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超极化激活环化核苷酸门控通道2基因转染后293T细胞中目的基因的表达
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作者 李先花 李建美 +1 位作者 陶四明 张新金 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2012年第36期6779-6784,共6页
背景:研究证实超极化激活环化核苷酸门控通道电流在调控心脏的自发搏动中起着非常重要的作用。目的:观察超极化激活环化核苷酸门控通道2基因重组质粒转染后293T细胞中目的基因在核酸和蛋白质水平的表达。方法:采用脂质体转染试剂Lipofec... 背景:研究证实超极化激活环化核苷酸门控通道电流在调控心脏的自发搏动中起着非常重要的作用。目的:观察超极化激活环化核苷酸门控通道2基因重组质粒转染后293T细胞中目的基因在核酸和蛋白质水平的表达。方法:采用脂质体转染试剂Lipofectamine2000将含全长超极化激活环化核苷酸门控通道2基因的质粒CMV-hHCN2-3xHA-IRES-EGFP转染至293T细胞中。结果与结论:用脂质体转染试剂Lipofectamine2000成功地将质粒CMV-hHCN2-3xHA-IRES-EGFP转染至293T细胞中。反转录PCR定性地检测到在100-250bp处可见高度特异DNA的条带,与携带超极化激活环化核苷酸门控通道2基因的质粒扩增出的片段位置相同。经过RT-PCR、Western-blot方法检测提示超极化激活环化核苷酸门控通道2基因在mRNA和蛋白水平都有高表达。表明质粒CMV-hHCN2-3xHA-IRES-EGFP成功转染后的293T细胞中超极化激活环化核苷酸门控通道2基因可以在核酸和蛋白水平表达。 展开更多
关键词 超极化激活环化核苷酸门控通道2 293T细胞 生物心脏起搏器 基因 基因重组质粒 起搏电流
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超极化激活环核苷酸门控通道4和钙依赖性蛋白激酶Ⅱ在心源性猝死患者窦房结中的表达情况及其法医学意义
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作者 王威 张霄 +4 位作者 张世林 丁艳杰 刘淑瑜 曾珍 金波 《当代医学》 2024年第12期9-12,共4页
目的探讨心源性猝死(SCD)患者窦房结组织超极化激活环核苷酸门控通道4(HCN4)和钙依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)蛋白表达情况及其法医学意义。方法收集2018年1月至2022年12月川北医学院司法鉴定中心尸检心脏标本200份,其中SCD100份(SCD组),非... 目的探讨心源性猝死(SCD)患者窦房结组织超极化激活环核苷酸门控通道4(HCN4)和钙依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)蛋白表达情况及其法医学意义。方法收集2018年1月至2022年12月川北医学院司法鉴定中心尸检心脏标本200份,其中SCD100份(SCD组),非SCD100份(非SCD组)。两组均进行常规苏木精-伊红(HE)染色,采用免疫组织化学方法检测两组标本窦房结组织中HCN4和CAMKⅡ蛋白表达,图像处理软件计算目的蛋白的AOD值。结果SCD以成年男性为主且在死因中以冠心病占比最多。SCD组中HCN4的AOD值低于非SCD组,CAMKⅡ的AOD值高于非SCD组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论窦房结中HCN4、CaMKⅡ异常表达可能是心源性猝死的机制,HCN4、CaMKⅡ有望成为心源性猝死的分子标记。 展开更多
关键词 法医病理学 窦房结 心源性猝死 超极化激活核苷门控通道4 钙依赖性蛋白激酶Ⅱ
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心脏瓣膜病心房颤动患者心房肌超极化激活环化核苷酸门控通道基因表达的研究 被引量:5
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作者 甘天翊 汤宝鹏 +5 位作者 许国军 郭霞 李耀东 木拉提·阿布提热合曼 霍强 阿布力孜·阿布都拉 《中华心律失常学杂志》 2009年第4期275-278,共4页
目的研究心脏瓣膜病心房颤动(房颤)患者心房肌超极化激活环化核苷酸门控通道(HCN)各亚型及其调控因子环腺苷酸(cAMP)的基因转录,探讨房颤患者心房肌超极化激活电流(If)改变的分子机制。方法心外科心脏瓣膜病需开胸换瓣的病人4... 目的研究心脏瓣膜病心房颤动(房颤)患者心房肌超极化激活环化核苷酸门控通道(HCN)各亚型及其调控因子环腺苷酸(cAMP)的基因转录,探讨房颤患者心房肌超极化激活电流(If)改变的分子机制。方法心外科心脏瓣膜病需开胸换瓣的病人45例,分为两组,其中房颤者27例,窦性心律者18例,术中取左心房组织,采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)测定HCN1、HCN2、HCN4、cAMP的mRNA的含量。结果同窦性心律组相比,房颤组患者心房肌HCN2、14CN4的mRNA表达水平上调(P〈0.05),HCN1、cAMP的mRNA表达水平在房颤组患者中亦有增高,但差异无统计学意义(P〉0.05)。HCN2的mRNA表达与左心房内径呈正相关(r=0.441,P=0.002)。结论心房肌HCN2、HCN4的mRNA表达水平上调可能是心脏瓣膜病房颤患者心房肌If电流改变的重要分子基础,通过If的改变进一步参与心房的电重构。 展开更多
关键词 心房颤动 心房肌超极化激活环化核苷酸门控通道基因 超极化激活电流 电重构
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超极化激活电流及超极化激活的环核苷酸门控通道 被引量:1
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作者 林世荣 邓玉莲 《福建医药杂志》 CAS 2005年第3期154-155,共2页
关键词 超极化激活电流 超极化激活 核苷 门控通道 心肌舒张期 电生理 心脏疾病
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超极化激活环核苷酸门控通道的研究展望
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作者 章鹏宇 朱琳 王景杰 《山西医科大学学报》 CAS 2011年第5期430-433,共4页
超极化激活和环核苷酸门控通道(hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channels,HCN)是哺乳动物独一无二的离子通道,在1998年由Santoro等人命名。
关键词 超极化激活 核苷门控通道 起搏
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超极化激活环核苷酸门控通道在人肺组织中的表达及功能
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作者 丁炎 崔湧 +3 位作者 昌建鈞 候亚鹏 周祉妤 聂宏光 《中国医药》 2018年第2期203-206,共4页
目的探讨超极化激活环核苷酸门控(HCN)通道在人肺组织标本及人肺上皮细胞系中的表达情况,并进行相关功能学研究。方法收集临床肺癌手术患者癌旁正常肺组织标本,体外培养人肺上皮H441。采用聚合酶链反应和蛋白质免疫印迹技术检测人肺组... 目的探讨超极化激活环核苷酸门控(HCN)通道在人肺组织标本及人肺上皮细胞系中的表达情况,并进行相关功能学研究。方法收集临床肺癌手术患者癌旁正常肺组织标本,体外培养人肺上皮H441。采用聚合酶链反应和蛋白质免疫印迹技术检测人肺组织标本和人肺上皮细胞中HCN通道的表达水平。应用尤斯灌流室实验装置测定H441单层细胞的短路电流,检测HCN通道的相关功能。结果聚合酶链反应结果显示,HCN 4和HCN 1通道扩增产物经琼脂糖凝胶电泳出现116 bp和91 bp的目的条带,HCN 4和HCN 1亚型在人肺组织和H441细胞系中均有mRNA水平的表达,而HCN 2和HCN 3亚型未见表达。用10%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后,在99 000和130 000分别出现HCN 4和HCN 1的目的条带,HCN 4和HCN 1亚型在人肺组织和H441细胞系中均有表达,HCN 2和HCN 3亚型未见表达。尤斯灌流室系统测定短路电流的变化,3、10、30、100、300μmol/L的ZD7288能够剂量依赖性抑制人H441单层细胞的短路电流,根据Boltzmann方程拟合后的半数抑制率为85.8μmol/L。结论 HCN 4/1通道亚型在人肺组织中具有组织和功能学表达,为临床寻求合适药物治疗肺脏相关疾病提供了理论基础。 展开更多
关键词 超极化激活核苷门控通道 肺组织 短路电流
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超极化激活环核苷酸门控阳离子通道研究进展 被引量:1
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作者 朱亮先 陈烽烽 芶大明 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2012年第5期565-568,共4页
离子通道是镶嵌在细胞膜脂质双层中的跨膜蛋白,其基本功能是产生生物电,并通过完成对某些离子的转运维持细胞内环境稳定。近十年研究表明超极化激活的阳离子通道对动物的生理过程产生非常重要的作用,其分子机制与作用于中枢神经系统调... 离子通道是镶嵌在细胞膜脂质双层中的跨膜蛋白,其基本功能是产生生物电,并通过完成对某些离子的转运维持细胞内环境稳定。近十年研究表明超极化激活的阳离子通道对动物的生理过程产生非常重要的作用,其分子机制与作用于中枢神经系统调节突触的整合、突触的传递、抑制海马的长时程增强等有关,临床研究显示脑的自发放电、心脏的起搏电流、病理性疼痛的产生等与此有关。 展开更多
关键词 极化激活核苷门控通道 超极化激活电流 分子机制 临床进展
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人超极化激活环核苷酸门控通道1基因启动子区及蛋白的生物信息学分析 被引量:1
8
作者 黎银潮 林婉蓉 +3 位作者 陈树达 赵怡然 陈傲寒 周列民 《癫痫杂志》 2020年第4期296-306,共11页
目的通过生物信息学预测分析人超极化激活环核苷酸门控通道1(Hyperpolarization activated cyclic nucleotide gated channel 1,HCN1)基因的启动子区的序列特征、转录因子及其结合位点和蛋白质的理化性质、信号肽、亲疏水性、跨膜区域... 目的通过生物信息学预测分析人超极化激活环核苷酸门控通道1(Hyperpolarization activated cyclic nucleotide gated channel 1,HCN1)基因的启动子区的序列特征、转录因子及其结合位点和蛋白质的理化性质、信号肽、亲疏水性、跨膜区域、蛋白结构、与之相互作用的蛋白质及功能,为研究HCN1基因的表达调控及其参与伴海马硬化内侧颞叶癫痫等相关疾病的发病机制奠定理论基础。方法通过Protparam、Protscale、TMHMM、SignalP 5.0、NetPhos 3.1、Swiss-Model、Promoter 2.0、AliBaba2.1和EMBOSS等生物软件和网站分析和预测人HCN1蛋白理化性质、结构功能、定位表达、系统进化关系、蛋白相互作用以及HCN1基因启动子、CpG岛及转录因子结合位点特征等。结果信息学的预测HCN1蛋白的进化分析表明,人与黑猩猩的遗传距离最小,亲缘关系最近。人HCN1蛋白是位于质膜上不稳定的亲水性蛋白,存在2个典型的跨膜螺旋区,预测该蛋白无信号肽及核定位序列。HCN1蛋白的二级结构主要为无规则卷曲及α-螺旋,且含有多个潜在的磷酸化位点。HCN1的本体论分析:细胞组成分析表明HCN1蛋白位于质膜(GO:0005886);分子功能表现为与环磷酸腺苷(cyclic Adenosine monophosphate, cAMP)结合(GO:0030552)和电压门控离子通道活性(GO:0005244),参与细胞对cAMP的反应过程(GO:0071320)和钾离子的跨膜运输(GO:0071805)。与人HCN1存在相互作用的10个蛋白,包括HCN2、HCN4、PEX5L、MARCH7、KCTD3、GNAT3、SHKBP1、KCNQ2、FLNA和NEDD4L。主要为参与离子跨膜转运的调节(GO:0034765)和钾离子的跨膜运输(GO:0071805)。HCN1基因定位于5p12,含有8个外显子和7个内含子。HCN1基因上游至5'侧翼共2 000 bp的核苷酸序列存在3个启动子区。启动子区序列中存在1个长度为158 bp的CpG岛,HCN1基因5'调控区存在1个CAAT盒及1个TATA盒。被两种软件同时预测到的HCN1基因启动子区的转录因子结合位点有19种,包括NF-κB、NF-1、AP-1、TBP、IRF-1、c-Ets-1、Elf-1、HNF-3、HNF-1、YY1、GATA-1、RXR-α、GR、AP-2αA、ENKTF-1、C/EBPβ、C/EBPα、c-Fos和c-Jun。结论分析结果为进一步研究HCN1在癫痫发生发展过程中的作用具有重要意义,启动子区的生物信息学分析能够提高基因启动子的研究效率,为后续实验构建HCN1基因启动子表达载体及鉴定启动子功能提供理论依据。 展开更多
关键词 超极化激活核苷门控通道1 生物信息学 启动子 转录因子 基因 蛋白
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超极化激活环核苷酸门控通道在颞叶癫痫的研究新进展 被引量:1
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作者 黎银潮 秦家明 +3 位作者 林婉蓉 陈傲寒 赵怡然 周列民 《癫痫杂志》 2020年第1期19-25,共7页
超极化激活环核苷酸门控通道(Hyperpolarizationactivated cyclic nucleotide gatedchannel,HCN)属于电压门控型离子通道,迄今为止发现有四个亚型:HCN1~HCN4。HCN通道的激活依赖于膜的超级化,在膜电位低于静息电位时,HCN通道被激活,产... 超极化激活环核苷酸门控通道(Hyperpolarizationactivated cyclic nucleotide gatedchannel,HCN)属于电压门控型离子通道,迄今为止发现有四个亚型:HCN1~HCN4。HCN通道的激活依赖于膜的超级化,在膜电位低于静息电位时,HCN通道被激活,产生局部紧张性电流,导致持续的钠内流,使细胞膜发生去极化。该通道分布在人体的分布并不一致,主要在神经系统和心脏中表达。目前研究表明,HCN通道既参与所在组织的正常生理功能,如睡眠和觉醒、学习和记忆、视觉和疼痛感知、神经元起搏、树突整合等,也与多种中枢神经系统疾病及所在组织的病理状态密切相关,如神经病理性疼痛、学习记忆障碍、药物成瘾和颞叶癫痫,特别是在伴海马硬化性内侧颞叶癫痫中。癫痫作为神经系统最常见的神经疾病之一,癫痫因其病因错综复杂,病理改变亦多样性,至今尚未能完全了解其全部发病机制。目前有大量的文献报道HCN与癫痫,特别是颞叶癫痫的发生发展有密切关系。因此本文就HCN通道的结构特征、分布、功能、调控及其在颞叶癫痫发生过程中的新研究进展进行综述。 展开更多
关键词 超极化激活核苷门控通道 伴海马硬化性内侧颞叶癫痫 研究进展
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紫杉醇诱发痛大鼠脊髓背角超极化活化环核苷酸门控通道4的表达及其与γ-氨基丁酸B型受体的关系 被引量:2
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作者 田晓琳 郭跃先 +5 位作者 刘朋 李昭 刘欣 赵爽 王秀丽 王贵英 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期708-712,共5页
目的探讨紫杉醇诱发神经痛大鼠脊髓背角超极化活化环核苷酸门控通道4(HCN4)的表达变化及其与γ-氨基丁酸B型(GABAB)受体的关系。方法清洁级SD雄性大鼠(购自河北医科大学动物实验中心),69周龄,体重180~220 g。于实验开始第1、3、5、7 d... 目的探讨紫杉醇诱发神经痛大鼠脊髓背角超极化活化环核苷酸门控通道4(HCN4)的表达变化及其与γ-氨基丁酸B型(GABAB)受体的关系。方法清洁级SD雄性大鼠(购自河北医科大学动物实验中心),69周龄,体重180~220 g。于实验开始第1、3、5、7 d分别腹腔注射紫杉醇2 mg/kg制备神经痛模型,行鞘内置管术成功后,随机数字表法将其分为5组(n=10):紫杉醇模型组(P组),紫杉醇模型+生理盐水组(N组),紫杉醇模型+慢病毒空载体组(BV组),紫杉醇模型+HCN4通道慢病毒组(H组),紫杉醇模型+ZD7288组(I组),10只同龄大鼠作为空白对照组(C组)。腹腔注射紫杉醇后15 d鞘内注射药物20 μl:N组注射生理盐水,BV组注射慢病毒空载体(1×108 TU/ml),H组注射HCN4通道慢病毒(1×108 TU/ml)。腹腔注射紫杉醇后21 d鞘内注射药物20 μl:I组注射HCN4通道抑制剂ZD7288(30 μg)。腹腔注射紫杉醇前1 d(T0)、注射后第14天(T1)、第21天(T2)时点分别测定50%机械缩足反应阈(MWT)。于T2时点取脊髓背角组织标本,采用免疫组织化学法和蛋白质印迹法(Western blot)法测定HCN4通道和GABAB受体的蛋白表达水平。测量数据采用均值±标准差(Mean±SD)表示,组内比较采用重复测量设计的方差分析,组间比较采用单因素方差分析。结果与T0时点[(15.4±2.7)、(14.8±2.1)、(14.6±2.1)、(14.2±2.2)、(15.2±2.1) g]比较,P组、N组、BV组、H组、I组T1时[(4.8±1.3)、(4.7±1.5)、(4.8±1.1)、(5.0±1.3)、(4.8±1.3) g] MWT均降低(t=11.326、12.177、12.932、11.298、13.449,P<0.05),差异有统计学意义;与T1时点比较,H组、I组T2时点[(9.9±1.0)、(10.3±1.5) g]MWT均升高(t=9.389、9.006,P<0.05),差异有统计学意义。与C组[(14.4±2.6) g]比较,T1时点P组、N组、BV组、H组、I组MWT均降低(t=10.394、10.009、10.537、10.117、10.335,P<0.05),差异有统计学意义;与P组[(5.2±1.7) g]比较,T2时点H组和I组[(9.9±1.0)、(10.3±1.5) g]MWT均升高(t=7.440、7.212,P<0.05),差异有统计学意义。与C组[(0.24±0.03)、(0.75±0.05) g]比较,T2时点P组脊髓背角HCN4通道蛋白表达(0.86±0.09)升高、GABAB受体蛋白表达(0.25±0.03)降低(t=14.980、20.325,P<0.05),差异有统计学意义;与P组比较,T2时点H组、I组脊髓背角HCN4通道蛋白表达(0.13±0.04、0.18±0.03)降低、GABAB受体蛋白表达水平(0.91±0.03、0.79±0.03)升高(t=16.934、16.473、33.335、28.412,P<0.05),差异有统计学意义。免疫组织化学法测定蛋白的光密度值与Western blot法测定结果一致。结论紫杉醇可通过大鼠脊髓背角HCN4通道蛋白表达水平升高,促使GABAB受体蛋白表达下调,从而诱发神经病理性痛。 展开更多
关键词 紫杉醇 神经痛 超极化激活核苷门控通道4 慢病毒感染 γ-氨基丁B型受体
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右美托咪定对大鼠利多卡因局部静脉麻醉的影响机制
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作者 陈丽君 卢希 +1 位作者 林洁 林芩 《福建医药杂志》 CAS 2024年第1期112-115,共4页
目的探讨右美托咪定对利多卡因局部静脉麻醉(IVRA)的影响及其机制。方法建立大鼠尾静脉IVRA模型给药后,分别通过甩尾和夹尾试验评估大鼠尾静脉IVRA镇痛和麻醉效果。结果右美托咪定可以延长利多卡因IVRA镇痛和麻醉持续时间。哌唑嗪、育... 目的探讨右美托咪定对利多卡因局部静脉麻醉(IVRA)的影响及其机制。方法建立大鼠尾静脉IVRA模型给药后,分别通过甩尾和夹尾试验评估大鼠尾静脉IVRA镇痛和麻醉效果。结果右美托咪定可以延长利多卡因IVRA镇痛和麻醉持续时间。哌唑嗪、育亨宾以及ZD7288不影响右美托咪定延长利多卡因IVRA持续时间的作用。毛喉素可以逆转右美托咪定延长利多卡因IVRA持续时间的作用。结论右美托咪定通过抑制超极化激活环核苷酸门控通道,延长利多卡因IVRA持续时间。 展开更多
关键词 局部静脉麻醉 利多卡因 右美托咪定 α肾上腺素能受体 超极化激活核苷门控通道
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HCN通道的结构与功能及其功能调节相关的细胞分子机制研究进展
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作者 张文娟 曾晓莉 +1 位作者 赵博 何治 《山东医药》 CAS 北大核心 2017年第44期101-103,共3页
超极化激活环核苷酸阳离子门控通道(HCN通道)参与许多重要的生理活动,包括窦房结自律性、学习和记忆、突触神经递质释放、树突整合等,并且与癫痫、神经病理性疼痛、脑血管疾病的发生、发展存在一定关联。HCN通道除受细胞内cAMP调节外,... 超极化激活环核苷酸阳离子门控通道(HCN通道)参与许多重要的生理活动,包括窦房结自律性、学习和记忆、突触神经递质释放、树突整合等,并且与癫痫、神经病理性疼痛、脑血管疾病的发生、发展存在一定关联。HCN通道除受细胞内cAMP调节外,还受细胞内外小分子物质(cGMP、cCMP及离子、磷脂酰肌醇丝氨酸)、蛋白质(小分子蛋白、蛋白激酶)及一些神经递质(谷氨酸、γ-氨基丁酸、乙酰胆碱、神经肽类物质、去甲肾上腺素、单胺类神经递质、NO、嘌呤类神经递质)的调节,这些物质除了调节HCN通道的开放以外,还调控该通道的表达、分布及功能特性,从而发挥相应的生理功能。 展开更多
关键词 超极化激活核苷阳离子门控通道 电生理功能 细胞分子机制
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肠润方对功能性便秘大鼠结肠运动调控的机制研究
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作者 肖秋平 洪燕秋 林金荣 《中医临床研究》 2023年第31期92-98,共7页
目的:探讨中药复方肠润方影响功能性便秘大鼠结肠运动的作用机制。方法:选取健康SD大鼠72只,随机分为空白组、模型组、麻仁丸组、肠润方高剂量组、肠润方中剂量组、肠润方低剂量组,每组12只。除空白组外,其余各组均采用复方地芬诺脂灌... 目的:探讨中药复方肠润方影响功能性便秘大鼠结肠运动的作用机制。方法:选取健康SD大鼠72只,随机分为空白组、模型组、麻仁丸组、肠润方高剂量组、肠润方中剂量组、肠润方低剂量组,每组12只。除空白组外,其余各组均采用复方地芬诺脂灌胃建立功能性便秘大鼠肠动力障碍模型。采用多导生理记录仪检测肠润方水提液对大鼠离体结肠张力、收缩波振幅的影响;通过Western-Blot检测大鼠结肠酪氨酸蛋白激酶生长因子受体(Tyrosine Kinase Growth Factor Receptor,C-Kit)、干细胞因子(Stem Cell Factor,SCF)、超极化激活环核苷酸门控的阳离子通道1(Hyperpolarization-activated Cyclic nucleotide-gated Cation Channel 1,HCN1)、超极化激活环核苷酸门控的阳离子通道2(Hyperpolarization-activated Cyclic nucleotide-gated Cation Channel 2,HCN2)的蛋白表达水平;通过RT-PCR实验检测大鼠结肠C-Kit、SCF、HCN1、HCN2的mRNA表达水平。结果:①离体肠管运动实验结果显示,不同浓度肠润方水提液均可改善地芬诺酯所致的大鼠离体结肠张力的下降,同时提高收缩波振幅;②与空白组比较,模型组C-Kit、SCF、HCN1、HCN2在结肠的蛋白及mRNA表达显著降低(P<0.01)。肠润方高剂量组和肠润方中剂量组可显著升高C-Kit、SCF、HCN1、HCN2的蛋白表达及mRNA表达(P<0.01)。结论:肠润方能够显著改善功能性便秘临床症状,其作用机制可能与上调C-Kit、SCF以及HCN通道表达水平,维持Cajal间质细胞(Interstitial Cells of Cajal,ICC)胃肠慢波起搏与传导功能,加强结肠平滑肌收缩,促进结肠运动有关。 展开更多
关键词 功能性便秘 滋阴行气法 酪氨蛋白激酶生长因子受体 干细胞因子 超极化激活核苷门控的阳离子通道1
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mHCN2和mHCN4基因在乳鼠心室肌中的表达及其起搏电流的特性 被引量:3
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作者 周亚峰 杨向军 +3 位作者 李红霞 韩莲花 宋建平 蒋文平 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期263-265,共3页
目的分析乳鼠心室肌mHCN2和mHCN4基因的表达及其起搏电流的特性。方法通过酶消化法分离乳鼠心室肌细胞,用全细胞膜片钳技术记录If电流并研究其特性;采用SYBR-GreenI染料进行实时定量PCR,测定乳鼠心室肌起搏基因mHCN2和mHCN4的表达。结... 目的分析乳鼠心室肌mHCN2和mHCN4基因的表达及其起搏电流的特性。方法通过酶消化法分离乳鼠心室肌细胞,用全细胞膜片钳技术记录If电流并研究其特性;采用SYBR-GreenI染料进行实时定量PCR,测定乳鼠心室肌起搏基因mHCN2和mHCN4的表达。结果全细胞膜片钳记录到心室肌细胞If电流,得到电流密度-电压曲线,其激活电压约为-75mV;实时定量PCR检测mHCN2∶mHCN4为(5.56±1.35)∶1。结论乳鼠心室肌细胞有超极化激活、可被Cs+阻断的If电流;其基因表达以mHCN2为主。 展开更多
关键词 心室肌细胞 起搏电流 超极化激活核苷门控通道
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心脏电子起搏器时代与生物起搏替代的前沿话题(英文) 被引量:1
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作者 周亚峰 杨向军 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1787-1792,共6页
学术背景:植入电子起搏器是目前治疗症状性缓慢心律失常的主要方法,然而它存在许多缺点。能否利用分子生物学原理发展生物起搏器成为大家关注的热点。通过转染编码If电流的超极化激活环核苷酸门控通道基因,过度表达超极化激活环核苷酸... 学术背景:植入电子起搏器是目前治疗症状性缓慢心律失常的主要方法,然而它存在许多缺点。能否利用分子生物学原理发展生物起搏器成为大家关注的热点。通过转染编码If电流的超极化激活环核苷酸门控通道基因,过度表达超极化激活环核苷酸门控通道,增加心脏舒张期内向电流,从而在窦房结被抑制时提供起搏作用,这种利用基因治疗和细胞治疗构建的生物起搏在不久的将来可能会成为电子起搏器最为理想的替代方法。目的:总结超极化激活环核苷酸门控通道基因构建生物起搏的研究进展。检索策略:由该论文的研究人员应用计算机检索Pubmed数据库1979-01/2007-06的相关文献,检索词"hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channel;biological pacemaker",并限定文章语言种类为English。共检索到157篇文献,对资料进行初审,纳入标准:①与生物起搏及超极化激活环核苷酸门控通道基因密切相关。②同一领域选择近期发表或在权威杂志上发表的文章。排除标准:重复性研究。文献评价:文献的来源主要是超极化激活环核苷酸门控通道基因的基础实验。所选用的36篇文献中,10篇为综述,其余均为临床或基础实验研究。资料综合:①在4种异构体中超极化激活环核苷酸门控通道1,2,4是心脏中的主要部分,超极化激活环核苷酸门控通道3只在胚胎起搏细胞中有低水平表达。起搏活性小的区域(如心室肌),超极化激活环核苷酸门控通道2的表达占优势;而起搏活性高的区域超极化激活环核苷酸门控通道4的表达占优势。此外,超极化激活环核苷酸门控通道2在整个发育阶段,是心室的主要异构体,超极化激活环核苷酸门控通道2:超极化激活环核苷酸门控通道4的相当表达量在乳鼠为5:1,成年鼠为13:1。②超极化激活环核苷酸门控通道通道缺陷可导致病窦综合征。③到目前为止,转染编码If电流的超极化激活环核苷酸门控通道基因被认为是最有可能实现生物起搏的。结论:基因治疗和细胞治疗必将成为改善生物"起搏"功能最理想的方法,以超极化激活环核苷酸门控通道基因和细胞为主的生物起搏在缓慢性心律失常治疗中必将占有一席之地。 展开更多
关键词 超极化激活核苷门控通道基因 生物起搏 综述文献
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HCN转染骨髓间充质干细胞构建生物起搏器的研究进展
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作者 李先花 陶四明 李建美 《医学综述》 2010年第24期3708-3710,共3页
超极化激活环核苷酸门控通道(HCN)是目前基因治疗心律失常的研究热点。心脏生物起搏即利用生物学及其相关技术,修复或替代受损的自律性节律点和(或)特殊传导系统,使心脏的起搏和传导功能得以恢复。心脏生物起搏器应用于临床仍面临许多问... 超极化激活环核苷酸门控通道(HCN)是目前基因治疗心律失常的研究热点。心脏生物起搏即利用生物学及其相关技术,修复或替代受损的自律性节律点和(或)特殊传导系统,使心脏的起搏和传导功能得以恢复。心脏生物起搏器应用于临床仍面临许多问题,但是随着分子生物学和基因工程技术的发展,心脏生物起搏器必将造福于人类。 展开更多
关键词 干细胞 超极化激活核苷门控通道 心脏生物起搏
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电针“神门”与“太渊”对急性心肌缺血模型大鼠心肌组织HCN4表达的研究 被引量:9
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作者 王璐璐 吴子建 +4 位作者 蔡荣林 胡玲 刘磊 余情 何璐 《湖南中医药大学学报》 CAS 2019年第5期623-626,共4页
目的探究电针经穴效应、后效应,比较电针心经原穴“神门”与肺经原穴“太渊”后在急性心肌缺血(AMI)模型大鼠心肌组织内超极化激活的环核苷酸门控通道4(HCN4)mRNA与蛋白表达的影响。方法大鼠随机分为正常组、模型组、电针“神1”组、电... 目的探究电针经穴效应、后效应,比较电针心经原穴“神门”与肺经原穴“太渊”后在急性心肌缺血(AMI)模型大鼠心肌组织内超极化激活的环核苷酸门控通道4(HCN4)mRNA与蛋白表达的影响。方法大鼠随机分为正常组、模型组、电针“神1”组、电针“神2”组、电针“太1”组、电针“太2”组,每组10只。模型组、电针组复制AMI模型,电针组在模型复制后1d予以7d的治疗,电针最后一次即刻和次日同等时间分别取材,每组6只。以RT-qPCR、western-blot法分析心肌组织HCN4mRNA相对表达量及蛋白平均相对表达量。结果HCN4 mRNA和蛋白表达量:与正常组比较,模型组表达量二者显著减少(P<0.01);与模型组比较,“神1”“神2”和“太1”组二者表达量显著增多(P<0.01);与“神1”组比较,“神2”“太1”和“太2”组二者表达量显著减少(P<0.01);与“神2”组比较,HCN4 mRNA相对表达量“太2”组显著减少(P<0.01),HCN4蛋白表达量“太2”组显著减少(P<0.01);与“太1”组比较,“太2”组二者表达量显著减少(P<0.01)。结论电针“神1”“神2”“太1”组在治疗AMI大鼠模型中,能显著增加HCN4mRNA和蛋白表达量,电针“神1”组效果最为显著,电针“神门”和“太渊”均具有后效应,二者具有相对特异性差异且在一定程度上有持续的后效应的表达。 展开更多
关键词 急性心肌缺血 神门穴 太渊穴 相对特异性 超极化激活 核苷门控通道
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转基因间充质干细胞自体移植治疗猪完全性房室传导阻滞 被引量:1
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作者 李树春 张浩 +3 位作者 段炼 龚德军 袁扬 徐志云 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期465-468,共4页
目的将携带人超极化激活环核苷酸门控通道2(hHCN2)基因的自体间充质干细胞(MSCs)移植入完全性房室传导阻滞(CHB)猪模型的希氏束中,探讨构建自体生物起搏器的可行性。方法构建包含hHCN2基因的重组腺病毒,转染猪MSCs。构建猪的CHB模型。... 目的将携带人超极化激活环核苷酸门控通道2(hHCN2)基因的自体间充质干细胞(MSCs)移植入完全性房室传导阻滞(CHB)猪模型的希氏束中,探讨构建自体生物起搏器的可行性。方法构建包含hHCN2基因的重组腺病毒,转染猪MSCs。构建猪的CHB模型。将转基因的MSCs移植入希氏束后,观察其心率变化及对儿茶酚胺的反应性。对移植部位的心肌行组织学及免疫荧光检查。结果成功构建重组腺病毒pAd.hHCN2并转染猪MSCs。自体移植于CHB动物模型希氏束后,与对照组相比,转基因MSCs显著提升了实验组的心率(P<0.01),且其心律具有儿茶酚胺反应性。移植部位心肌取样检查显示MSCs在心肌中存活并且表达hHCN2蛋白。结论在猪CHB模型中,移植入希氏束的转hHCN2基因的自体MSCs短期内可以发挥生物起搏器的功能。 展开更多
关键词 间充质干细胞 超极化激活核苷门控通道2 自体移植 完全性房室传导阻滞
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电针次髎穴治疗脊髓损伤后神经源性膀胱作用机制的实验研究 被引量:18
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作者 李炀 张润宁 刘欣 《山东中医杂志》 2020年第2期171-176,共6页
目的:观察电针次髎穴对脊髓损伤后神经源性膀胱模型大鼠膀胱组织形态、超极化激活环核苷酸门控通道1(HCN1)蛋白表达、HCN1 mRNA表达的影响,探讨电针次髎穴治疗脊髓损伤后神经源性膀胱的作用机制。方法:将30只健康成年雌性SD大鼠按照随... 目的:观察电针次髎穴对脊髓损伤后神经源性膀胱模型大鼠膀胱组织形态、超极化激活环核苷酸门控通道1(HCN1)蛋白表达、HCN1 mRNA表达的影响,探讨电针次髎穴治疗脊髓损伤后神经源性膀胱的作用机制。方法:将30只健康成年雌性SD大鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组、电针组各10只。对照组大鼠正常饲养,不进行其他干预。模型组、电针组大鼠采用改良脊髓完全横断法建立脊髓全横断模型,并在T10水平上建成完全性脊髓损伤后神经源性膀胱模型。待大鼠度过脊休克期后,电针组给予电针次髎穴治疗,日1次,连续14 d;模型组大鼠每日在自制简易电针治疗辅助装置内放置15 min,不进行其他干预。干预14 d后,取各组大鼠膀胱组织标本,HE染色观察膀胱组织形态;Western Blotting法检测各组大鼠膀胱组织HCN1蛋白相对表达;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测HCN1 mRNA表达。结果:与对照组大鼠比较,模型组和电针组大鼠膀胱壁增厚,黏膜上皮增生,固有层、平滑肌层增厚,可见炎性细胞浸润,肌细胞肥大、排列紊乱、间隙增宽;与模型组比较,电针组大鼠上述膀胱组织形态变化程度较轻。模型组和电针组大鼠膀胱组织HCN1蛋白表达较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05);电针组大鼠膀胱组织HCN1蛋白表达较模型组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和电针组大鼠膀胱组织HCN1 mRNA表达较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05);电针组大鼠膀胱组织HCN1 mRNA表达较模型组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:电针次髎穴可以促进脊髓损伤后神经源性膀胱模型大鼠膀胱功能的恢复,其机制可能与降低HCN1mRNA表达、减少HCN1数量有关。 展开更多
关键词 脊髓损伤 神经源性膀胱 电针 次髎穴 组织形态学 超极化激活核苷门控通道1
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电针对神经病理性疼痛伴发焦虑大鼠行为学及缰核HCN1表达的影响 被引量:2
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作者 彭志强 姚新苗 +3 位作者 闫坤 方菲 童思媛 方芳 《浙江中医药大学学报》 CAS 2020年第4期324-331,共8页
[目的]观察电针(electro-acupuncture,EA)对神经病理性疼痛伴发焦虑大鼠行为学的干预作用,以及对缰核中超极化激活环核苷酸门控通道蛋白1(hyperpolarization-activated cyclicnucleotide-gated channels 1,HCN1)和c-fos表达的影响,部分... [目的]观察电针(electro-acupuncture,EA)对神经病理性疼痛伴发焦虑大鼠行为学的干预作用,以及对缰核中超极化激活环核苷酸门控通道蛋白1(hyperpolarization-activated cyclicnucleotide-gated channels 1,HCN1)和c-fos表达的影响,部分阐明神经病理性疼痛伴发精神障碍的发病机制及EA的干预机制。[方法]32只雄性SD大鼠按完全随机法分为空白对照组、假手术组、坐骨神经分支选择性损伤(sciatic nerve branch selective injury,SNI)组和EA组,每组8只。SNI组和EA组以SNI法制备神经病理性疼痛模型,模型制备第8天起,EA组选取"足三里""昆仑"两穴,以EA治疗,每次30min,1次/d,共3次,其余组别不予治疗。造模前,造模后l、3、5、7、8、9和10d检测机械性缩足反射,造模后第10天采用旷场实验观察大鼠的焦虑情绪,免疫荧光检测缰核HCN1与c-fos的表达。[结果]造模第1天起,与空白对照组比较,假手术组大鼠患侧机械性痛阈各时点差异无统计学意义(P>0.05),SNI组大鼠较假手术组下降(P<0.01);与SNI组比较,EA组大鼠各时点机械性痛阈均上升(P<0.01);4组大鼠健侧机械性痛阈无明显变化(P>0.05)。旷场实验中,SNI组大鼠运动总距离、进入中央区次数、中央区运动距离均低于假手术组(P<0.01,P<0.01,P<0.05),而中央区停留时间仅低于空白对照组(P<0.05),EA组大鼠运动总距离、进入中央区次数和中央区停留时间均少于SNI组(P<0.05,P<0.01,P<0.01),中央区运动距离差异无统计学意义(P>0.05)。各组大鼠健侧内侧缰核(medial habenular nucleus,MHb)、外侧缰核外侧部分(lateral habenular nucleus lateral part,LHb L)和外侧缰核内侧部分(lateral habenular nucleus medial part,LHbM)的HCN1表达差异无统计学意义(P>0.05);与假手术组比较,SNI组患侧各部分HCN1表达水平均增高(P<0.01,P<0.01,P<0.01);与SNI组比较,EA组患侧HCN1表达水平均降低(P<0.01,P<0.01,P<0.01)。各组大鼠健侧MHb与LHb L的c-fos表达差异无统计学意义(P>0.05);与假手术组比较,SNI组健侧LHbM以及患侧MHb、LHbL的c-fos表达也显著增高(P<0.01,P<0.05,P<0.01),而两组患侧LHbM的c-fos表达差异无统计学意义(P>0.05);EA组双侧c-fos的表达均低于SNI组同侧(P<0.01,P<0.01)。[结论]大鼠患侧缰核HCN1通道可能参与了神经病理性疼痛伴发焦虑的发生,而干预缰核HCN1的表达可能是EA调控神经病理性疼痛伴发精神障碍的机制之一。 展开更多
关键词 电针 神经病理性疼痛 焦虑 缰核 超极化激活核苷门控通道蛋白1
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