人胎盘间充质干细胞移植通过降低超氧化物歧化酶1和解耦联蛋白-2的表达提高卵巢功能

目的探讨人胎盘间充质干细胞(h PMSC)移植治疗对环磷酰胺所致卵巢早衰(POF)模型SD大鼠超氧化物歧化酶1(SOD1)和解耦联蛋白-2(UCP-2)表达的影响。方法将60只雌性SD大鼠随机分为4组(n=15):空白对照组,POF模型组,治疗对照组,h PMSC移植组。以首计量50 mg/kg、维持剂量8 mg/kg连续14 d给大鼠腹腔注射环磷酰胺溶液建立POF模型,观察大鼠动情周期变化,采用ELISA方法测定血清中雌二醇(E2)、促卵泡生成素(FSH)、抗苗勒氏管激素(AMH)、活性氧族(ROS)、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHd G)水平;HE染色方法检测卵巢组织形态学及卵泡计数,VG染色法观察卵巢组织纤维化情况;采用免疫组织化学和Western blotting法测定SOD1和UCP-2蛋白表达。结果 ELISA结果显示:模型组血清FSH水平[(10.60±1.0)IU/L]明显高于空白对照组[(5.83±0.92)IU/L](P<0.01),而E2、AMH水平[(35.52±10.27)ng/L、(2 090.6±397.5)ng/L]则明显低于空白对照组[(65.62±3.76)ng/L、(3 636.39±204.46)ng/L],差异有统计学意义(P<0.01)。与空白对照组相比h PMSC移植组血清中ROS和8-OHd G升高(P<0.05)。卵泡计数显示h MSC移植组闭锁卵泡数(5.36±1.11)显著低于治疗对照组(8.01±2.22)和POF模型组(11.21±1.69)(P<0.05)。与治疗对照组相比,h PMSC移植组中ROS和8-OHdG显著下降(P<0.05)。VG染色显示,与治疗对照组比,hP MSC移植组纤维化面积比例显著降低(P<0.05)。Western blotting结果显示,与治疗对照组相比,hP MSC移植组中SOD1和UCP-2蛋白表达量显著下降(P<0.05),而hP MSC移植组与对照组则差异无统计学意义(P>0.05);免疫组织化学结果显示模型组中SOD1和UCP-2蛋白表达相较于治疗对照组是降低的,而hP MSC移植组相较于空白对照组则差异无统计学意义。结论 hP MSC移植改善POF模型SD大鼠氧化应激,降低SOD1及UCP-2表达,起到保护卵巢线粒体功能的作用。

脑缺血/再灌注致小鼠神经元退行性变进程中自由基水平和SOD2表达相关

目的探讨脑缺血/再灌注(I/R)致神经元退行性变所涉及的自由基和SOD2表达的时程变化及其相互关系。方法抽取并回输约40%总血量加双侧颈总动脉夹闭20 min建立I/R损伤模型。组织学检测神经元损伤;Mor-ris水迷宫检测学习记忆能力;分光光度计法检测SOD2活性和丙二醛(MDA)含量;Western blot检测SOD2蛋白表达。结果与假手术组相比,I/R组小鼠学习记忆能力显著降低,海马MDA含量进行性显著升高(P<0.05);I/R术后5、15、30和60 d海马SOD2活性(14.69±2.49 U/mg.pro,14.15±2.41 U/mg.pro,15.07±2.67 U/mg.pro,15.55±2.64 U/mg.pro)和蛋白表达(9.20±1.23,5.40±1.03,4.90±0.92,5.60±0.59)均显著低于假手术组(P<0.05);海马出现进行性神经元核固缩加重和神经元丢失。结论 I/R致小鼠神经元退行性变与SOD2蛋白表达和活性保持低水平状态而氧化应激进行性增强有关。

Sirt3在晚期糖基化终产物诱导的心肌老化中的作用及机制

目的研究沉默信息调节因子3(Sirt 3)在晚期糖基化终产物(AGEs)诱导心肌老化过程中的作用,并初步探讨黄山药总皂苷(TSDP)改善心肌老化的机制。方法提取原代心肌细胞,AGEs干预诱导细胞老化,转染小干扰RNA(siRNA)敲降Sirt3表达。免疫印迹实验检测P16、P53、超氧化物歧化酶-2(SOD2)及SIRT3的蛋白表达水平。半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色试剂盒检测细胞老化。2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯探针(DCFH-DA)检测细胞内活性氧(ROS)。TSDP预干预AGEs诱导的心肌老化后,采用SA-β-Gal染色试剂盒检测细胞老化。采用GraphPad Prism统计软件进行数据分析。组间比较采用单因素方差分析。结果和未转染慢病毒的对照组相比,转染阴性参照NC siRNA后加入AGEs的干预组SIRT3及SOD2的表达减少,P53的表达增加,SA-β-Gal染色阳性细胞比例及活性氧的水平增加。转染Sirt 3 siRNA后加入AGEs的干预组与对照组相比,SIRT3及SOD2表达减少,SA-β-Gal染色阳性细胞比例及活性氧水平升高,且与转染Sirt 3 siRNA组相比,P53表达水平进一步增加。转染NC siRNA的TSDP预处理AGEs干预组较转染NC siRNA后AGEs干预组SA-β-Gal染色阳性细胞比例减少,但转染Sirt 3 siRNA的TSDP预处理AGEs干预细胞后上述TSDP引起的SA-β-Gal改变作用消失。结论AGEs可能是通过下调Sirt3的表达水平,减少抗氧化物蛋白SOD2的表达,加重线粒体氧化应激,促进AGEs诱导的心肌老化进程。TSDP可能通过调控Sirt3的表达水平而影响老化。