITS基因序列间及已报道的链格孢Alternaria alternata,长柄链格孢Alternaria longipes和鸭梨链格孢Alternaria yaliinficiens的5.8S rDNA ITS区均没有较大差异,证明该基因在链格孢小孢子种间较保守,不适合区分这些链格孢种。