超声波法与酶解法联合制备短刺小克银汉霉原生质体及其活性评价

目的采用超声波细胞仪破碎法与酶解法联合制备短刺小克银汉霉原生质体,提高原生质体的制备量。方法采用蜗牛酶将短刺小克银汉霉细胞壁消化,采用超声波细胞破碎仪机械破碎加速其原生质体的释放,得到符合实验要求的原生质体。结果通过正交实验优化得到制备短刺小克银汉霉原生质体的条件是:以0.6mol/mL氯化钾作为渗透压稳定剂,以10mg/mL蜗牛酶为酶解剂,选用菌龄为12h的菌丝,在37℃下酶解2h,最后使用超声波细胞破碎仪破碎菌丝体15min。短刺小克银汉霉活性原生质体的释放量是7.5×107个/mL,且其7d内的存活率维持在90%以上。结论超声波细胞仪破碎法和酶解法联合使用可有效提高短刺小克银汉霉原生质体的释放率和活性。