根肿(Plasmodiophora brassicae)休眠孢子的纯化和超声波破碎方法研究

根肿(Plasmodiophora brassicae Woronin)是严重危害十字花科植物的世界性病害.采用蔗糖密度梯度离心和超声波处理方法从油菜染病根部组织分离和提纯根肿休眠孢子.众多因素可以影响提纯休眠孢子的纯度,为了得到更高纯度和均匀度的休眠孢子的优化方法,我们对一系列影响因素如超声波破碎功率、pH、孢子破碎浓度、处理时间和不同的水溶物质等进行了研究.在pH值5.5左右、添加0.5%的二甲基亚砜、孢子浓度约为7×108、345W功率下超声波处理10min条件下获得了最优数量和均匀度的孢子,杂菌数量减少了51%以上,杂菌种类减少超过75%.超声波处理50min后,孢子破碎率稳定地达到90%以上,除菌率达99%以上.用此方法能在较短时间内获得高纯度和高均匀度的休眠孢子,为休眠孢子的深入研究提供了资料.

超声波破碎法提取活性污泥DNA及其DGGE分析

为快速提取活性污泥中的微生物DNA,进一步应用于变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术分析其群落结构,采用细胞超声波破碎法直接提取反应器活性污泥DNA,以16S rRNA V3区域通用引物进行PCR扩增,随后利用DGGE技术对扩增产物的多样性进行评估.结果表明,超声波破碎法可以快速地提取活性污泥DNA,用超声波破碎法提取到的活性污泥克服了PCR扩增困难的问题.在一定的超声波功率下,超声时间对DNA产率、PCR扩增效率和DGGE分析均有很大影响,实验的最佳超声时间为27 s.DGGE分析表明,用该法提取到的DNA种类较为丰富,多样性较好,种群强度最高能达到0.7 OD,能够进一步应用于群落结构分析.

超声波破碎-高效液相色谱法定量检测核酸

采用超声波破碎结合高效液相色谱技术,建立了定量检测质粒DNA的方法,测量结果可以溯源至核苷酸标准物质。采用超声波破碎(功率300 W,频率24 kHz)技术将质粒DNA破碎成200～500 bp的小片段DNA,再用蛇毒磷酸二酯酶将其水解为4种核苷酸(dCMP:3.2 min;dTMP:4.7 min;dGMP:5.3 min,dAMP:6.8 min),将产物通过HPLC分离后,采用外标法进行定量分析。应用此方法对待测质粒pNK603进行定量分析,测定的4种核苷酸的摩尔百分比(A∶T=0.95,C∶G=0.98)与理论值接近。本方法的测定结果(47.24μg/g)与实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR,45.98μg/g)和PicoGreen荧光染料法(46.02μg/g)的测定结果没有显著差异,表明建立的超声波-HPLC方法可以应用于质粒DNA的定量分析。

超声波破碎Thraustochytrium提取脂质的研究

本文研究了超声波破碎破囊壶菌细胞及其脂质提取的方法 ,并对脂质脂肪酸组成进行了分析 .实验结果表明 ,超声波能有效破碎破囊壶菌细胞 ,从而可使脂质得率提高 60 % ;脂质脂肪酸组成以DHA为主 ,含量高达 60 %以上 ,其它脂肪酸含量均不到 1 0 %

超声波破碎法提取瑞士乳杆菌氨肽酶条件的优化

目的:确定超声波破碎细胞提取瑞士乳杆菌氨肽酶的最佳条件。方法:采用单因素试验和响应面法对菌体浓度、超声波破碎功率、破碎时间进行研究。结果:菌体浓度、超声波破碎功率、破碎时间对超声波破碎程度都存在一定的影响,其中破碎时间影响最为显著。超声波破碎提取氨肽酶的最适条件为菌体浓度0.0238g/ml,破碎功率300W,破碎总时间26min(超声3s,间隔5s)。破碎后得到粗酶液总酶活力为72.99U。结论:采用超声波破碎方法可以较好地提取氨肽酶,运用响应面分析法优化超声波破碎条件是可行的。

超声波破碎提取D-甘露糖异构酶条件的研究

利用超声波对假单胞菌属No.2120(Pseudomonas SP.No.2120)细胞进行破碎,研究了利用超声波法破碎时输出功率(W)、每次辐射时间(s)、工作总时间(min)、每克细胞的缓冲液加入量(mL/g)等因素对D-甘露糖异构酶酶活的影响。通过单因素实验和正交实验得出超声波破碎的最佳工艺条件为:输出功率450W,每次辐射时间5s(间歇时间5s),工作总时间5.5min,每克细胞的缓冲液加入量为5mL/g。

染色质免疫共沉淀超声波破碎条件的研究

意在找出拟南芥幼苗适宜的染色质免疫共沉淀(ChIP)超声波破碎的条件,为后期抗体的沉淀提供适当大小的片段。以拟南芥(Columbia ecotype)幼苗为材料,用1%浓度甲醛的缓冲液交联DNA和蛋白质,利用超声波将其染色质随机断裂成适当大小的片段。结果表明,适用于拟南芥幼苗的最佳ChIP试验条件为:用1%甲醛溶液交联DNA和蛋白质的复合物;用65%功率,每次工作20s,间隔4min,8次破碎该复合物,可以得到400～800bp大小的片段,用于后续的试验。经本实验的研究得到了拟南芥幼苗染色质免疫共沉淀超声波破碎的最佳条件,为后续实验奠定了基础。

超声波破碎仪在高通量测序中的应用

高通量测序技术中的数据质量控制是测序过程中的重要问题,样本文库的质量则是获取高质量的测序数据的前提和基础。在各种样本文库的制备过程中,样本的片段化过程受到普遍关注。该文主要针对基因组DNA样本的片段化技术中,涉及到的非接触式全自动超声破碎仪Bioruptor和自动聚焦声波样本处理仪Covaris S220的使用技巧和仪器的优缺点进行了初步比较。

重组褐藻胶裂解酶基因工程菌超声波破碎条件研究

褐藻胶裂解酶是制备褐藻胶寡糖的重要工具酶,利用工程菌进行褐藻胶裂解酶基因的克隆与高效表达是提高酶活的主要途径之一。工程酶位于胞内,需采取有效破碎手段获取。对重组褐藻胶裂解酶基因工程菌E.coli TOP10采用超声波破碎,分析了超声波破碎强度、总工作时间、NaCl浓度对菌体破碎程度及酶活力的影响。通过单因素试验和正交试验得出重组大肠杆菌的最佳破碎条件为:菌液浓度40 mg/mL,菌液体积50 mL,超声波工作时间4 s,间歇时间8 s,超声波破碎强度50%,总工作时间6min,NaCl浓度为0.15 mol/L。在该条件下获得褐藻胶裂解酶粗酶液的酶活为21 U/mL。

应用超声波破碎苏云金芽孢杆菌试验

用超声波对一定浓度的苏云金芽孢杆菌的营养细胞和芽孢进行破碎试验，结果表明：在试验条件下，超声波破碎达到95％以上的破碎率所需时间为30～50min，尤其是菌液浓度为每毫升50亿，用Ф10变幅杆破碎，40min破碎率可达99．9％。而细菌的芽孢，无论是采用幅杆Ф6或Ф10，其破碎效果不明显。

超声波破碎法提取多食鞘氨醇杆菌中17β-雌二醇降解酶的优化及酶学性质

采用超声波破碎多食鞘氨醇杆菌细胞壁的方法提取雌二醇降解酶,通过单因素条件研究确定各因素对超声波破碎影响的高低,依据Box-Benhnken设计原则对破碎条件进行响应面回归模型分析(RSA)。研究得到最佳条件为:菌体浓度188 mg/mL,破碎功率400 W,总破碎时间29 min(超声3 s,间隔5 s),认为破碎功率对超声波破碎的影响最大。预测破碎后得到的粗酶液总酶活力为1.484 U,实际测得的粗酶液酶活力为1.477 U。根据试验结果认为:采用超声波破碎方法可以较好地提取氨肽酶,运用响应面分析法优化超声波破碎条件是可行的。

超声波破碎法在原生质体诱变中的运用

目的 改良螺旋霉素的生产菌株 -生二素链霉菌 ,提高其产量。方法 以超声破碎法破坏出发菌株的细胞壁 ,获得该菌的原生质体 ,在再生培养基上培养后获得的诱变菌 ,其产螺旋霉素的效价上实现了大面积的提高。结果 在参与初筛的菌落中 ,摇瓶发酵后有 38.3 %的菌株效价获得提高 ,范围为 1.6 2 %～ 11.92 % ,取效价较高的初筛菌株进行复筛 ,其效价依旧稳定在较高水平 ,提高范围为 5 .48%～ 11.92 % (平均提高率为 8.73 % )。结论 本文采用的超声波破碎法制备的原生质体 ,操作简便 ,成本低廉 ,影响因素少等诸多优势。

高通量测序文库构建中超声波破碎DNA条件的研究

高质量的测序结果必须要有好的测序文库。本文利用超声波破碎仪Bioruptor NGS比较了不同的试验条件对破碎结果的影响,结果表明:对于目的片段为200-300bpDNA的试验条件为:100uL,浓度50ng/uL,强档能量, 30s On/30s Off,破碎9次;目的片段为400-600bp的试验条件为:100uL,浓度50ng/uL,强档能量,30s On/30s Off,破碎5次。

超声波破碎法提取羊肚菌发酵菌丝体生物活性肽条件的优化

以羊肚菌发酵菌丝为原料,采用单因素试验法、正交试验法、超声波破碎试验法对羊肚菌发酵菌丝生物活性肽提取条件进行研究。结果表明:羊肚菌发酵菌丝体预处理的最佳条件为料:水=1:12,pH为8,反复冻融3次;羊肚菌发酵菌丝体生物活性肽的最佳提取条件是超声波破碎仪参数为超声波破碎次数120次,工作时间为5 s,间歇时间为5 s,功率为600 W,乙醇浓度为85%,醇:提取液=1:1.5,提取温度为45℃,在最佳条件下生物活性肽的含量为9.85 mg/g。

超声波破碎法提取香草酸脱羧酶条件的优化

利用超声波破碎法对Delftia sp. X-a12进行细胞破碎,研究超声波输出功率(W)、工作总时间(min)、菌体质量浓度(g/mL)对细胞破碎的效果,以香草酸脱羧酶酶比活为评判标准。通过单因素试验和响应面试验,获得香草酸脱羧酶酶比活较高的提取条件:超声波输出功率450 W、处理总时间18 min、菌体质量浓度0.12 g/mL,此条件下香草酸脱羧酶酶比活为541.27 U/mL。对粗酶液进行(NH4)2SO4分级沉淀,当(NH4)2SO4饱和度达到60%时,酶比活达到最大,为633.34 U/mL。

超声波细胞破碎法检测嗜酸乳杆菌β-半乳糖苷酶活力的研究

采用超声波破碎法对嗜酸乳杆菌A和B产生的β-半乳糖苷酶进行提取,并以邻硝基苯-β-D-半乳糖苷(ONPG)为底物测定了β-半乳糖苷酶的活力。通过单因素试验和正交试验,选出了超声波破碎的最佳工艺条件。实验表明,嗜酸乳杆菌A在工作时间7.6min,工作/间歇为28s/20s,温度36℃时,超声波对细胞的破碎效果较好,此条件下破碎后,A株产生的β-半乳糖苷酶活力为5.963μmolONP/L·min。嗜酸乳杆菌B在工作时间6.8min,工作/间歇为20s/20s,温度37℃时效果较好,产生的β-半乳糖苷酶活力为6.683μmolONP/L·min。因此,嗜酸乳杆菌具有较高产生β-半乳糖苷酶的能力。

超声波细胞破碎法提取香蕉皮中水解单宁的工艺研究

以香蕉皮粉末为原料,用超声波细胞破碎法提取水解单宁。选取有机溶剂种类、料液比、体积分数、提取时间和超声功率作为影响因子,以水解单宁的提取率作为响应值,进行单因素实验,在此基础上进行Box-Behnken设计和响应面分析。结果表明,香蕉皮中水解单宁的最佳提取工艺条件为料液比1∶30(g/mL)、丙酮体积分数50%、提取时间15min、超声功率120 W,提取率的预测值为78.03%,实际值为78.11%,说明响应面分析能够很好地对香蕉皮中水解单宁的提取工艺进行优化。

超声波提取芦荟苦素的研究

比较了传统有机溶剂萃取法和超声波破碎浸提法在提取芦荟苦素方面的差异。实验表明:超声提取法优于溶剂提取法,所用的时间短,提取率高。

超声波处理矿浆对煤泥粒度的影响

用激光粒度分析仪和小筛分试验测定了原煤样和用超声波处理过的煤样的粒度组成，证实了超声波对煤泥的破碎作用；同时，对各粒级产物的灰分和硫分分别进行了测定，推知超声波的破碎作用可使黄铁矿等杂质从煤中部分解离出来，因而超声波处理矿浆在改变粒度的同时，若选择适当浮选工艺也可增强脱硫效果。因此利用超声波强化脱硫具有一定可行性。

响应面法优化短短芽胞杆菌FJAT-0809-GLX胞内代谢物质超声波提取工艺

为提取短短芽胞杆菌FJAT-0809-GLX的胞内代谢物质,利用超声波破碎其细胞,对胞内代谢物质进行优化提取。在超声波输出功率、超声时间以及料液比进行单因素试验的基础上,利用Design-expert进行试验设计,响应面优化得到胞内代谢物质的最佳提取工艺。单因素试验结果表明,当超声时间为30min时,获得的胞内代谢物质较多,胞内代谢物质得率为11mg·g^(-1);超声波功率为100 W时,所得胞内代谢物质得率最高,为9.33mg·g^(-1);料液比1∶25时所得胞内代谢物质得率最高,为12.22mg·g^(-1)。进一步通过响应面优化发现,超声时间、超声功率、料液比3个因素对胞内代谢物质得率的影响程度依次为:料液比>超声破碎时间>超声功率。最佳超声波提取方法为:超声功率为318.68 W,超声时间为10min,料液比为1∶25,在此条件下提取的胞内代谢物质得率为12.987 8mg·g^(-1)。