超声辅助深共熔溶剂提取栀子黄酮及其对HepG2细胞的降血糖作用

采用超声辅助深共熔溶剂(DES)对栀子黄酮进行了提取,通过单因素实验、正交实验优化了提取工艺,测试了提取的栀子黄酮溶液对人肝脏胚胎肿瘤细胞(HepG2细胞)的降血糖能力。结果表明,DES含水量(以加水前DES的体积计,下同)对黄酮得率的影响最大。在以n(氯化胆碱)∶n(1,2-丙二醇)=1∶3制备的DES为提取溶剂、含水量30%、料液比(g∶m L,下同)为1∶33、超声(功率120 W、时间40 min、温度60℃)的最佳工艺条件下,栀子黄酮得率最高,为32.70 mg/g。中(250.0 mg/L)、高(1000.0 mg/L)质量浓度的栀子黄酮可显著降低甘油三酯含量。栀子黄酮可通过增加IR-HepG2细胞内己糖激酶、丙酮酸激酶含量,降低甘油三酯的含量而促进糖代谢,从而达到降血糖效果。

冻融-超声联合细胞破碎法提取菊花黄色素工艺优化

研究了菊花黄色素的冻融-超声联合细胞破碎提取工艺,以黄色素提取率为考察指标,采用正交试验法对工艺条件进行了优选。确定优选工艺条件:乙醇浓度65%,料液比1 g∶20 mL,超声波功率225 W,超声提取时间10 min,此条件下菊花黄色素提取率为8.55%,显著高于传统工艺同条件下的提取率(5.82%),时间大大缩短。

超声辅助提取川产木香中木香烃内酯和去氢木香内酯的研究

以川产木香的根茎为原料、柠檬烯为提取溶剂,采用超声细胞破碎辅助提取木香烃内酯和去氢木香内酯。以高效液相色谱法为定量手段,考察了液固比、超声功率、空化时间、缓冲时间、超声时间对木香烃内酯和去氢木香内酯得率的影响,得到最佳提取条件分别为,在超声功率350 W和超声时间40 min的条件下,溶剂柠檬烯与木香的比率为25 mL·g^(−1),其空化时间1.5 s、缓冲时间2.0 s。超声细胞破碎辅助提取法具有高效、节能、绿色环保的优点。

不同方法对微藻细胞破碎及油脂提取效果的影响

将溶藻菌(Kordia sp.)运用于富油微藻的细胞破碎预处理(生物法),并与传统的高速匀浆法、反复冻融法、超声法、酸热法进行对比。结果表明:对于小球藻,细胞破碎率由高到低依次为酸热法(84%)>超声法(63%)>反复冻融法(60%)>高速匀浆法(57%)>生物法(51%);油脂提取率由高到低依次为超声法、生物法(35%)>酸热法(27%)>反复冻融法(23%)>高速匀浆法(21%)。对于杜氏盐藻,酸热法及超声法的细胞破碎率达到100%,其次为生物法达到94%,反复冻融法和高速匀浆法的细胞破碎率相对较低,分别为84%和45%;油脂提取率由高到低依次为超声法(26%)>生物法(22%)>高速匀浆法(17%)>酸热法(16%)>反复冻融法(10%)。综合以上结果可知:超声法和生物法相比于其他方法更适合用于对小球藻和杜氏盐藻的破碎预处理从而提高油脂提取率,而其中生物法具有能耗低的特点,因此在大规模生产中极具潜力。

辅酶Q_(10)超声波破碎法提取工艺条件研究

为了获得超声波提取辅酶Q10的最佳工艺条件,系统研究了利用超声波法提取时输出功率、每次辐射时间、工作总时间、水添加量等因素对细胞破碎和辅酶Q10提取效果的影响。结果表明,超声波提取辅酶Q10的最佳工艺条件为:输出功率500 W,每次辐射/间歇时间12 s/10 s,工作总时间12 min,水添加量45 mL/g;采用优化的超声波提取工艺,辅酶Q10提取量可达到1.196 mg/g。证明超声波破碎法提取辅酶Q10是可行的,与未破壁提取、研磨法及反复冻融法提取效果相比,辅酶Q10提取效果良好。

超声辅助提取对茯苓多糖免疫活性的影响

比较了60℃下超声辅助提取与热水提取茯苓(Poria cocos)多糖的得率,并考察了水提茯苓多糖(WPP)和超声辅助提取茯苓多糖(UPP)对小鼠腹腔巨噬细胞增殖、TNF-α分泌、NO产生的影响。与水提法相比,超声辅助提取显著提高茯苓多糖的得率,提取时间为80 min时,超声辅助提取法的得率是水提法的2.8倍。WPP和UPP在25～400μg/mL浓度范围内均对小鼠腹腔巨噬细胞无毒性,在刺激小鼠腹腔巨噬细胞产生NO方面,两者无显著差异。在25、50和100μg/mL时,UPP和WPP对巨噬细胞的增殖无差异,200μg/mL和400μg/mL时,UPP对巨噬细胞的增殖作用显著优于相同浓度下的WPP,UPP在刺激小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α方面的作用效果显著优于WPP。

响应面优化超声提取绿色棉纤维总黄酮

【目的】优化超声提取绿色棉纤维中总黄酮工艺条件,为合理利用及鉴别天然绿色棉纤维提供依据。【方法】以天然绿色棉纤维为原料,利用超声空化效应加速黄酮溶解于乙醇中,在单因素试验基础上,结合Box-Benhnken中心组合原理及响应面设计优化试验条件。【结果】料液比为1∶50 g/mL时,总黄酮得率达到最大值,提取最适料液比为1∶50 g/mL,响应面试验中建立的模型的CV值=0.87%,影响绿色棉纤维总黄酮得率的顺序为提取时间>乙醇浓度>料液比,A料液比为1∶50 g/mL、B乙醇浓度50%、C提取时间50 min为最佳提取条件。【结论】超声波法提取绿色棉纤维总黄酮的最佳条件参数为料液比1∶50 g/mL、乙醇浓度50%、提取时间50 min;获得平均总黄酮得率为5.25%。

超声波辅助提取金柚柚皮中柚皮苷的工艺优化及其抗氧化能力研究

以金柚柚皮为对象,采用超声波辅助浸提法,优化提取金柚柚皮中的柚皮苷,对其在体外水平及细胞水平的抗氧化能力进行分析与讨论。选取时间、超声波功率与料液比为主要参数进行单因素试验,随后采用响应面模型对其提取条件进行优化。结果表明:提取金柚柚皮中柚皮苷的最佳时间为71min,超声波功率为600W,料液比为1∶28(g/mL),在该条件下通过验证试验得到提取率为(3.8±0.4)%。此外,不同浓度柚皮苷提取物的体外抗氧化能力在自由基体系中均具有较为理想的效果。通过经2,2-偶氮二(2-甲基丙基咪)二盐酸盐(2,2'-azobis-2-methyl-propanimidamide,AAPH)诱导的红细胞溶血模型,探究柚皮苷提取物在细胞水平上的抗氧化能力,结果发现柚皮苷提取物在浓度为5.35μg/mL时,红细胞的溶血率与AAPH组相比,显著降低,为(6.2±1.4)%,表明得到的柚皮苷提取物能有效保护红细胞免受AAPH自由基的攻击,从而显著性降低红细胞在氧化应激条件下的红细胞溶血率。

海带多糖超声法提取工艺优化及其对RAW264.7巨噬细胞炎症反应的影响

为研究海带多糖对巨噬细胞的影响,采用超声法对海带多糖进行提取。首先采用单因素试验和响应面试验优化海带多糖提取工艺参数,然后将提取的海带多糖配制一定的浓度梯度,考查其对RAW264.7巨噬细胞的影响。结果表明,通过响应面优化得到海带多糖提取的最优组合为料液比1∶64,超声温度68℃,超声功率89 W,在此工艺条件下,海带多糖的得率为17.73%。通过贴壁试验可知加入海带多糖后,巨噬细胞由原来的圆形或者椭圆形分化为典型的梭状,并且呈现一定的浓度依赖性,海带多糖对巨噬细胞的增殖活力没有明显的抑制作用,但海带多糖可以增加胞内ROS和NO的释放,因此,海带多糖可显著刺激巨噬细胞产生M1型分化。

从酵母细胞中提取超氧化物歧化酶的工艺研究

超氧化物歧化酶(Superoxide Dimutese,SOD)是一种以金属元素为辅基的蛋白酶,主要功能是清除生物体内由正常代谢产生的有害自由基。本课题SOD的提取来源为酵母,由于酵母细胞不存在被污染的情况,因此将酵母细胞作为SOD的提取源,相较于从牲畜血液中提取有着更方便、高效、安全的优点。本文主要对从酵母细胞中提取超氧化物歧化酶(SOD)的工艺进行研究,在实验过程中寻找更易提取SOD的方法以及如何提取出活性更强的SOD。

“一种鱼类卵母细胞总RNA的提取方法”获国家发明专利授权

日前，由中国水产科学研究院黄海水产研究所史宝博士等发明的“一种鱼类卵母细胞总RNA的提取方法”获国家发明专利授权，专利号：ZL201610202508.9。本发明提供了一种快速简便，总RNA纯度高、杂质少、得率大，易于操作，便于掌握的微量鱼类卵母细胞总RNA提取的方法。利用化学法和超声波破碎、延长离心时间等方法相结合，有效去除微量卵母细胞中核糖体和蛋白质等成分，获得卵母细胞中含有的总RNA，保证RNA完整性，并提高所获的RNA纯度与质量。

平菇多糖提取方法的比较

以平菇为原料,分别采用破碎、超声波和超声辅助复合酶3种提取方法提取平菇水溶性多糖.正交优化结果表明:提取温度90℃,剪切速率11 350 r/min,提取时间20 min,提取3次,破碎法提取多糖得率为11.20%;提取温度60℃,超声功率450 W,提取时间60 min,提取3次,超声法提取多糖得率为9.75%;提取温度30℃,超声功率350 W,提取时间60 min,溶液pH=5,超声辅助复合酶法提取多糖得率为12.05%.综合考虑提取得率、节能环保、操作方法等因素,选用破碎法提取平菇多糖较理想.

芦荟大黄素的超声辅助提取及其对HSC-T6细胞的抑制作用

研究芦荟皮中芦荟大黄素的超声辅助提取工艺及其对HSC-T6细胞生长的影响。在单因素试验基础上,利用响应面法优化芦荟大黄素的超声辅助提取工艺,并通过MTT增殖试验、Hoechst 33258荧光染色研究其对HSC-T6细胞生长的影响。结果显示,料液比、超声功率、超声时间对芦荟大黄素的提取率有显著影响,芦荟大黄素最佳超声辅助提取条件为:乙醇体积分数72%、液料比1∶33(g/m L),超声功率300 W、超声提取时间36 min,在此条件下芦荟皮芦荟大黄素提取率为1.44%。芦荟大黄素对HSC-T6增殖具有显著的抑制作用,在一定浓度范围内呈现一定的剂量时间效应关系,48 h半数抑制浓度IC50为35.85μg/m L。诱导HSC-T6细胞凋亡是芦荟大黄素抑制细胞生长的作用途径之一。

芦笋总皂苷对人乳腺肿瘤细胞MCF-7体外增殖的影响

为了研究芦笋总皂苷对人乳腺肿瘤细胞MCF-7体外增殖的影响,利用超声波辅助法提取芦笋总皂苷,MTT法检测芦笋总皂苷对人乳腺肿瘤细胞MCF-7的药物敏感性.结果表明,质量浓度为150,350 mg/L的芦笋总皂苷对乳腺肿瘤细胞的增殖具有促进作用;质量浓度750mg/L时,具有抑制作用,抑制率为19.46%,之后抑制率随质量浓度增加而增加;质量浓度1 550mg/L,抑制作用最大,抑制率为54.14%.说明低质量浓度的芦笋总皂苷对人乳腺肿瘤细胞MCF-7的体外增殖具有促进作用,高质量浓度具有抑制作用并呈剂量依赖性.

马尾藻多不饱和脂肪酸提取、分离及成分分析

采用超声波细胞破碎和索氏回流相结合的方法对马尾藻（Sargassum sp.）总脂质进行了提取，对提取过程中的超声波细胞破碎功率和时间、料液比、溶剂等关键因素进行了优化；对总脂质中的多不饱和脂肪酸进行了分离，并分析了马尾藻脂肪酸组成成分和含量。结果显示，总脂质的最佳提取条件为超声破碎功率80 W、破碎时间20 min、料液比（m/m）1：8、石油醚（60~90℃）为溶剂、85℃水浴回流8 h；总脂质最高提取率为1.77%，其中总脂肪酸平均含量为30.84%；总脂肪酸中共含有11种成分，多不饱和脂肪酸含量约占13.21%~14.60%；薄层色谱分离出2种多不饱和脂肪酸C18：2ω6和C20：4ω6。

大肠埃希菌周质抗体细胞释放工艺方法研究

本文应用细胞裂解液提取法、超声波细胞破碎法、细胞冻融法、bugbuster提取法和高压细胞破碎法,对比研究了从大肠埃希菌周质中提取可溶性抗体的相关参数,并通过SDS-PAGE电泳,BCA蛋白浓度测定和ELISA法检测了上述四种方法的有效性。结果表明,对于试验室小试规模的抗CEA抗体的细胞释放,超声法破碎,提取的目的抗体量最多,优于细胞裂解液提取法,冻融法和bugbuster法,最佳条件为:细胞缓冲液与湿菌体的比例为5mL/g,磁力搅拌混匀,冰浴中以250W功率,超声波破碎:4s工作5s间隔140次。另外,对于大规模抗体的制备,高压破碎仪在850Pa下,破碎两次效果最佳。

鲣鱼鱼卵成分分析及其活性糖蛋白提取工艺优化

目的分析鲣鱼鱼卵营养成分组成,优化鲣鱼鱼卵糖蛋白(Katsuwonus pelamis roe glycoprotein,TGP)制备工艺,并考察其对MC3T3-E1成骨细胞增殖活性的影响。方法采用食品安全国家标准方法测定鲣鱼鱼卵基本营养成分及其氨基酸、脂肪酸和胆固醇含量;以糖蛋白得率为评价指标,采用单因素实验结合响应面法研究优化TGP制备工艺;应用细胞毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测TGP对MC3T3-E1细胞增殖活性的影响。结果鲣鱼鱼卵中水分含量(72.79±0.33)g/100 g,蛋白质含量(21.09±0.03)g/100 g,脂肪含量(3.91±0.06)g/100g,灰分含量(1.50±0.01)g/100g,总糖含量(0.50±0.01)g/100g。鱼卵中氨基酸总量(727.38±8.77)mg/g,其中必需氨基酸占39.42%,鲜味氨基酸占30.68%,且谷氨酸含量最高(84.61±0.98)mg/g。鱼卵中含有17种脂肪酸,其中二十二碳六烯酸(docosahexaenoi cacid,DHA)和二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)含量合计占脂肪酸总量的41.63%;胆固醇含量(119.50±0.50)mg/100g。优化后TGP制备条件为:NaCl浓度0.5 mol/L、料液比1:15(g:mL)、提取时间5 h、超声时间42 min,该工艺下TGP得率为71.26 mg/g。TGP具有较好的促MC3T3-E1成骨细胞增殖活性。结论本研究测定了鲣鱼鱼卵主要营养组成,优化了具有促成骨细胞增殖活性的鱼卵糖蛋白制备工艺,为鲣鱼加工副产物的综合开发利用提供了较好的理论支撑。

地木耳细胞的破碎和藻蓝蛋白提取工艺的研究

以地木耳干粉为原料,比较研究了反复冻融法、超声波法及反复冻融结合超声波法地木耳细胞破碎的效果,得出最优细胞破碎方法,并对细胞破碎液利用超声波法进行提取工艺研究,经过单因素分析及正交试验得出超声波法提取的最佳工艺条件。结果表明,反复冻融结合超声波法的地木耳细胞破碎效果最好,破碎液中地木耳藻蓝蛋白的提取率为0.070 1%,是反复冻融法的3.8倍,是超声波法的1.1倍;超声波法提取地木耳藻蓝蛋白的最佳工艺条件为:超声时间25 min,超声功率600 W,提取溶剂pH 6.0,提取液中地木耳藻蓝蛋白的提取率为0.484 6%,是细胞破碎液中的1.8倍。

柳蒿芽多糖的制备及抗氧化活性研究

目的:从柳蒿芽中分离、纯化多糖,对其抗氧化活性进行研究。方法:采用响应面法优化超声波辅助酶法提取柳蒿芽多糖的工艺条件。结果:最佳提取工艺为:超声功率300 W,料液比1∶30 g/mL,超声时间46 min,纤维素酶添加量2.0%,果胶酶添加量3.0%,此条件下多糖得率为7.67%。采用DEAE-52层析柱分离、纯化共得到6个多糖组分。对AIP-2和AIP-3两个组分进行抗氧化活性的研究表明,不同质量浓度AIP-2和AIP-3处理对H_(2)O_(2)诱导的HepG2细胞氧化损伤均有较强的浓度依赖性保护作用。与模型组相比,高质量浓度AIP-2和AIP-3(50μg/mL)处理使细胞存活率提高了54.35%和60.26%,SOD活力提高了35.86%和38.98%,CAT活力提高了173.02%和205.42%,GSH-PX活力提高了50.24%和50.78%,MDA含量降低了46.13%和53.87%。结论:柳蒿芽多糖具有良好的抗氧化活性。

面包酵母中谷胱甘肽抽提方法的研究

对从面包酵母中抽提还原型谷胱甘肽(GSH)的四种方法进行了研究。发现沸水浴抽提、微波辅助提取、超声波破碎和高压均质破碎方法均能有效地抽提胞内GSH。高压均质破碎法在最佳操作条件下GSH抽提量最高为3.975mg/g,抽提率达到99.87%;沸水浴抽提法GSH抽提量为3.830mg/g,抽提率为96.23%;超声波破碎法和微波辅助提取GSH抽提量分别为3.823mg/g和3.593mg/g,抽提率分别为96.12%和90.28%。高压均质破碎法是一种绿色加工过程,更适合于工业化应用。