上海地区产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的实验和临床研究

目的 :了解上海地区临床分离大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌中超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs)的发生率、流行情况、对抗菌药物的耐药性、产酶基因的转移特征以及感染类型和医院感染的临床特征。方法 :用双纸片法和表型确证试验 (MIC法 )检测ESBLs产生株 ;Kirby Bauer(KB)法测定细菌对抗菌药物的敏感性 ;接合转移试验检测产酶基因的可传播性 ;对上述细菌感染中部分患者进行病史调查与分析。结果 :肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中ESBLs产生株的发生率分别为 3 9.4 %、2 1.5 % ,ES BLs产生株对于大多数 β内酰胺类药物明显耐药 ,并对氨基糖苷类、氟喹诺酮类多数耐药 ,对亚胺培南则呈现敏感 ;ESBLs产生株可以通过接合转移将其产酶基因转移给敏感株 ,转移频率多在 10 -3～ 10 -7,双纸片法和表型确证试验结果显示转移接合子具有与产ESBLs供体菌相同的耐药表型 ,质粒提取、聚合酶链反应 (PCR)检测结果两者亦相同 ;ESBLs产生株主要引起医院感染且患者的转归较差。结论 :肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌ESBLs产生株大多为多重耐药菌 ;ESBLs产生株可通过结合转移将产酶基因转移给敏感菌 ,导致耐药性传播 ;ESBLs产生株为引起医院感染的重要病原菌 ,治疗较困难 ,需要加强检测。

产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌的耐药性及基因型研究

目的了解我院临床分离的大肠埃希菌中产ESBLs菌株的阳性率、耐药性及ESBLs基因型。方法采用纸片扩散法(K-B法)测定2004年1月-2005年12月我院临床分离221株大肠埃希菌对23种抗菌药物的敏感度,用酶抑制剂增强试验(纸片法)进行产ESBLs菌株的检测;用PCR和DNA序列分析检测ESBLs基因型。并用WHONET5．3软件进行统计分析。结果221株大肠埃希菌中共检出89株产ESBLs菌株(40．3％);产ESBLs菌株对青霉素类、第一、第二代头孢菌素100％耐药,第三代头孢菌素中,除细菌对头孢他啶耐药率为41．6％外,对头孢哌酮、头孢噻肟、头孢曲松的耐药率均在95％以上．对哌拉西林-三唑巴坦、头孢哌酮-舒巴坦的耐药率分别为9．0％、18．0％;对亚胺培南的耐药率为0％;89株产ESBLs菌株中,88株(98．9％)PCR检测ESBLs基因型阳性,且均为CTX—M型,其中CTX-M-14为86．5％(77／89)、CTX-M-3为19．1％(17／89),6株细菌(6．7％)同时产CTX-M-14和CTX-M-3。结论我院大肠埃希菌中产ESBLs菌株阳性率较高;产ESBLs菌株耐药显著,ESBLs基因型以CTX-M-14型为主。未检出其他型ESBLs。

头孢美唑和头孢西丁对产与非产超广谱β内酰胺酶菌株体外抗菌活性比较

目的测定头孢美唑和头孢西丁对产ESBLs菌株的体外抗菌活性,并与非产ESBLs菌株的体外抗菌活性相比较。方法收集2004年1—12月华西医院各临床科室分离出的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌520株,采用Kirby-Bauer琼脂扩散法进行体外药敏试验并用表型确证试验检测ESBLs。结果筛选出产ESBLs菌226株,产酶菌检出率为43.5%,其中323株大肠埃希菌的ESBLs检出率为45.8%,197株肺炎克雷伯菌的ESBLs检出率为39.6%。头孢美唑对我院产ESBLs菌株体外抗菌活性优于头孢西丁。结论头霉素类抗生素可作为治疗产ESBLs菌株引起的感染的可选药物,但仍应参考药敏试验结果。我院分离的产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对头孢美唑的敏感性略优于头孢西丁。

产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌耐药特征及基因分型

目的了解山东中医药大学附属医院分离的大肠埃希菌中产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)菌株的耐药特征及CTX-M型、TEM型、SHV型基因流行状况。方法采用双纸片法检测ESBLs,聚合酶链反应(PCR)检测CTX-M酶、TEM酶、SHV酶基因型DNA序列分析确认TEM及SHV基因亚型,K-B法进行药敏试验。结果 83株大肠埃希菌中45株ESBLs表型确证试验阳性,检出率为54.2%,PCR扩增结果显示83株大肠埃希菌中CTX-M型基因扩增阳性44株(53.0%),TEM型阳性32株(38.6%),SHV型阳性1株(1.2%),TEM型和SHV型测序结果分别为TEM-1亚型和SHV-1亚型。产ESBLs大肠埃希菌,除对亚胺培南、美罗培南未见耐药外,对阿米卡星、哌拉西林-他唑巴坦和头孢西丁耐药性较低,耐药率分别为13.3%、17.8%和31.1%,产ESBLs大肠埃希菌,除了对头孢菌素、单环β内酰胺类抗生素具有很高耐药性外,对甲氧苄啶-磺胺甲噁唑、左氧氟沙星、环丙沙星和庆大霉素具有较高耐药性,耐药率均高于60%。结论该院产ESBLs大肠埃希菌基因型以CTX-M型为主。产ESBLs大肠埃希菌呈现多重耐药趋势。

抗菌药物对产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌接种效应的研究

目的研究美罗培南、头孢米诺、哌拉西林-他唑巴坦、头孢吡肟、头孢他啶、头孢噻肟和头孢曲松7种常见抗生素对产ESBLS大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的接种效应。方法用微量肉汤稀释法测定7种抗生素对22株产ESBLS大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌在标准细菌接种量（5×10^5CFU／mL）和高接种菌量（5×10^7CFU／mL）时的MIC。结果随着接种菌量增加，美罗培南和头孢米诺对所有受试菌株的MIC无接种效应；哌拉西林-他唑巴坦对SHV-12型和1株CTXM-14菌的MIC表现出接种效应；头孢吡肟、头孢他啶、头孢噻肟和头孢曲松存在接种效应的菌种分别占所有受试菌株的86．4％（19／22）、40．9％（9／22）、100％（22／22）和100％（22／22）。结论对22株产ESBLS大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，美罗培南和头孢米诺不存在接种效应，哌拉西林-他唑巴坦对部分基因型ESBLS菌株（SHV-12型和1株CTX-M-14菌株）存在接种效应，头孢吡肟、头孢他啶、头孢噻肟和头孢曲松存在接种效应。

下呼吸道感染细菌产AmpC酶和超广谱β内酰胺酶的检测

目的 :了解临床下呼吸道感染标本常见革兰阴性杆菌分离株中AmpC酶和超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs)的检出情况。方法 :通过酶提取物三维试验检测单产AmpC酶、同时产AmpC酶和ESBLs菌株 ;采用美国国家临床实验室标准委员会 (NC CLS)表型筛选和确认试验检测单产ESBLs菌株。结果 :从临床下呼吸道标本分离对第一、二代及一种以上第三代头孢菌素耐药的 2 2 6株常见革兰阴性杆菌 ,包括阴沟肠杆菌、弗劳地枸橼酸杆菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌中 ,分别检出单产AmpC酶、同时产AmpC酶和ESBLs及单产ESBLs细菌 34株、1 5株、1 0 9株 ,总检出率分别为 1 5 .0 %、6 .6 %、4 8.2 %。AmpC酶检出率在阴沟肠杆菌中最高 ,为 5 7.9% ;ESBLs检出率以肺炎克雷伯菌最高 ,其次为大肠埃希菌 ,分别为 78.5 %、77.8%。结论 :下呼吸道产AmpC酶和ESBLs细胞感染常见 ,前者以阴沟肠杆菌为主 。

奇异变形杆菌产超广谱β内酰胺酶基因检测

目的了解我院2007年1月—2008年6月临床分离119株奇异变形杆菌产ESBLs检出率,并分析研究其耐药性和耐药基因分型。方法用药敏纸片法(K-B法)对119株奇异变形杆菌进行抗菌药敏试验,并作ESBLs初筛和确证试验。对其中产ESBLs菌用PCR方法检测TEM、CTX-M-1组、CTX-M-2组、CTX-M-9组和SHV5种基因并对其进行测序。结果119株奇异变形杆菌ESBLs确证试验阳性率为20.2%,产ESBLs菌株对头孢呋辛、头孢唑林、头孢克洛和哌拉西林等耐药率均为100%,对头孢噻肟、庆大霉素和环丙沙星耐药率分别为95.5%、95.2%和86.4%。24株表型确证试验产ESBLs菌中,TEM基因检出率为70.8%,CTX-M-1组基因检出率为54.2%,CTX-M-2组基因检出率为33.3%,未检测到CTX-M-9组和SHV基因。经DNA测序,17株产TEM型ESBLs奇异变形杆菌均属于TEM-1型基因,13株CTX-M-1组和8株CTX-M-2组奇异变形杆菌分别为CTX-M-3型和CTX-M-2型基因,未检测到TEM型ESBLs菌株。结论奇异变形杆菌中产ESBLs菌株检出率较高,产ESBLs菌对头孢菌素类、喹诺酮类、磺胺类和氨基糖苷类等抗菌药物呈多重耐药性。

杭州市产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药性研究

目的 :了解杭州市产超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药情况。 方法 :收集杭州市区 5所医院临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌共 198株 ,用酶抑制剂增强纸片扩散试验确证产ESBLs细菌 ,琼脂扩散法测定其对17种抗菌药物的敏感性。结果 :12 7株大肠埃希菌和 71株肺炎克雷伯菌ESBLs检出率分别为 31.5 %和 15 .5 %。产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对亚胺培南和美罗培南耐药率为 0 ,抗菌作用较强的抗生素还有拉氧头孢、头孢哌酮 舒巴坦和哌拉西林 三唑巴坦 ,耐药率分别为 3.9%、3.9%和 2 3.5 %。而氨苄西林、复方磺胺甲唑、氨苄西林 舒巴坦、替卡西林 克拉维酸、阿莫西林 克拉维酸和环丙沙星的耐药率均 >5 0 %。结论 :产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药率较高 ,临床治疗中要选择适当抗菌药并对产ESBLs菌株实行监控。

产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌中SHV型β内酰胺酶的分子生物学研究

目的 :了解复旦大学附属华山医院临床分离产超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs)大肠埃希菌中SHV型 β内酰胺酶的分布、流行情况以及分子生物学特点。方法 :用SHV型 β内酰胺酶基因的通用引物进行聚合酶链反应 (PCR)检测 ;编码框以外设计引物、PCR扩增SHV型 β内酰胺酶全编码基因并进行克隆表达、序列分析 ;对产SHV型 β内酰胺酶的菌株进行脉冲场凝胶电泳 (PFGE)检测。结果 :5 8株产ESBLs大肠埃希菌中 ,只有 3株细菌产生SHV型 β内酰胺酶 (5 .2 % ) ,其中 1株产生SHV 1 1(非ESBLs) ,另 2株产生SHV 1 2 (ESBLs) ;3株产SHV型 β内酰胺酶菌株的PFGE谱型不同。 结论 :临床分离产ESBLs大肠埃希菌中 ,SHV型 β内酰胺酶的基因型为SHV 1 1和SHV 1 2 ,SHV型ESBLs不是主要的ESBLs型别。未发现产SHV型

产超广谱β内酰胺酶和高产AmpC酶革兰阴性杆菌耐药性检测

目的了解铜陵地区产ESBLs和高产AmpC酶革兰阴性杆菌的耐药性。方法2003年10月至2004年9月铜陵地区临床分离的革兰阴性杆菌270株,用Kirby-Bauer法进行药敏试验,根据NCCLS2002年判断标准分析结果。结果270株革兰阴性杆菌中检出产ESBLs或(和)高产AmpC酶68株,检出率25.2%,其中单产ESBLs49株,以肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌中检出率最高,分别为31.6%和31.0%:单产AmpC酶3株,均为阴沟肠杆菌,同时产AmpC酶和ESBLs16株,其中鲍曼不动杆菌8株。产酶株对头孢菌素耐药率明显高于非产酶株,产ESBLs菌株对替卡西林-克拉维酸、头孢哌酮-舒巴坦等含酶抑制剂的抗菌药物耐药率在50%以上,对亚胺培南敏感性好。结论ESBLs和高产AmpC酶是导致革兰阴性杆菌耐药的主要两类酶,产酶株对多种抗菌药物耐药,仅对亚胺培南敏感。

上海地区志贺菌耐药性及超广谱β内酰胺酶基因型分析

目的了解上海地区志贺菌的耐药特征,明确其所携带ESBLs的基因型。方法用K-B纸片扩散法对收集到的216株临床分离的志贺菌进行耐药性检测和ESBLs确证试验;采用接合试验了解耐药性是否由质粒介导;用CTX-M通用引物对产ESBLs的菌株的耐药基因进行PCR扩增。结果药敏结果显示志贺菌对萘啶酸、氨苄西林、氨苄西林-舒巴坦和复方磺胺甲口恶唑的敏感率均低于50%,对头孢噻肟的敏感率为81.5%,ESBLs的检出率为18.5%(40/216),其中87.5%(35/40)的ES-BLs接合试验阳性。PCR扩增显示CTX-M基因阳性率为90%(36/40),序列分析证实其型别主要为CTX-M-14(20/40)、CTX-M-15(13/40)和CTX-M-3(3/40)。结论上海地区志贺菌呈多重耐药,对第三代头孢菌素耐药性有增高趋势。上海地区志贺菌所携带ESBLs的基因型主要为CTX-M-14、CTX-M-15和CTX-M-3。

泌尿系感染产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的耐药表型和基因分型

目的:了解本地区泌尿系感染产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌耐药表型及其基因型分布. 方法:收集2003 03 /2004 06间临床分离的尿培养阳性大肠埃希菌共258株, ESBLs的检测采用NCCLs规定的ESBLs型筛选和确定实验,用K B琼脂扩散法进行药物敏感性检测,并应用聚合酶链反应(PCR)方法对所分离的产ESBLs菌株进行SHV, CTX- M基因型检测. 结果:产ESBLs大肠埃希菌检出率为24. 0% (62株), 67. 7% (42株)携带CTX- M基因, 14. 5% ( 9株)的菌株携带SHV型基因,并有1. 6% (1株)同时携带CTX M基因和SHV型基因. 结论:本地区泌尿系感染产ESBLs大肠埃希菌以耐头孢曲松和头孢噻肟为主; CTX- M型的ESBLs最为常见.

AmpC酶及超广谱β内酰胺酶在126株革兰阴性杆菌中的分布

目的:研究临床分离的革兰阴性杆菌不同菌株产AmpC酶及超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的分布。方法:Ampc酶的检测是通过冻融法获得酶粗提物,然后作三维试验,以狭缝与抑菌圈交界处是否出现扩大的长菌区域来判断试验的结果。ES－BLs的检测是采用纸片确证试验。结果:126株对第三代头孢菌素耐药或中介的革兰阴性杆菌中产 AmpC酶株有 58株(占46%),产ESBLs株有28株(占22.6%)。结论:ESBLs及AmpC酶已成为介导革兰阴性杆菌耐药的两大主要因素。

氧头孢烯类抗生素对产超广谱β内酰胺酶菌株的体外抗菌活性研究

目的 :测定氧头孢烯类抗生素对产超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs)菌株的体外抗菌活性。 方法 :采用E试验及琼脂稀释法测定亚胺培南、拉氧头孢、氟氧头孢、头孢噻肟等 9种抗菌药物对北京和杭州两地临床分离到的 98株ESBLs基因型明确的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的最低抑菌浓度 (MIC)。结果 :产ESBLs菌株 ,对亚胺培南敏感率最高 (1 0 0 % ) ,其次为拉氧头孢(99.0 % )、氟氧头孢 (98.0 % ) ,头孢他啶的敏感率为 74 .5 % ,其余 5种抗菌药物活性较差。结论 :氧头孢烯类抗生素对产ES

济南地区革兰阴性杆菌产AmpC酶和超广谱β内酰胺酶的现状及药敏检测

目的 :了解济南地区耐第三代头孢菌素的革兰阴性杆菌中AmpC酶和超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs)的状况 ,并对 18种抗菌药物作药敏试验 ,比较产酶菌与非产酶菌对 18种抗菌药物的耐药率。为临床治疗产酶菌引起的感染提供理论依据。方法 :应用头孢西丁三维试验检测AmpC酶。应用美国国家临床实验室标准委员会 (NCCLS)推荐的纸片扩散确证法检测ES BLs。以K B琼脂扩散法做药敏试验。对AmpC阳性者进行质粒接合试验。 结果 :在受检的 2 5 0株革兰阴性杆菌中 ,5 3株(2 1.2 % )产AmpC酶 ,98株 (39.2 % )产ESBLs ,6株 (2 .4 % )同时高产AmpC +ESBLs酶。 5 3株AmpC酶阳性菌中 ,6株临床分离菌的耐药质粒接合转移成功。产酶菌对头孢吡肟、亚胺培南和阿米卡星耐药率低。在 7种喹诺酮类抗菌药物中 ,左氧氟沙星及加替沙星的耐药率较其他喹诺酮类低。结论 :济南地区革兰阴性杆菌耐药性的产生 ,是由于细菌产生AmpC酶和ES BLs引起的 ,以ESBLs为主。AmpC酶既可以染色体介导也可以质粒介导 ,以染色体介导为主。治疗产 2种 β内酰胺酶的细菌引起的感染亚胺培南为首选 ,头孢吡肟、左氧氟沙星、加替沙星和阿米卡星可作为选用药物之一。

阴沟肠杆菌6株中产超广谱β内酰胺酶的基因型

目的 :研究阴沟肠杆菌 6株的超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs)的基因型。 方法 :分别使用对TEM型、SHV型和CTX M型基因特异的引物 ,PCR扩增 6株阴沟肠杆菌接合子Esbl基因 ,对PCR产物直接测序分析其基因型。结果 :3株阴沟肠杆菌的接合子均含有CTX M 3型酶 ,同时含有TEM型酶。另 3株阴沟肠杆菌接合子均含有一种等电点为 8.3未知的 β内酰胺酶 ,同时含有一种 pI为 5 .4或 5 .5未知的 β内酰胺酶。 结论 :临床分离的阴沟肠杆菌可产CTX M 3型酶 ,对头孢菌素类产生耐药性。

4株产TEM型超广谱β内酰胺酶肠杆菌科细菌的研究

目的 :鉴定临床分离的 3株大肠埃希菌和 1株肺炎克雷伯菌所产的TEM型 β内酰胺酶编码基因的序列 ,并进行原核表达 ,了解其相关特性。方法 :聚合酶链反应 (PCR)扩增TEM型β内酰胺酶编码基因片段 ,克隆入 pGEM Teasy载体 ,表达于感受态细胞大肠埃希菌DH5α中 ,双脱氧链终止法测定核苷酸序列 ,确定基因型 ;其基因与原核表达载体 (pET 2 8c)连接 ,并在感受态细胞大肠埃希菌DH5α中进行原核表达 ,提取质粒 ,用PCR进行表达鉴定 ,用超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs)表型确认试验鉴定表达菌株的表型 ,另外对这些临床菌株进行接合试验。结果 :PCR扩增结果显示这 4株细菌产生的TEM型β内酰胺酶编码基因片段含 981个核苷酸 ,其表达酶的性质均为ESBLs,临床菌株的质粒接合试验均为阳性。这 4株临床菌株所产生的TEM型 β内酰胺酶的编码基因已被GenBank命名为TEM 10 (GenBank注册号 :U95 36 3)。 结论 :安徽地区这 4株细菌所产TEM型 β内酰胺酶均为TEM 10 ,在国内我们首次从临床分离株中发现TEM 10。

三维试验法检测肠杆菌属细菌中超广谱β内酰胺酶和AmpC酶

目的 :了解肠杆菌属细菌中超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs)和AmpC酶的发生率及其对耐药性的影响。 方法 :以聚合酶链反应 (PCR)方法检测肠杆菌属细菌中ESBLs和AmpC酶基因为金标准 ,评价三维试验法检测ESBLs和AmpC酶的灵敏度和特异性 ;用K B(Kirby bauer)法测定肠杆菌属细菌对 13种抗菌药物的敏感性。 结果 :在 2 0 0 2年 6月— 2 0 0 3年 5月我院临床分离的 73株肠杆菌属细菌中 ,4株 (5 .5 % )单产AmpC酶 ,15株 (2 0 .5 % )单产ESBLs,38株 (5 2 .1% )产ESBLs +AmpC酶 ,16株 (2 1.9% )为不产酶菌株。肠杆菌属细菌AmpC酶的检出率为 5 7.5 % (4 2 / 73) ;而ESBLs的检出率则为 72 .6 % (5 3/ 73)。与PCR方法相比 ,三维试验法检测ESBLs的灵敏度和特异度分别为 92 .6 % (5 0 / 5 4 )、10 0 .0 % (19/ 19) ;三维试验法检测AmpC酶的灵敏度和特异度分别为 76 .2 % (32 / 4 2 )、87.1% (2 7/ 34) ,两者与PCR方法的符合率分别为 94 .5 % (6 9/ 73)和 80 .8% (5 9/73) ,两种方法所获得的结果经统计学方法进行处理 ,χ2 值分别为 2 .2 5和 1.78(P值均 >0 .0 5 )。药敏试验结果显示非ESBLs产生株对大多数抗菌药物敏感 ,但产酶株耐药程度均较高 ;产ESBLs+AmpC菌株对多种抗菌药物的耐药率均较单产ESBLs菌株高。结论

正常粪便中大肠埃希菌产超广谱β内酰胺酶及耐药性调查

目的调查正常粪便中大肠埃希菌(E.coli)的耐药性及产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)菌株的检出率,了解普通人群体内肠道菌对常用抗菌剂的耐药性。方法对来自骨科初入院患者、常规筛查结果正常的粪便标本进行培养,分离获得E.coli菌株后进行药敏试验及ESBLs表型确证试验。结果分离获得的222株E.coli中产ESBLs菌株87株(占39.2%)。所有菌株仅对阿米卡星、头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南和美罗培南的敏感率大于90%。产ESBLs菌株仅对阿米卡星、亚胺培南、美罗培南的敏感率大于90%。结论医院应对携带产ESBLs菌株的初入院患者制定完善的管理流程,防止菌株播散,以控制或避免医院感染;非胃肠疾病、且入院后2日内未大量使用抗菌剂的患者肠道基础菌的耐药性较高,治疗后耐药性有可能更高,需加强对抗菌剂使用的管理。