3株牛布鲁氏菌19疫苗株赤藓醇代谢基因的克隆与序列分析

对3株(国际标准参考株S19,中国天康疫苗株A19-1,中国中监所标准株A19-2)不同来源布鲁氏菌19疫苗株的赤藓醇代谢基因(Erythritol catabolic gene,简写Ery)进行克隆与序列分析。参照GenBank中布鲁氏菌牛种2308的赤藓醇代谢基因序列,设计一对特异性引物,用PCR方法扩增3株19疫苗株Ery基因,对PCR产物进行克隆、测序分析。与2308比较,S19的Ery基因缺失702碱基,两株中国来源的A19不缺失,但阅读框的51,52位CG变为GC,521,522,523缺失AGG,547位T变为C。引起的氨基酸变化有,13位R变为A,170位T变为A,178位V变为A。赤藓醇代谢基因的克隆测序结果表明,我国的两株A19均不缺失702个碱基,但有3处发生点突变,引起3个氨基酸发生变化。

布鲁菌赤藓醇代谢研究概况

布鲁菌感染动物后可以逃避宿主免疫系统清除而长期存在,并严重侵害动物生殖系统。赤藓醇是布鲁菌的一种优势碳源,对布鲁菌的生长具有明显促进作用。在布鲁菌基因组中已经鉴定出6个与赤藓醇代谢相关的基因,布鲁菌的赤藓醇代谢途径也基本研究清楚。缺失布鲁菌赤藓醇代谢相关基因会造成布鲁菌在多种感染模型中的生存能力不同程度的改变。论文从布鲁菌对赤藓醇的亲嗜性、赤藓醇代谢通路及转运、赤藓醇代谢的基因调控、赤藓醇对布鲁菌毒力影响等方面进行了综述。

赤藓醇

赤藓醇是丁四醇，是近年国际上新开发的食用糖醇．它具有和其他糖醇共有的功能，但由于分子量小，易于吸收，不在大肠滞留而不易产生腹泻，因而受到食品加工业的喜爱．赤藓醇进入体内，因人体缺乏代谢赤藓醇的酶系，所以很快又从尿中排出体外，被认为是理想的低热量无糖食品配料．本文简要叙述了赤藓醇的物化性质、生理功能、生产方法，以及应用实例。

解脂耶氏酵母利用甘蔗渣发酵产赤藓醇

甘蔗渣是一种常见的固体废弃物,含多种营养成分,然而目前尚无有效地利用手段.研究以解脂耶氏(Yarrowia lipolytica)为发酵菌株,以甘蔗渣为唯一碳源,进行赤藓醇发酵生产.结果发现,甘蔗渣作为赤藓醇发酵碳源的最佳添加量为30.0 g/L;经优化,甘蔗渣发酵赤藓醇的最佳氮源为(NH4)2S2O8,添加浓度为3.0 g/L时,赤藓醇产量达到最高;当发酵培养基中添加60.0 g/L的NaCl所产生的渗透压最有利于赤藓醇生成.同时,添加10 mg/L的Mn2+和4mg/L的Cu2+可进一步促进赤藓醇合成.在最优条件下发酵168 h,赤藓醇的产量达到峰值18.9 g/L,产率为63%.结果表明,甘蔗渣可以作为唯一碳源发酵产赤藓醇,该发酵工艺为降低赤藓醇发酵成本及甘蔗渣再利用探究了一条新途径.

解脂耶氏酵母（Y.lipolytica）利用玉米芯发酵产赤藓醇的研究

玉米芯因其独特的结构和营养成分,被综合利用于众多领域。本研究选用解脂耶氏酵母(Y.lipolytica)作为发酵菌株,将玉米芯作为唯一碳源,开展发酵产赤藓醇的实验研究,综合考察了培养基组成和发酵条件对赤藓醇产量的影响。研究结果表明:Y.lipolytica可以利用玉米芯为唯一碳源发酵产赤藓醇,发酵最适碳源浓度为60g/L、最佳氮源种类为氯化铵、最佳氮源浓度为2.5g/L;添加浓度为50.0g/L的NaCl能为发酵产醇提供较适宜的渗透压;向培养基中添加8 mg/L的Zn^2+和15.0 mg/L的Fe^3+,能进一步提升赤藓醇的产量。在最优培养基条件下持续发酵96h,赤藓醇的产量最高可达37.26g/L,赤藓醇转换率可达62.1%。该研究为废弃玉米芯的再利用和赤藓醇的低成本发酵生产探索了一条新途径。

赤藓醇-全天然健康甜味剂

赤藓醇是～种天然的健康糖醇,白么U、色结晶体,学名称为l,2,3,4一丁四醇,以低含量的形式广泛存在于水果和发酵食品中。

赤藓醇:一种新的甜味剂

以生物技术将淀粉加工,结合酶转化和发酵转化技术而制成的新甜味剂—赤藓醇,是一种极佳的保健食品配料。本文为您介绍它的来源、应用和优点。

赤藓醇在糖果中的应用

赤藓醇是一种发酵法制取的食用糖醇．由于它的热值只有食糖的１０％，且耐受性好，因而受到食品加工者的欢迎．近年在欧洲和日本十分流行，本文着重介绍了欧洲用赤藓醇制备的几种赤藓醇糖果的配方和工艺．

美pfizer公司受日公司委托在美生产赤藓醇

美国pfizer公司在美国开始生产日本农林水产省食品综合研究所和日研化学公司开发的低热量甜味料赤藓醇,并向日本提供。明治点心公司从上周开始在部分地区销售了加入赤藓醇的压块点心“草莓霰”、“桔子霰”。这是一个开端,日本其它大型食品制造厂看来正在探讨使用赤藓醇的食品的商品化。尽管日研化学公司曾探讨在国内生产,但是考虑到生产成本的有利性,选中了美国企业(参阅本刊1989年1月30日号,第4页)。

无热量甜味刘——赤藓醇

比利时Cerestar食品应用中心新近开发出一种既含天然甜味又无热量的四碳多元醇——赤藓醇。它广泛地存在于不同的食物中,包括蘑菇、西瓜、梨、葡萄,以及发酵食品如干酪、葡萄酒、清酒、啤酒和酱油;同时,也存在于人和动物的组织及体液中。 赤藓醇是第一种完全采用传统生物技术制造的多元醇,通过类酵母真菌Moniliella pollinis对葡萄糖发酵而成,再经过纯化、结晶和干燥,最后得出一种甜度相当于蔗糖的60～70％、不吸潮、纯正(>99.5％)的白色结晶状粉末。

四硝酸戊赤藓醇5与配对盒基因在子宫内膜癌及子宫内膜上皮内瘤变中的临床表达研究

目的分析四硝酸戊赤藓醇5(PTEN-5)、配对盒基因2(PAX-2)及配对盒基因8(PAX-8)在合并感染的子宫内膜癌及子宫内膜上皮内瘤变中的临床表达,为临床诊断提供可靠的依据。方法选取医院2012年10月-2014年11月采用免疫组织化学SP法检测出的子宫内膜增生症(子宫内膜增生症组)、子宫内膜癌(子宫内膜癌组)及增生期子宫内膜(增生期子宫内膜组)患者各20例,分析3组患者在PTEN、PAX-2及PAX-8的临床表达方式以及相关意义;采用SPSS14.0软件进行统计分析。结果 3组患者中的PTEN、PAX-2阳性表达率呈逐渐降低趋势,PTEN、PAX-2的阳性表达与合并感染的子宫内膜癌及子宫内膜上皮内瘤变中病变等级、组织学类型呈负相关表达,两组数据比较差异有统计学意义;PAX-8在合并感染的子宫内膜上皮内瘤变中的阳性表达率差异无统计学意义;PAX-8在合并感染的子宫内膜癌中出现了比较异常的表达方式。结论 PAX-8的表达异常以及PTEN、PAX-2的表达缺失与合并感染的子宫内膜癌及子宫内膜上皮内瘤变有相关性。

青蒿2-C-甲基-D-赤藓醇-4-磷酸胱氨酰转移酶基因克隆与分析

MEP途径定位于植物细胞的质体中,为包括青蒿素在内的萜类合成提供基本前体。2-C-甲基-D-赤藓醇-4-磷酸胱氨酰转移酶(2-C-methyl-D-erythritol 4-phosphate cytidylyltransferase,MCT)是该途径的第3个关键酶,催化2-C-甲基-D-赤藓醇-4-磷酸生成4-(5'-焦磷酸胞苷)-2-C-甲基-D-赤藓醇。本文首次克隆了青蒿MCT基因全长cDNA(AaMCT)并进行了相关生物信息学分析。基因表达结果表明:AaMCT在青蒿分泌型腺体中大量表达,在叶、花、茎和根中少量表达;同时发现,AaMCT表达受到MeJA强烈诱导。亚细胞定位结果显示:AaMCT融合GFP特异性定位在叶绿体中,与MEP途径定位于质体吻合。最后在拟南芥中超量表达AaMCT,拟南芥中叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素含量得到显著提高,表明AaMCT在萜类物质的生物合成中起重要作用。

雷公藤4-(5'-二磷酸胞苷)-2-C-甲基-D-赤藓醇激酶基因的全长克隆与表达分析

4-（5-焦磷酸胞苷）-2-C-甲基-D-赤藓醇激酶[4-（cytidine-5-diphospho）-2-C-methyl-D-erythritol kinase,CMK]是雷公藤甲素等萜类成分生物合成途径上关键酶之一。根据获得的雷公藤转录组数据中Tw CMK片段设计特异性引物,采用全长PCR方法克隆Tw CMK全长c DNA,并进行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR（RT-q PCR）检测茉莉酸甲酯（Me JA）诱导雷公藤悬浮细胞后0~72 h Tw CMK基因的表达水平。结果表明,Tw CMK全长c DNA由1 732个核苷酸组成,具有完整的开放阅读框,共编码387个氨基酸,蛋白相对分子质量为42.85 k Da,理论等电点为5.79;Tw CMK基因受Me JA诱导后表达逐渐上升,在24 h时达到最高值。为进一步研究雷公藤甲素等萜类成分次生代谢调控和生物合成奠定了基础。

四硝酸戊赤藓醇和小鼠核因子κB亚基p65亲和肽在上皮性卵巢癌中的表达及与顺铂耐药性的研究

目的探讨四硝酸戊赤藓醇(PTEN)和小鼠核因子κB亚基p65亲和肽(NFκB p65)在上皮性卵巢癌中的表达以及与患者顺铂耐药性及预后的关系。方法选取2009年1月-2015年12月在河北医科大学第四医院妇产科治疗的161例上皮性卵巢癌患者,并根据患者对顺铂化疗的敏感性分为敏感组82例和耐药组79例。免疫组化检测患者肿瘤组织中PTEN和NFκB p65蛋白的表达,分析PTEN和NFκB p65蛋白表达与上皮性卵巢癌患者顺铂耐药的关系。Cox回归模型分析上皮性卵巢癌患者预后的独立危险因素。结果 68.29%的敏感组患者肿瘤组织中表达NFκB p65蛋白,明显低于耐药组患者(94.94%);50.0%的敏感组患者肿瘤组织中表达PTEN蛋白,明显高于耐药组患者(17.72%)。上皮性卵巢癌患者卵巢组织中NFκB p65蛋白表达与PTEN蛋白呈显著负相关(r_s=-0.246,P=0.002)。NFκB p65和PTEN蛋白以及手术分期是卵巢癌患者发生耐药的独立危险因素(P<0.05)。结论 PTEN蛋白低表达或NFκB p65蛋白高表达是上皮性卵巢癌患者发生耐药性的独立危险因素。

樟树4-二磷酸胞苷-2-C-甲基-D-赤藓醇激酶基因的克隆及表达分析

4-二磷酸胞苷-2-C-甲基-D-赤藓醇激酶(4-diphosphocytidyl-2-C-methyl-D-erythritol kinase,CMK)是植物萜类化合物生物合成途径甲基赤藓醇-4-磷酸途径(methylerythritol-4-phosphate pathway,DXP/MEP)上的第4个关键酶。该研究根据樟树转录组数据,利用RT-PCR(reverse transcription-PCR)方法从药用植物樟树Cinnamomum camphora中克隆得到4-二磷酸胞苷-2-C-甲基-D-赤藓醇激酶基因,命名为Cc CMK1(Gene Bank登录号Ku376098),对其序列进行生物信息学分析,结果表明该基因开放阅读框(ORF)为1 212 bp,编码403个氨基酸,推测其相对分子质量为44.46 k Da,等电点(theoretical p I)为4.99。跨膜结构分析表明CMK蛋白不存在跨膜结构。信号肽分析表明其为非分泌蛋白,不存在信号肽。亚细胞定位表明其定位于叶绿体中。利用荧光实时PCR检测了龙脑樟、油樟、芳樟、脑樟和异樟5种化学型樟树中Cc CMK1基因的表达量,结果表明Cc CMK1基因在油樟中的表达量最高,龙脑樟中表达量最低,为樟树萜类化合物生物合成途径关键酶基因元件挖掘提供研究基础。

在长春花细胞悬浮培养中细胞分裂素和乙烯通过甲基赤藓醇磷酸盐或萜类途径调控吲哚生物碱的产生

长春花Catharanthus roseus（L）G．Don中的萜吲哚生物碱（TIAs）共同的母体化合物是异胡豆苷（strictosidine），而异胡豆苷由色胺和断马钱子苷（secologanin）立体定向缩合而成。由色氨酸脱羧酶（TDC）形成的1-色氨酸经过脱羧形成色胺；而断马钱子苷通过萜类途径由异戊烯基二磷酸（IPP）衍生而来。在IPP存在情况下，TIA主要是通过（选择的）甲基赤藓醇磷酸盐（MEP）途径，在质体中合成，而不是通过经典的甲羟戊酸途径在胞液中合成。作者研究了在长春花细胞悬浮培养中MEP和乙烯对TIA合成的调节作用。