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透明质酸修饰纳米粒在超声-微泡介导下的体外靶向性与安全性评价
1
作者
陶宏宇
朱珊
+3 位作者
孙楠
张芙蓉
王晨雨
王文
《宁夏医科大学学报》
2023年第8期784-791,共8页
目的制备一种由透明质酸修饰的纳米粒核酸递送载体(HDP@siRNA NPs),评价其生物安全性以及在超声-微泡介导下的体外转染靶向性。方法采用超声乳化溶剂挥发联合两步静电吸附法制备得到HDP@siRNA NPs,在透射电镜下观察其外观形态,测定其粒...
目的制备一种由透明质酸修饰的纳米粒核酸递送载体(HDP@siRNA NPs),评价其生物安全性以及在超声-微泡介导下的体外转染靶向性。方法采用超声乳化溶剂挥发联合两步静电吸附法制备得到HDP@siRNA NPs,在透射电镜下观察其外观形态,测定其粒径、Zeta表面电位及体外稳定性,并检测siRNA的包封率及体外释放能力。荧光显微镜观察超声-微泡介导下纳米粒对肿瘤细胞的转染效果。通过CCK-8实验以及小鼠定期给药后的血清生化指标[肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、肝脏的丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转移酶(AST)、肾脏的血清肌酐(CREA)、尿素氮(BUN)]检测及主要器官(心、肝、脾、肺、肾)病理切片分析验证纳米粒体内外生物安全性。结果成功制备出HDP@siRNA NPs,其在透射电镜下为形态均一的三层球形结构,粒径为(154.71±2.91)nm,Zeta表面电位为(-14.12±1.67)mV,并可长期稳定保存。该纳米粒载体对siRNA的包封率为(77.05±2.28)%,体外释放实验显示其具有缓释效果。靶向纳米粒联合超声-微泡组转染细胞后,Cy3荧光强度量化值为单独siRNA组的3.98倍(P<0.001),为非靶向NPs组的1.71倍(P<0.001),为靶向NPs组的1.39倍(P<0.001)。CCK-8结果显示,共孵育siRNA浓度为100 nmol·L^(-1)及150 nmol·L^(-1)时,HDP@siRNA NPs组细胞存活率依然维持在较高水平,并高于DP@siRNA NPs组(P<0.001),同时加入SonoVue共孵育对细胞存活率未产生明显影响(P>0.05)。对健康小鼠定期注射纳米粒及SonoVue微泡期间,给药结束后的血清生化检测结果显示,三组小鼠心、肾、肝功能基本指标水平差异均无统计学意义(P均>0.05),心、肾、肝未见异常损害情况。结论成功制备的由透明质酸修饰的HDP@siRNA NPs具有较高的生物安全性,在超声-微泡介导下其转染细胞效率得到进一步提升,具备作为新型核酸递送载体的潜力。
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关键词
纳米粒核酸递送载体
SIRNA
透明质酸
超声-微泡
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题名
透明质酸修饰纳米粒在超声-微泡介导下的体外靶向性与安全性评价
1
作者
陶宏宇
朱珊
孙楠
张芙蓉
王晨雨
王文
机构
宁夏医科大学临床医学院
宁夏医科大学总医院超声科
出处
《宁夏医科大学学报》
2023年第8期784-791,共8页
基金
宁夏自然科学基金项目(2021AAC03346)。
文摘
目的制备一种由透明质酸修饰的纳米粒核酸递送载体(HDP@siRNA NPs),评价其生物安全性以及在超声-微泡介导下的体外转染靶向性。方法采用超声乳化溶剂挥发联合两步静电吸附法制备得到HDP@siRNA NPs,在透射电镜下观察其外观形态,测定其粒径、Zeta表面电位及体外稳定性,并检测siRNA的包封率及体外释放能力。荧光显微镜观察超声-微泡介导下纳米粒对肿瘤细胞的转染效果。通过CCK-8实验以及小鼠定期给药后的血清生化指标[肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、肝脏的丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转移酶(AST)、肾脏的血清肌酐(CREA)、尿素氮(BUN)]检测及主要器官(心、肝、脾、肺、肾)病理切片分析验证纳米粒体内外生物安全性。结果成功制备出HDP@siRNA NPs,其在透射电镜下为形态均一的三层球形结构,粒径为(154.71±2.91)nm,Zeta表面电位为(-14.12±1.67)mV,并可长期稳定保存。该纳米粒载体对siRNA的包封率为(77.05±2.28)%,体外释放实验显示其具有缓释效果。靶向纳米粒联合超声-微泡组转染细胞后,Cy3荧光强度量化值为单独siRNA组的3.98倍(P<0.001),为非靶向NPs组的1.71倍(P<0.001),为靶向NPs组的1.39倍(P<0.001)。CCK-8结果显示,共孵育siRNA浓度为100 nmol·L^(-1)及150 nmol·L^(-1)时,HDP@siRNA NPs组细胞存活率依然维持在较高水平,并高于DP@siRNA NPs组(P<0.001),同时加入SonoVue共孵育对细胞存活率未产生明显影响(P>0.05)。对健康小鼠定期注射纳米粒及SonoVue微泡期间,给药结束后的血清生化检测结果显示,三组小鼠心、肾、肝功能基本指标水平差异均无统计学意义(P均>0.05),心、肾、肝未见异常损害情况。结论成功制备的由透明质酸修饰的HDP@siRNA NPs具有较高的生物安全性,在超声-微泡介导下其转染细胞效率得到进一步提升,具备作为新型核酸递送载体的潜力。
关键词
纳米粒核酸递送载体
SIRNA
透明质酸
超声-微泡
Keywords
nanoparticle nucleic acid delivery carrier
siRNA
hyaluronic acid
ultrasound
-
microbubble
分类号
R445.1 [医药卫生—影像医学与核医学]
R737.9 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
透明质酸修饰纳米粒在超声-微泡介导下的体外靶向性与安全性评价
陶宏宇
朱珊
孙楠
张芙蓉
王晨雨
王文
《宁夏医科大学学报》
2023
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