超极化激活环核苷酸门控通道4和钙依赖性蛋白激酶Ⅱ在心源性猝死患者窦房结中的表达情况及其法医学意义

目的探讨心源性猝死(SCD)患者窦房结组织超极化激活环核苷酸门控通道4(HCN4)和钙依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)蛋白表达情况及其法医学意义。方法收集2018年1月至2022年12月川北医学院司法鉴定中心尸检心脏标本200份,其中SCD100份(SCD组),非SCD100份(非SCD组)。两组均进行常规苏木精-伊红(HE)染色,采用免疫组织化学方法检测两组标本窦房结组织中HCN4和CAMKⅡ蛋白表达,图像处理软件计算目的蛋白的AOD值。结果SCD以成年男性为主且在死因中以冠心病占比最多。SCD组中HCN4的AOD值低于非SCD组,CAMKⅡ的AOD值高于非SCD组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论窦房结中HCN4、CaMKⅡ异常表达可能是心源性猝死的机制,HCN4、CaMKⅡ有望成为心源性猝死的分子标记。

超极化激活环核苷酸门控通道的研究展望

超极化激活和环核苷酸门控通道（hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channels,HCN）是哺乳动物独一无二的离子通道,在1998年由Santoro等人命名。

超极化激活环核苷酸门控通道在人肺组织中的表达及功能

目的探讨超极化激活环核苷酸门控(HCN)通道在人肺组织标本及人肺上皮细胞系中的表达情况,并进行相关功能学研究。方法收集临床肺癌手术患者癌旁正常肺组织标本,体外培养人肺上皮H441。采用聚合酶链反应和蛋白质免疫印迹技术检测人肺组织标本和人肺上皮细胞中HCN通道的表达水平。应用尤斯灌流室实验装置测定H441单层细胞的短路电流,检测HCN通道的相关功能。结果聚合酶链反应结果显示,HCN 4和HCN 1通道扩增产物经琼脂糖凝胶电泳出现116 bp和91 bp的目的条带,HCN 4和HCN 1亚型在人肺组织和H441细胞系中均有mRNA水平的表达,而HCN 2和HCN 3亚型未见表达。用10%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后,在99 000和130 000分别出现HCN 4和HCN 1的目的条带,HCN 4和HCN 1亚型在人肺组织和H441细胞系中均有表达,HCN 2和HCN 3亚型未见表达。尤斯灌流室系统测定短路电流的变化,3、10、30、100、300μmol/L的ZD7288能够剂量依赖性抑制人H441单层细胞的短路电流,根据Boltzmann方程拟合后的半数抑制率为85.8μmol/L。结论 HCN 4/1通道亚型在人肺组织中具有组织和功能学表达,为临床寻求合适药物治疗肺脏相关疾病提供了理论基础。

超极化激活环核苷酸门控阳离子通道研究进展

离子通道是镶嵌在细胞膜脂质双层中的跨膜蛋白,其基本功能是产生生物电,并通过完成对某些离子的转运维持细胞内环境稳定。近十年研究表明超极化激活的阳离子通道对动物的生理过程产生非常重要的作用,其分子机制与作用于中枢神经系统调节突触的整合、突触的传递、抑制海马的长时程增强等有关,临床研究显示脑的自发放电、心脏的起搏电流、病理性疼痛的产生等与此有关。

人超极化激活环核苷酸门控通道1基因启动子区及蛋白的生物信息学分析

目的通过生物信息学预测分析人超极化激活环核苷酸门控通道1(Hyperpolarization activated cyclic nucleotide gated channel 1,HCN1)基因的启动子区的序列特征、转录因子及其结合位点和蛋白质的理化性质、信号肽、亲疏水性、跨膜区域、蛋白结构、与之相互作用的蛋白质及功能,为研究HCN1基因的表达调控及其参与伴海马硬化内侧颞叶癫痫等相关疾病的发病机制奠定理论基础。方法通过Protparam、Protscale、TMHMM、SignalP 5.0、NetPhos 3.1、Swiss-Model、Promoter 2.0、AliBaba2.1和EMBOSS等生物软件和网站分析和预测人HCN1蛋白理化性质、结构功能、定位表达、系统进化关系、蛋白相互作用以及HCN1基因启动子、CpG岛及转录因子结合位点特征等。结果信息学的预测HCN1蛋白的进化分析表明,人与黑猩猩的遗传距离最小,亲缘关系最近。人HCN1蛋白是位于质膜上不稳定的亲水性蛋白,存在2个典型的跨膜螺旋区,预测该蛋白无信号肽及核定位序列。HCN1蛋白的二级结构主要为无规则卷曲及α-螺旋,且含有多个潜在的磷酸化位点。HCN1的本体论分析:细胞组成分析表明HCN1蛋白位于质膜(GO:0005886);分子功能表现为与环磷酸腺苷(cyclic Adenosine monophosphate, cAMP)结合(GO:0030552)和电压门控离子通道活性(GO:0005244),参与细胞对cAMP的反应过程(GO:0071320)和钾离子的跨膜运输(GO:0071805)。与人HCN1存在相互作用的10个蛋白,包括HCN2、HCN4、PEX5L、MARCH7、KCTD3、GNAT3、SHKBP1、KCNQ2、FLNA和NEDD4L。主要为参与离子跨膜转运的调节(GO:0034765)和钾离子的跨膜运输(GO:0071805)。HCN1基因定位于5p12,含有8个外显子和7个内含子。HCN1基因上游至5'侧翼共2 000 bp的核苷酸序列存在3个启动子区。启动子区序列中存在1个长度为158 bp的CpG岛,HCN1基因5'调控区存在1个CAAT盒及1个TATA盒。被两种软件同时预测到的HCN1基因启动子区的转录因子结合位点有19种,包括NF-κB、NF-1、AP-1、TBP、IRF-1、c-Ets-1、Elf-1、HNF-3、HNF-1、YY1、GATA-1、RXR-α、GR、AP-2αA、ENKTF-1、C/EBPβ、C/EBPα、c-Fos和c-Jun。结论分析结果为进一步研究HCN1在癫痫发生发展过程中的作用具有重要意义,启动子区的生物信息学分析能够提高基因启动子的研究效率,为后续实验构建HCN1基因启动子表达载体及鉴定启动子功能提供理论依据。

腹侧海马CA1区HCN2通道功能下调参与慢性炎症痛

海马作为边缘系统的重要结构,在疼痛感知和疼痛慢性化中起关键作用。近期对人类和啮齿类的研究表明,腹侧海马CA1 (ventral hippocampal CA1,vCA1)的功能失调,包括神经元兴奋性降低以及与其他脑区功能连接度降低,参与调控疼痛慢性化。然而,vCA1调控疼痛的分子机制不清。超极化激活环核苷酸门控阳离子通道(hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channels,HCN),尤其是HCN1和HCN2亚型,在CA1区锥体神经元表达丰富,具有稳定膜电位等作用。该研究采用完全弗氏佐剂(complete Freund’s adjuvant,CFA)小鼠模型,探讨vCA1区HCN通道是否参与调节慢性炎症痛。

大鼠BMSCs体外诱导培养后连接蛋白40及超极化激活环核苷酸门控阳离子通道4表达的初步研究

目的观察大鼠BMSCs与窦房结组织块混合诱导培养后连接蛋白40(connexin 40,Cx40)及超极化激活环核苷酸门控阳离子通道4(hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated cation channel 4,HCN4)的表达情况,探讨大鼠BMSCs向窦房结细胞诱导分化的可能性。方法 4～6周龄SD大鼠20只,雌雄不限,体重200～300 g。取6只SD大鼠,采用贴壁筛选法分离BMSCs,取第3代细胞以羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯标记后,接种于6孔培养板内,同时制作细胞爬片。取14只SD大鼠窦房结组织,剪成0.3 cm×0.3 cm大小组织块,与标记后的第3代BMSCs混合培养,作为实验组;对照组仅单独培养第3代BMSCs。对照组培养1周及实验组混合培养1、2、3周,采用免疫组织化学方法检测Cx40和HCN4表达,并采用Image pro plus 5.0图像分析软件检测各组细胞表达Cx40和HCN4的平均积分吸光度值(mean integrated absorbance,MIA);采用实时荧光定量PCR检测细胞Cx40及HCN4 mRNA表达水平。结果免疫组织化学染色检测示,实验组混合培养1、2、3周,Cx40和HCN4 MIA值均显著高于对照组(P<0.01);且实验组随培养时间延长,Cx40和HCN4MIA值均逐渐增加,各时间点间差异均有统计学意义(P<0.05)。实时荧光定量.PCR检测示,实验组混合培养后1、2、3周,Cx40和HCN4 mRNA表达水平均显著高于对照组(P<0.01);实验组随培养时间延长,Cx40和HCN4 mRNA表达水平均逐渐增加,各时间点间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论将大鼠BMSCs与窦房结组织块体外混合培养,诱导后细胞高表达Cx40及HCN4,具有向窦房结细胞分化的可能。

超极化激活环核苷酸门控通道在颞叶癫痫的研究新进展

超极化激活环核苷酸门控通道(Hyperpolarizationactivated cyclic nucleotide gatedchannel,HCN)属于电压门控型离子通道,迄今为止发现有四个亚型:HCN1~HCN4。HCN通道的激活依赖于膜的超级化,在膜电位低于静息电位时,HCN通道被激活,产生局部紧张性电流,导致持续的钠内流,使细胞膜发生去极化。该通道分布在人体的分布并不一致,主要在神经系统和心脏中表达。目前研究表明,HCN通道既参与所在组织的正常生理功能,如睡眠和觉醒、学习和记忆、视觉和疼痛感知、神经元起搏、树突整合等,也与多种中枢神经系统疾病及所在组织的病理状态密切相关,如神经病理性疼痛、学习记忆障碍、药物成瘾和颞叶癫痫,特别是在伴海马硬化性内侧颞叶癫痫中。癫痫作为神经系统最常见的神经疾病之一,癫痫因其病因错综复杂,病理改变亦多样性,至今尚未能完全了解其全部发病机制。目前有大量的文献报道HCN与癫痫,特别是颞叶癫痫的发生发展有密切关系。因此本文就HCN通道的结构特征、分布、功能、调控及其在颞叶癫痫发生过程中的新研究进展进行综述。

Hcn1通道蛋白表达降低参与大鼠膀胱过度活动症的发生

目的观察膀胱过度活动症模型(DO)大鼠中核糖核酸(RNA)以及参与的信号通路激活和抑制情况,探讨可能参与膀胱过度活动症发生、发展的信号分子和靶点。方法膀胱颈结扎法制备DO大鼠模型,尿动力学检测评估模型构建是否成功;常规生物学方法进行RNA提取质控,后期建库测序,数据分析采用R平台完成;q-PCR和Western blot验证测序结论。结果尿动力学检测显示DO模型构建成功;6例样本的RNA-seq测序结果及后续q-PCR验证DO模型大鼠膀胱组织中6个基因高表达,2个基因低表达(P<0.001);基因组表达富集分析(gene set enrichment analysis, GSEA)显示炎症反应相关通路在DO模型大鼠膀胱组织中激活,超极化激活环核苷酸门控阳离子通道(hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channel,Hcn)活性被抑制[富集分数=-0.565,错误发现率(FDR)q=0.044];Western blot检测结果证实Hcn1通道蛋白在DO模型大鼠中的表达被抑制(P<0.001)。结论 Hcn1通道蛋白表达降低参与大鼠膀胱过度活动症的发生、发展。

紫杉醇诱发痛大鼠脊髓背角超极化活化环核苷酸门控通道4的表达及其与γ-氨基丁酸B型受体的关系

目的探讨紫杉醇诱发神经痛大鼠脊髓背角超极化活化环核苷酸门控通道4(HCN4)的表达变化及其与γ-氨基丁酸B型(GABAB)受体的关系。方法清洁级SD雄性大鼠(购自河北医科大学动物实验中心),69周龄,体重180~220 g。于实验开始第1、3、5、7 d分别腹腔注射紫杉醇2 mg/kg制备神经痛模型,行鞘内置管术成功后,随机数字表法将其分为5组(n=10):紫杉醇模型组(P组),紫杉醇模型+生理盐水组(N组),紫杉醇模型+慢病毒空载体组(BV组),紫杉醇模型+HCN4通道慢病毒组(H组),紫杉醇模型+ZD7288组(I组),10只同龄大鼠作为空白对照组(C组)。腹腔注射紫杉醇后15 d鞘内注射药物20 μl:N组注射生理盐水,BV组注射慢病毒空载体(1×108 TU/ml),H组注射HCN4通道慢病毒(1×108 TU/ml)。腹腔注射紫杉醇后21 d鞘内注射药物20 μl:I组注射HCN4通道抑制剂ZD7288(30 μg)。腹腔注射紫杉醇前1 d(T0)、注射后第14天(T1)、第21天(T2)时点分别测定50%机械缩足反应阈(MWT)。于T2时点取脊髓背角组织标本,采用免疫组织化学法和蛋白质印迹法(Western blot)法测定HCN4通道和GABAB受体的蛋白表达水平。测量数据采用均值±标准差(Mean±SD)表示,组内比较采用重复测量设计的方差分析,组间比较采用单因素方差分析。结果与T0时点[(15.4±2.7)、(14.8±2.1)、(14.6±2.1)、(14.2±2.2)、(15.2±2.1) g]比较,P组、N组、BV组、H组、I组T1时[(4.8±1.3)、(4.7±1.5)、(4.8±1.1)、(5.0±1.3)、(4.8±1.3) g] MWT均降低(t=11.326、12.177、12.932、11.298、13.449,P<0.05),差异有统计学意义;与T1时点比较,H组、I组T2时点[(9.9±1.0)、(10.3±1.5) g]MWT均升高(t=9.389、9.006,P<0.05),差异有统计学意义。与C组[(14.4±2.6) g]比较,T1时点P组、N组、BV组、H组、I组MWT均降低(t=10.394、10.009、10.537、10.117、10.335,P<0.05),差异有统计学意义;与P组[(5.2±1.7) g]比较,T2时点H组和I组[(9.9±1.0)、(10.3±1.5) g]MWT均升高(t=7.440、7.212,P<0.05),差异有统计学意义。与C组[(0.24±0.03)、(0.75±0.05) g]比较,T2时点P组脊髓背角HCN4通道蛋白表达(0.86±0.09)升高、GABAB受体蛋白表达(0.25±0.03)降低(t=14.980、20.325,P<0.05),差异有统计学意义;与P组比较,T2时点H组、I组脊髓背角HCN4通道蛋白表达(0.13±0.04、0.18±0.03)降低、GABAB受体蛋白表达水平(0.91±0.03、0.79±0.03)升高(t=16.934、16.473、33.335、28.412,P<0.05),差异有统计学意义。免疫组织化学法测定蛋白的光密度值与Western blot法测定结果一致。结论紫杉醇可通过大鼠脊髓背角HCN4通道蛋白表达水平升高,促使GABAB受体蛋白表达下调,从而诱发神经病理性痛。

电针对神经病理性疼痛伴发焦虑大鼠行为学及缰核HCN1表达的影响

[目的]观察电针(electro-acupuncture,EA)对神经病理性疼痛伴发焦虑大鼠行为学的干预作用,以及对缰核中超极化激活环核苷酸门控通道蛋白1(hyperpolarization-activated cyclicnucleotide-gated channels 1,HCN1)和c-fos表达的影响,部分阐明神经病理性疼痛伴发精神障碍的发病机制及EA的干预机制。[方法]32只雄性SD大鼠按完全随机法分为空白对照组、假手术组、坐骨神经分支选择性损伤(sciatic nerve branch selective injury,SNI)组和EA组,每组8只。SNI组和EA组以SNI法制备神经病理性疼痛模型,模型制备第8天起,EA组选取"足三里""昆仑"两穴,以EA治疗,每次30min,1次/d,共3次,其余组别不予治疗。造模前,造模后l、3、5、7、8、9和10d检测机械性缩足反射,造模后第10天采用旷场实验观察大鼠的焦虑情绪,免疫荧光检测缰核HCN1与c-fos的表达。[结果]造模第1天起,与空白对照组比较,假手术组大鼠患侧机械性痛阈各时点差异无统计学意义(P>0.05),SNI组大鼠较假手术组下降(P<0.01);与SNI组比较,EA组大鼠各时点机械性痛阈均上升(P<0.01);4组大鼠健侧机械性痛阈无明显变化(P>0.05)。旷场实验中,SNI组大鼠运动总距离、进入中央区次数、中央区运动距离均低于假手术组(P<0.01,P<0.01,P<0.05),而中央区停留时间仅低于空白对照组(P<0.05),EA组大鼠运动总距离、进入中央区次数和中央区停留时间均少于SNI组(P<0.05,P<0.01,P<0.01),中央区运动距离差异无统计学意义(P>0.05)。各组大鼠健侧内侧缰核(medial habenular nucleus,MHb)、外侧缰核外侧部分(lateral habenular nucleus lateral part,LHb L)和外侧缰核内侧部分(lateral habenular nucleus medial part,LHbM)的HCN1表达差异无统计学意义(P>0.05);与假手术组比较,SNI组患侧各部分HCN1表达水平均增高(P<0.01,P<0.01,P<0.01);与SNI组比较,EA组患侧HCN1表达水平均降低(P<0.01,P<0.01,P<0.01)。各组大鼠健侧MHb与LHb L的c-fos表达差异无统计学意义(P>0.05);与假手术组比较,SNI组健侧LHbM以及患侧MHb、LHbL的c-fos表达也显著增高(P<0.01,P<0.05,P<0.01),而两组患侧LHbM的c-fos表达差异无统计学意义(P>0.05);EA组双侧c-fos的表达均低于SNI组同侧(P<0.01,P<0.01)。[结论]大鼠患侧缰核HCN1通道可能参与了神经病理性疼痛伴发焦虑的发生,而干预缰核HCN1的表达可能是EA调控神经病理性疼痛伴发精神障碍的机制之一。

HCN通道的结构与功能及其功能调节相关的细胞分子机制研究进展

超极化激活环核苷酸阳离子门控通道(HCN通道)参与许多重要的生理活动,包括窦房结自律性、学习和记忆、突触神经递质释放、树突整合等,并且与癫痫、神经病理性疼痛、脑血管疾病的发生、发展存在一定关联。HCN通道除受细胞内cAMP调节外,还受细胞内外小分子物质(cGMP、cCMP及离子、磷脂酰肌醇丝氨酸)、蛋白质(小分子蛋白、蛋白激酶)及一些神经递质(谷氨酸、γ-氨基丁酸、乙酰胆碱、神经肽类物质、去甲肾上腺素、单胺类神经递质、NO、嘌呤类神经递质)的调节,这些物质除了调节HCN通道的开放以外,还调控该通道的表达、分布及功能特性,从而发挥相应的生理功能。

miR-1调控靶基因HCN4在风湿性心脏病心房颤动中的作用

目的通过检测风湿性心脏病(风心病)心房颤动(房颤)患者右心耳组织miR-1及其靶基因HCN4表达,探讨miR-1参与风心病房颤的可能机制。方法 36例风心病患者根据是否存在房颤,分为房颤组(AF组)和窦性心律组(SR组),术前均进行心脏彩超、心电图检测,术中取右心耳组织,应用荧光定量PCR技术检测miR-1及靶基因HCN4的表达,免疫组化、Western Blot方法检测HCN4蛋白表达,应用膜片钳技术检测右心耳心肌细胞起搏电流(If)。结果 AF组miR-1基因表达小于SR组[(0.005 0±0.000 7)vs.(0.009 4±0.002 5),P <0.05];而HCN4基因表达水平AF组高于SR组[(0.255 2±0.019 4)vs.(0.159 2±0.013 1),P <0.05];免疫组化AF组HCN4蛋白表达较窦性心律组增强;Western Blot检测HCN4蛋白表达水平AF组高于SR组[(1.170 2±0.055 98)vs.(0.360 6±0.017 78),P <0.05];右心耳心肌细胞起搏电流改变,AF组半稳态激活电压(V1/2)为(-88±5.9)mV,稳态激活曲线斜率(K)为(8.2±1.8);SR组V1/2为(-97±4.5)mV,K为(11.4±2.6)。结论风心病房颤患者miR-1表达降低,调控HCN4基因、蛋白表达增高,导致房颤心肌细胞起搏电流的改变,可能参与风心病房颤的发生。

CREB激活促进神经痛大鼠脊髓背角HCN4转录的实验研究

目的探讨CREB激活促进神经痛大鼠脊髓背角HCN4转录的信号机制。方法雄性成年SD大鼠随机分为6组:Sham组,Sham+Vehicle组,CCI+Vehicle组,CCI+H-89(PKA抑制剂),CCI+KN-93(CaMKⅡ抑制剂),CCI+Naphthol AS-E(CREB抑制剂)。各组大鼠在CCI术后分别注射0.005%DMSO、H-89、KN-93或Naphthol AS-E,在CCI术前,术后1、3、5、7 d检测各组大鼠给药1 h后的机械刺激缩足反射阈值(MWT);实时荧光定量PCR检测HCN4 mRNA表达;Western blot检测脊髓(L_(4)~L_(6))背角HCN4、PKA、p-PKA、CaMKⅡ、p-CaMKⅡ、CREB和p-CREB表达;EMSA检测CREB与HCN4启动子的DNA结合活性。结果与Sham组相比,CCI+Vehicle组在1、3、5、7 d的MWT显著降低(P<0.05),脊髓背角HCN4 mRNA表达明显上调(P<0.05),HCN4、PKA、p-PKA、CaMKⅡ、p-CaMKⅡ、CREB和p-CREB蛋白表达明显上调(P<0.05);与CCI+Vehicle组相比,H-89、KN-93或Naphthol AS-E抑制剂组MWT显著上调(P<0.05),HCN4、PKA、p-PKA、CaMKⅡ、p-CaMKⅡ、CREB和p-CREB蛋白表达显著下降(P<0.05),HCN4 mRNA表达显著减少(P<0.05);与Sham组相比,CCI+Vehicle组背角CREB与HCN4启动子的DNA结合活性升高,但H-89、KN-93或Naphthol AS-E处理后CREB与HCN4启动子的DNA结合活性减弱。结论神经痛大鼠脊髓背角PKA和CaMKII激活,导致转录因子CREB与HCN4基因启动子结合,促进HCN4转录和蛋白表达。

右美托咪定对大鼠利多卡因局部静脉麻醉的影响机制

目的探讨右美托咪定对利多卡因局部静脉麻醉(IVRA)的影响及其机制。方法建立大鼠尾静脉IVRA模型给药后,分别通过甩尾和夹尾试验评估大鼠尾静脉IVRA镇痛和麻醉效果。结果右美托咪定可以延长利多卡因IVRA镇痛和麻醉持续时间。哌唑嗪、育亨宾以及ZD7288不影响右美托咪定延长利多卡因IVRA持续时间的作用。毛喉素可以逆转右美托咪定延长利多卡因IVRA持续时间的作用。结论右美托咪定通过抑制超极化激活环核苷酸门控通道,延长利多卡因IVRA持续时间。

不同浓度腺苷对急性动脉栓塞大鼠神经功能、脑梗死面积及HCN1蛋白的作用机制

目的探究不同浓度腺苷对急性动脉栓塞大鼠神经功能、脑梗死面积及超极化激活环核苷酸门控阳离子(HCN)1蛋白的作用机制。方法50只大鼠随机分为假手术(sham)组、大脑中动脉栓塞(MCAO)组、MCAO+低剂量脉苷干预(AD1)组、MCAO+中剂量腺苷干预(AD2)组和MCAO+高剂量腺苷干预(AD3)组,除sham组,其余各组建立大鼠MCAO模型。比较各组神经功能评分和脑组织含水量;用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)法比较各组脑梗死面积;苏木素-伊红(HE)染色比较脑组织形态变化;Western印迹检测脑组织中HCN1蛋白表达。结果MCAO组神经功能评分明显高于sham组(P<0.05);干预后,AD1、AD2、AD3组神经功能评分显著低于MCAO组,且神经功能评分逐渐明显递减(P<0.05)。MCAO组脑梗死面积明显大于sham组(P<0.05);与MCAO组相比,AD1、AD2、AD3组脑梗死面积显著减小,且随着腺苷浓度升高,脑梗死面积呈明显剂量依赖性减小(均P<0.05)。MCAO组脑含水量显著多于sham组(P<0.05);干预后AD1、AD2、AD3组脑含水量明显少于MCAO组,且AD1、AD2、AD3组脑含水量呈明显剂量依赖性减小(均P<0.05)。Western印迹结果显示,与sham组相比,MCAO组脑组织中HCN1蛋白表达显著降低(P<0.05);干预后AD1、AD2、AD3组脑组织中HCN1蛋白表达明显高于MCAO组,且随着腺苷浓度升高,脑组织中HCN1蛋白表达呈明显剂量依赖性升高(均P<0.05)。结论腺苷对急性MCAO大鼠神经功能有一定的保护作用,能有效减小脑梗死、激活HCN1蛋白表达,腺苷的改善作用随着浓度升高改善效果越显著,呈剂量依赖性。

mHCN2和mHCN4基因在乳鼠心室肌中的表达及其起搏电流的特性

目的分析乳鼠心室肌mHCN2和mHCN4基因的表达及其起搏电流的特性。方法通过酶消化法分离乳鼠心室肌细胞,用全细胞膜片钳技术记录If电流并研究其特性;采用SYBR-GreenI染料进行实时定量PCR,测定乳鼠心室肌起搏基因mHCN2和mHCN4的表达。结果全细胞膜片钳记录到心室肌细胞If电流,得到电流密度-电压曲线,其激活电压约为-75mV;实时定量PCR检测mHCN2∶mHCN4为(5.56±1.35)∶1。结论乳鼠心室肌细胞有超极化激活、可被Cs+阻断的If电流;其基因表达以mHCN2为主。

HCN2在胃的分布及与递质共存的关系

目的研究超极化激活的环化核苷酸门控通道亚型2(HCN2)在胃中存在的状况以及与神经递质的共存情况,为探讨胃肠动力的调节提供理论依据。方法采用免疫荧光组织化学双标记的方法,在大鼠胃中对PGP9.5与HCN2进行双标记、对HCN2分别与SP、CGRP以及VIP进行双标记。结果HCN2是以串珠样结构分布于胃黏膜间神经纤维末梢。HCN2与SP、CGRP和VIP在胃黏膜和平滑肌间隙中存在双标记。结论发现HCN2在胃黏膜和平滑肌间隙中存在,并与神经递质共存,提示HCN2可能在胃肠道的动力调节方面起着较为重要的作用。

心房颤动大鼠心房肌HCN2、HCN4表达及青山健心片的干预作用

目的分析心房肌超极化激活环核苷酸门控阳离子通道2(HCN2)及超极化激活环核苷酸门控阳离子通道4(HCN4)基因在心房颤动大鼠心肌中的表达,观察青山健心片对HCN2、HCN4 mRNA及蛋白表达的干预作用,揭示其治疗心房颤动的机制。方法取阵发性心房颤动大鼠心房组织,采用蛋白免疫印迹法(Western-Blot)及荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测HCN2、HCN4的表达,分析青山健心片的干预作用。结果阵发性心房颤动大鼠HCN2、HCN4 mRNA及蛋白表达量均高于对照组,青山健心片及美托洛尔均能降低HCN2、HCN4 mRNA及蛋白表达。结论青山健心片通过下调HCN2、HCN4表达,影响超极化激活阳离子电流(If),从而减少心房颤动发作。