分子生物学—五十年的光辉历程(续)

1965 揭示琥珀和赭石突变基因分别是链终止密码子 UAG 和 UAA。Weigert,M.G.和 Garen,A.由碱性磷酸酶作用下色氨酸位点的氨基酸的置换证明大肠杆菌中无意义密码子的碱基组成。Nature 206,992～994Brenner,S.,Stretton,A.O.和 Kaplan,S.遗传密码:链终止"无意义"三联体密码及其抑制。Nature 206。

复制酶与运动蛋白编码基因的突变对烟草花叶病毒的弱化效应

番茄花叶病毒弱毒疫苗K(ToMV-K)的复制酶基因和运动蛋白基因分别具有乳石和赭石突变的特征. 为了对这一致弱特征进行扩展研究, 用PCR介导的定点突变技术, 对烟草花叶病毒普通株中国分离物(TMV-Cv)复制酶基因和运动蛋白基因分别进行乳石突变(UGA)和赭石突变(UAA), 构建了复制酶单突变体--TMV-Cvrase, 运动蛋白单突变体--TMV-Cvmp和复制酶与运动蛋白双突变体--TMV-Cvrase-mp. 烟草侵染试验发现, TMV-Cvmp和TMV-Cvrase-mp能侵染枯斑(Xanthi NC)和系统(K326)寄主, 后者侵染普通烟K326仅出现少量轻微的花叶症状; 子代病毒的电子显微镜观察、重复接种试验及其核酸的RNA斑点杂交、RT-PCR扩增与测序结果表明, TMV-Cvmp和TMV-Cvrase-mp子代病毒与TMV-Cv的大小和形态基本一致, 具有完整和稳定的侵染、复制和繁殖能力, 且其基因组仍保持着突变, 而复制酶单突变体TMV-Cvrase不能侵染烟草. 以上结果表明, 复制酶与运动蛋白的乳石突变与赭石突变协同致弱TMV-Cv对烟草的侵染症状, 从而暗示ToMV-K基因组的这种突变模式也可以用于其他植物病毒的致弱研究.