超抗原SEA联合PML-RARα对外周血T细胞TCR Vβ亚家族基因表达的影响

目的探讨超抗原SEA联合PML-RARα多肽对外周血T细胞TCR Vβ亚家族基因表达的影响。方法分别将SEA、PML-RARα多肽以及SEA联合PML-RARα多肽与正常人外周血单个核细胞共同培养,20d后收集增殖细胞,利用RT-PCR及基因扫描技术分析诱导后增殖T细胞TCRVβ亚家族的利用和克隆性增殖的特点。结果单纯SEA诱导后,T细胞表达了11个TCR Vβ亚家族,且仍为多克隆增殖。单纯PML-RARα多肽诱导后,T细胞限制性表达8个Vβ亚家族,其中Vβ13、Vβ14表现出寡克隆或寡克隆趋势。PML-RARα多肽联合SEA共同诱导,其T细胞表达TCR Vβ亚家族依然呈明显的限制性,且Vβ13、Vβ14亚家族呈寡克隆、双克隆及寡克隆趋势。结论SEA能协同PML-RARα多肽诱导的T细胞克隆性活化与增殖。

超抗原SEA对小鼠脾淋巴细胞活化和增殖的影响

目的观察超抗原SEA体外对小鼠脾淋巴细胞活化和增殖的影响。方法SEA体外诱导小鼠脾淋巴细胞,测定淋巴细胞、T细胞、B细胞的增殖能力,用流式细胞术检测淋巴细胞膜表型的变化,并测定脾淋巴细胞培养上清中IL-2、IL-4、IL-10、INF-γ的水平。结果不同浓度SEA诱导脾淋巴细胞的增殖能力不同,在1～4d内的增殖变化也不完全一样,SEA浓度为103ng/mL时,脾淋巴细胞的活化和增殖能力最强。SEA对T细胞(无APC)和B细胞的增殖无明显影响。细胞培养上清中IL-2和INF-γ的水平显著升高,IL-4和IL-10含量低。结论在APC递呈作用下,SEA能显著诱导初始CD4+T细胞和CD8+T细胞的活化和增殖,促使TH0细胞向TH1细胞分化,分泌IL-2、IFN-γ等细胞因子。

超抗原SEA的GPI锚定修饰和在CHO-dhfr^-细胞膜上的表达

将GPI锚定修饰的免疫分子直接转移到肿瘤细胞膜上 ,是研究治疗性肿瘤疫苗的一种有潜力的新策略。通过将从衰变加速因子 (DAF)来源的GPI修饰性信号序列与SEA嵌合 ,获得了GPI修饰的SEA分子 ,构建的真核表达载体pCI GPI-SEA ,用脂质体方法转染到CHO dhfr-细胞中 ,并用氨甲喋呤 (MTX)进行筛选 ,细胞免疫荧光分析证实 ,SEA能够在细胞膜上表达。上述GPI锚定修饰的SEA ,可用于进一步研究治疗性肿瘤疫苗。

不同T细胞亚群对超抗原SEA反应性的差异

目的 在体内和体外研究SEA再次刺激后Vβ3+ CD4+ 和Vβ3+ CD8+ T细胞亚群的免疫反应 ,探讨CD4+ 和CD8+ T细胞亚群对超抗原SEA反应性的差异。方法 分离小鼠超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)应答性Vβ3+ CD4+ 和Vβ3+ CD8+ 两个T细胞亚群 ,检测其对SEA再次刺激的增殖反应及产生IL 2活性。结果 Vβ3+ CD4+ 和Vβ3+ CD8+ T细胞亚群对SEA再次刺激所诱导的增殖反应以及产生IL 2活性的能力有显著差异 (P <0 .0 1)。结论 SEA单次刺激时Vβ3+ CD4+ 和Vβ3+ CD8+ T细胞亚群反应性相似 ,再次刺激时Vβ3+ CD8+ 呈显著低反应性。

双调控溶瘤腺病毒介导超抗原SEA基因靶向膀胱肿瘤表达

目的 构建携带SEA基因的选择性增殖腺病毒,体外实验观察SEA基因的表达及其刺激淋巴细胞对肿瘤的杀伤功能.方法 构建一种由端粒酶（hTERT）和缺氧反应元件（HIF）双重启动的携带SEA的选择性增殖腺病毒,通过逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测SEA在肿瘤细胞内mRNA表达,免疫荧光定位SEA表达于肿瘤细胞,Western blot测定蛋白表达,显微镜下动态观测淋巴细胞与肿瘤细胞共培养.酶联免疫吸附试验（ELISA）检测白细胞介素（IL）-4分泌.结果 琼脂糖电泳252 bp处可见清晰条带;免疫荧光及Western blot用考马斯亮蓝染色显示在27 kDa附近可见蛋白清晰表达;淋巴细胞与肿瘤细胞共培养12、24、48 h实验组肿瘤细胞明显少于对照组,ELISA检测IL-4分泌量实验组均高于对照组（t=2.585 P＜0.05）.结论 携带SEA基因的选择性腺病毒成功构建并表达目的基因,证明对肿瘤细胞的杀伤作用.

装载超抗原SEA基因的由前列腺特异性抗原和端粒酶逆转录酶启动子双调控靶向前列腺癌的溶瘤腺病毒载体的构建

目的构建表达超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素（SEA）基因的由前列腺特异性抗原（PSA）启动子及端粒酶逆转录酶（hTERT）启动子双调控的特异性增殖溶瘤腺病毒SG504-SEA。方法从前列腺癌组织基因组DNA中获得522bp大小的PSA启动子序列，将PSA启动子克隆到由hTERT启动子调控的特异性增殖溶瘤腺病毒载体SG502中，得到靶向前列腺癌细胞的双调控溶瘤腺病毒载体SG504。将已构建好的含有771bp大小SEA基因片段的病毒骨架质粒PPE3-ccdb—SEA与SGSIM用Lipofectamine 2000共转染至293细胞。共转染后9—14d出现病毒空斑，经过3次病毒空斑纯化，经鉴定正确的腺病毒命名为SG504-SEA，即携带SEA基因的双调控靶向前列腺癌的特异性溶瘤腺病毒。结果经聚合酶链反应（PCR）及酶切鉴定，SEA基因成功克隆到病毒载体中，可以表达SEA基因，且病毒滴度为2．0×10^10pfu／ml。结论成功构建表达超抗原SEA基因的双调控选择增殖型溶瘤腺病毒SG504-SEA。

超抗原SEA-Fab’偶联蛋白诱导肿瘤细胞凋亡的研究

目的 探讨超抗原(SAg)金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)与抗人胃癌细胞单克隆抗体Fab’偶联蛋白的抗肿瘤活性。方法 利用SEA-Fab’激活效应细胞诱导的靶细胞凋亡指数检测。分别在靶细胞Walker-256加入SEA-Fab’、SEA,另设PBMC+Walker-256细胞作为对照,作用时间分别为8、36和72h,观察该偶联蛋白的超抗原活性和激活T细胞杀伤肿瘤细胞的作用。结果 凋亡指数检测各处理组之间差异有非常显著性(P<0.01)。其中,除了SEA-Fab’组与SEA组与效应细胞+靶细胞组之间差异有非常显著性(P<0.01),SEA-Fab’组与SEA组差异有非常显著性(P<0.01)。结论 SEA-Fab’偶联蛋白比单独SEA能更有效地激活T细胞的杀伤肿瘤细胞活性,以单克隆抗体为载体进行肿瘤导向治疗具有可行性。

表达超抗原SEA基因的溶瘤腺病毒载体的构建与鉴定(英文)

目的:构建表达超抗原SEA基因的溶瘤腺病毒载体并鉴定。方法:采用PCR技术,从产SEA的葡萄球菌标准菌株ATCC13565基因组DNA中获得SEA全长基因序列,酶切后克隆入pCA13质粒,构建重组病毒质粒pCA13-SEA。将鉴定正确的pCA13-SEA与含有腺病毒右臂的质粒pBHGE3通过Lipofectamine 2000共转染HEK293细胞,经同源重组产生重组腺病毒Ad-SEA。Ad-SEA在293细胞中大量扩增并通过氯化铯密度梯度离心法纯化、测定其滴度。结果:经PCR扩增、酶切鉴定、序列测定证实,SEA基因成功克隆到溶瘤腺病毒载体中,可实现SEA基因的表达。结论:成功构建了表达超抗原SEA基因的溶瘤腺病毒载体,为进一步研究该病毒对膀胱肿瘤靶向治疗的作用奠定了基础。

单克隆抗体和超抗原的融合蛋白对人大肠癌细胞的抑制作用

目的 :观察抗人大肠癌的单克隆抗体和超抗原 SEA的融合蛋白 C2 15Fab-SEA与 C2 4 2 Fab-SEA,对表达相应抗原的人大肠癌细胞株的体外抑制作用。方法 :用健康人外周血单个核细胞(PBMC)作为效应细胞 ,MTT法测定融合蛋白对人大肠癌细胞系的体外抑制率 ,采用荧光抗体流式细胞术测定肿瘤细胞 HL A-I和 HL A-DR抗原分子的表达。结果 :在 PBMC介导下 ,C2 15Fab-SEA和 C2 4 2 Fab-SEA分别对表达相应抗原的细胞株显示出较强的抑制作用。肿瘤细胞在上清液作用后 ,HL A-I、HL A-DR分子的表达均有明显上升。结论 :融合蛋白通过激活效应细胞来发挥其对表达相应抗原的肿瘤细胞的抑制作用 ,并对肿瘤细胞表面 MHC 、

CTLA-4与超抗原对SEA诱导T细胞无能的关联研究

在建立超抗原SEA诱导T细胞无能的体外模型基础上 ,观察了无能T细胞受SEA刺激时共刺激分子CD2 8和CTLA 4的表达。结果发现 ,与活化组相比 ,在SEA加入后的不同时相点无能T细胞上CD2 8的表达都是正常的 ,而CTLA 4分子在SEA加入的第 60小时细胞表面有高水平的表达。这些结果表明 ,超抗原SEA诱导的这种无能状态与CTLA