豆伞滑刃线虫Bd-VAP-2基因的克隆及原位杂交分析

线虫食道腺的分泌物在植物线虫寄生过程中发挥着重要的作用。通过构建豆伞滑刃线虫体前端特异cDNA文库与RACE技术相结合的方法克隆获得一个双结构域类毒液过敏原蛋白基因Bd-VAP-2,运用生物信息学方法对其编码蛋白进行分析,并通过原位杂交技术进行基因表达定位。结果显示:Bd-VAP-2基因开放阅读框序列大小为1269 bp,编码422个氨基酸。编码蛋白质含有2个典型且保守的CAP结构域,存在信号肽和无跨膜结构域,属于分泌型蛋白。RT-PCR结果显示,Bd-VAP-2基因在豆伞滑刃线虫各龄期均有表达,但在雌雄成虫期的表达量较高。原位杂交结果表明,Bd-VAP-2基因在豆伞滑刃线虫的食道腺细胞特异表达。初步推测其编码蛋白在食道腺细胞中合成和分泌,并可能在豆伞滑刃线虫与寄主互作过程中发挥作用。

云南松树伞滑刃线虫种类鉴定

20 0 0～ 2 0 0 1年从云南省 34个县 /市调查采集到病松树样本 16 1份 ,鉴定出伞滑刃属线虫 3个种即拟松材线虫 (Bursaphe lenchusmucronatus)、霍夫曼伞滑刃线虫 (B .hofmanni)和赫列尼库斯伞滑刃线虫 (B .hellenicus)。后 2种为我国新记录种 ,其寄主分别是华山松 (Pinusarmandii)和云南松 (P .yunnanensis) ,为该 2种线虫的世界新寄主记录。目前云南省没有发现松材线虫 ,但在16个县

伞滑刃线虫属4个种rDNA的PCR扩增

从161份病松树样本中分离、鉴定出拟松材线虫(Bursaphelenchusmucronatus)、霍夫曼伞滑刃线虫(B.hof manni)和赫列尼库斯伞滑刃线虫(B.hellenicus)3个种,其中后二者是中国新记录种,华山松和云南松分别是这两个种的世界新寄主记录。本试验以松材线虫(B.xylophilus)为对照,用伞滑刃属线虫rDNA相关引物对这4种伞滑刃线虫进行PCR扩增,进一步印证形态鉴定的可靠性。试验结果表明,霍夫曼伞滑刃线虫、赫列尼库斯伞滑刃线虫与松材线虫、拟松材线虫,均扩增到约800bp的分子片段,为霍夫曼伞滑刃线虫和赫列尼库斯伞滑刃线虫的鉴定从分子生物学角度提供了一定依据。

中国伞滑刃线虫1新种记述(线虫门:滑刃科)

报道了在马尾松枯死木质部中发现的伞滑刃线虫属1新种——东莞伞滑刃线虫。线虫标本采自广东省东莞市。两性虫体均细长.a值64-134;尾部短.c值,18-102;雌虫无阴门罩,阴门体后位。V值达86-92;雌雄虫尾部圆锥形具锐尖的末端;雄虫尾端直,有短的端抱片,交接刺具尖的喙突。

中国2种伞滑刃属线虫记述(线虫门:寄生滑刃科)

运用线虫比较形态学和rDNA-ITS-RFLP及rDNA-ITS序列分析技术,对采自广东省的伞滑刃线虫进行鉴定。在广东番禺小叶榕(Ficus microcarpa)的栽培介质中和东莞木包装上分别发现了食菌伞滑刃线虫(Bursaphelenchus fungivorus)和豆伞滑刃线虫(B.doui),其中食菌伞滑刃线虫是中国的新记录种,豆伞滑刃线虫是中国大陆的新记录种。

德国入境松木中锥尾伞滑刃线虫新纪录

宁波出入境检验检疫局植检实验室在1份来自德国的松木质包装材料中截获一种伞滑刃线虫,经形态学观察、测量,以及ITS-RFLP图谱比对,鉴定为锥尾伞滑刃线虫(Bursaphelenchus conicaudatus Kanzaki,Tsuda & Futai,2000).该线虫属松材线虫组,与松材线虫(B.xylophilus)、拟松材线虫(B.mucronatus)、伪伞滑刃线虫(B.fraudulentus)、豆伞滑刃线虫(B.doui)等比较接近,但其雌虫尾较上述线虫更细长(c′=4.5),并且明显向腹面弯曲,尾尖突位于腹面,长约2～3μm;雄虫交和伞一般呈卵圆形或铲形.目前该线虫仅日本有报道,在德国尚无记载.作者对其形态特征作了描述,并与4个近似种作了比较.

伞滑刃线虫属分类研究进展

伞滑刃属线虫是重要的寄生线虫。该属松材线虫是中国林业上一种重要的外来入侵性有害生物。随着松材线虫及其近缘种拟松材线虫对森林资源危害性的加重,该属越来越受到广泛重视。迄今报道已有63个种,其中3个种有待查考(speciesinquirendae)、1个种有待确认(speciesindeterminatae)、1个种发现地不详(speciesincer taesedis)、5个裸名(nomennuda)。对松材线虫和拟松材线虫的区分至关重要。为了弥补形态鉴定的不足,还辅以PCR技术鉴别。已开发出的PCR鉴别技术有RAPD,PCR直接鉴别法、RFLP和SSCP等。

福建枯死松材中的莱奴尔夫伞滑刃线虫鉴定

从福州城郊湿地松和马尾松的枯死树上分离到一种在伞滑刃线虫,经鉴定确认为莱奴尔夫伞滑刃线虫(BursaphelenchusrainulfiBrassch,2002).该线虫发现于马来西亚的加勒比松上,在我国湿地松和马尾松上为首次记录.

宁波黄山松木包装中程氏伞滑刃线虫记述

宁波出入境检验检疫局植检实验室在对本地热处理企业线虫处理效果进行监测时,从一批采自余姚四明山林场的黄山松(Pinus tai wanensi)木包装中截获一种伞滑刃属线虫.对该线虫进行培养、形态学观察、测量以及分子研究,鉴定为程氏伞滑刃线虫(Bursaphelenchus chengiLi,Trinh,Waeyenberge&Moens,2008).该线虫属abietinus组,侧区有2条侧线,雄虫交合刺成对,强壮,长约18～22μm,末端约1/3处强烈向腹面弯曲.雌虫尾端略向腹面弯曲,末端钝圆或尖,有时有不规则的尾尖突.该线虫与树皮象伞滑刃线虫(B.hylobianum)、安东尼伞滑刃线虫(B.antoniae)在形态上十分接近,但ITS-RFLP图谱以及序列分析结果有明显差异.目前仅南京口岸曾从来自我国台湾的木质包装中截获该线虫.

伞滑刃线虫属分种检索

依据 2 0 0 4年以前发表的所有伞滑刃属新种原始报道的资料 ,分析了伞滑刃属 73个相关种的所有形态学分类特征 ,编制了 6 4个伞滑刃属有效种的分类检索表。

中国新纪录种——东京伞滑刃线虫(Bursaphelenchus tokyoensis)

松材线虫是危害松树的重要病原线虫,在调查松材线虫时经常发现其他种类的伞滑刃线虫,明确中国的伞滑刃线虫种类有助于松材线虫的准确鉴定。2015年在广东省的黑松(Pinus thunbergii)上分离到的一种伞滑刃线虫属线虫,除体长比东京伞滑刃线虫(Bursaphelenchus tokyoensis)短及交合伞形状不同外,其余形态特征和测量值基本与东京伞滑刃线虫一致。此外,r DNA-ITS序列与东京伞滑刃线虫的r DNA-ITS序列一致性高达98.2%,基于r DNA-ITS序列的贝叶斯系统发育树表明,该线虫与东京伞滑刃线虫以100%的置信度聚在一起,且遗传距离小。形态学和分子生物学结果确定该线虫为东京伞滑刃线虫。东京伞滑刃线虫是中国新纪录种,黑松是该线虫的新寄主,同时该线虫也是继原始报道后的再次发现。

马来西亚贝壳杉中一种伞滑刃线虫的鉴定

宁波出入境检验检疫局植检实验室在对1批出境的船舶铺垫材料检测时，截获一种伞滑刃属线虫，进行了形态学观察、测量，以及分子鉴定．该线虫属松材线虫组，交舍刺较大，长约35～43p_m，明显大于松材线虫B、xylophilus、拟松材线虫B．mucronatus、锥尾伞滑刃线虫B．conicaudatus、伪伞滑刃线虫B．fraudulentus和B．luxuriosae等近似种的交合刺，与豆伞滑刃线虫B．doui交合刺34～43μm接近，但该线虫雌虫腹面末端有缺刻，而豆伞滑刃线虫的雌虫靠腹面末端有2～4μm的尾尖突．该线虫ITS-RFLP图谱与新加坡伞滑刃线虫一致，但交合刺比新加坡伞滑刃线虫交合刺41～48μm略小，且其雌虫和雄虫的尾均略长，雌虫尾末端多数有缺刻，而新加坡伞滑刃线虫尾末端钝圆，有短尾尖突．该批铺垫材料来自马来西亚，这是马来西亚除莱奴尔夫伞滑刃线虫外发现的第二种伞滑刃线虫．

伞滑刃线虫属部分种群28S RNA基因中D2-D3区的特征

对伞滑刃线虫属部分种群包括松材线虫、拟松材线虫、豆伞滑刃线虫、莱奴尔夫伞滑刃线虫和泰国伞滑刃线虫等种的28S RNA基因中D2-D3区进行了系统的研究。经PCR扩增发现,不同的种均产生1个约750 bp的片段。利用限制性内切酶对其进行PCR-RFLP分析,除松材线虫与拟松材线虫的酶切图谱比较接近外,其它伞滑刃线虫种群获得不同的酶切图谱。图谱分析发现,限制性内切酶Bsh1236I能区分2个近似种——松材线虫和拟松材线虫。进一步分析表明:Bsh1236I对28S RNA基因D2-D3区的酶切可用于鉴定本研究中伞滑刃线虫属的不同种群。同时运用clustalx1.8和Mega 2软件对28S RNA基因D2-D3区构建部分伞滑刃线虫属种群的系统树,显示出与形态学基本一致的聚类组群。

新加坡阔叶木包装中一种伞滑刃线虫的鉴定初报

本文对宁波口岸进境的新加坡阔叶木包装材料中截获的一种伞滑刃属线虫进行了形态学特征鉴定和分子特征分析,确定其为松材线虫组(xylophilus group)的一个新成员。该群体的主要形态鉴别特征是:雄虫交合刺呈弓形,中弧线长约23μm,基顶不显著,近末端背缘显著凹陷;雌虫有阴门盖,尾锥形,末端锐尖。该群体r DNA的ITS-RFLP图谱与所有已知松材线虫组成员的图谱有差异,基于r DNA的18S r RNA、ITS和28S r RNA-D2/D3区构建的系统发育树显示该群体与松材线虫组成员亲缘关系最近。因标本材料限制,暂作为一种未命名新种来记述报道。

宁波马尾松中中华伞滑刃线虫的分离与鉴定

宁波出入境检验检疫局技术中心植检实验室在宁波地区采集的200余份病死马尾松木材中截获同一种伞滑刃线虫9次,经形态学观察、测量以及分子生物学研究,鉴定为中华伞滑刃线虫(Bursaphelenchus sinensis)。中华伞滑刃线虫交合刺形态十分特殊,仅与奇异伞滑刃线虫(B.aberrans)、非洲伞滑刃线虫(B.africanus)比较接近。该线虫最早由奥地利从中国出境木质包装中截获,这是国内关于该线虫分布的首次报道。

进境木质包装中伞滑刃属线虫疫情分析

2003年1月至2006年6月,宁波口岸共检测进境木质包装8720批次,其中1772批次检出各种活线虫,疫情检出率高达20.3%。根据形态学特征和ITS-RFLP图谱鉴定伞滑刃属线虫19种(其中4种被鉴定为新种,1种尚未发表)342批次,占总检测批次的3.9%。不仅从疫区也从多个非疫区国家进境木质包装中检出松材线虫。

韩国入境木质包装箱中阿苏里伞滑刃线虫的鉴定

广东出入境检验检疫局植检实验室于2007年12月自韩国木质包装中截获一种伞滑刃属线虫,经形态学观察、测量,以及rDNA-ITS区扩增测序分析,鉴定为阿苏里伞滑刃线虫。该线虫除韩国和中国台湾外,还未见在其他地方报道。

2种常见伞滑刃线虫的特异PCR检测方法

包括松材线虫和椰子红环腐线虫在内的伞滑刃属线虫形态上相似性高,形态鉴定难度较大。本文通过对伞滑刃属常见线虫群体ITS2区序列比对、分析,设计了木质包装材料检疫中常见的泰国伞滑刃线虫和豆伞滑刃线虫特异引物对各1对,并研究了这2种常见伞滑刃线虫的PCR检测方法,使用本文特异引物可分别特异、快速检测出这两种线虫。

松材线虫和尖尾伞滑刃线虫在木材和真菌上生长繁殖的研究

松材线虫和尖尾伞滑刃线虫可在松树木段上生长繁殖达8个月以上,在白云杉、花旗松和西方铁杉木段树皮上不能很好繁殖,基本不进入木材中。在供试的29种真菌中,加拿大盘革菌、松壳囊孢和克拉夫特杰夫干酪菌非常适合两种线虫的生长繁殖,而枝状枝孢等11种真菌是不适宜食源。松材线虫和尖尾伞滑刃线虫在真菌上的生长情况和真菌的原寄主及分类地位没有明显联系。